穆晶 劉子臣 宋婧 李琨 車(chē)南穎 劉紅剛

淋巴結(jié)結(jié)核(tuberculosis lymphadenitis，TBLN)是最常見(jiàn)的肺外結(jié)核，占肺外結(jié)核的30%～40%，其中以頸部淋巴結(jié)結(jié)核最為多見(jiàn)，占淋巴系統(tǒng)結(jié)核的80%～90%[1-3]。在耐多藥結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家中，快速診斷頸部淋巴結(jié)結(jié)核及其耐藥性，對(duì)頸部淋巴結(jié)結(jié)核的早期診斷和早期治療，以及對(duì)結(jié)核病疫情的控制均具有重要意義。

病理學(xué)診斷是確診結(jié)核病的重要手段，尤其在痰菌陰性肺結(jié)核和肺外結(jié)核的診斷中發(fā)揮著重要作用。傳統(tǒng)病理學(xué)檢查主要通過(guò)組織形態(tài)學(xué)觀察到肉芽腫病變伴或不伴壞死，以及抗酸染色查找抗酸桿菌診斷結(jié)核病。近年來(lái)，基于核酸擴(kuò)增技術(shù)的分子病理學(xué)方法，應(yīng)用于石蠟包埋組織(formalin fixed paraffin-embedded，F(xiàn)FPE)，通過(guò)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)特異基因序列確診結(jié)核病。作為傳統(tǒng)病理學(xué)檢查的補(bǔ)充，分子病理學(xué)方法明顯提高了MTB的陽(yáng)性檢出率，并可通過(guò)檢測(cè)MTB耐藥相關(guān)基因的突變情況，篩選可能的耐藥結(jié)核病患者。

目前常用的分子病理學(xué)方法有熒光定量PCR技術(shù)、利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)(GeneXpert MTB/RIF，簡(jiǎn)稱(chēng)“GeneXpert”)、探針熔解曲線技術(shù)等，其中探針熔解曲線技術(shù)具有快速、敏感度和特異度高等特點(diǎn)，在結(jié)核病耐藥性檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用。在結(jié)核病患者的臨床分離菌株和FFPE 標(biāo)本的利福平和異煙肼耐藥性檢測(cè)中，探針熔解曲線技術(shù)檢測(cè)結(jié)果與表型藥物敏感性試驗(yàn)(簡(jiǎn)稱(chēng)“藥敏試驗(yàn)”)的檢測(cè)結(jié)果均具有較高的一致性[4-5]。筆者以熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(fluorescent quantitative polymerase chain reaction，F(xiàn)Q-PCR)和探針熔解曲線方法檢測(cè)頸部淋巴結(jié)結(jié)核FFPE標(biāo)本的MTB-DNA和利福平、異煙肼耐藥相關(guān)基因，以評(píng)估分子病理學(xué)診斷頸部淋巴結(jié)結(jié)核及其耐藥性的臨床應(yīng)用價(jià)值。

資料和方法

一、材料

1. 研究對(duì)象：搜集2010年3月至2013年10月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院病理科病理組織形態(tài)為慢性肉芽腫性炎伴或不伴壞死(圖1)、符合納入標(biāo)準(zhǔn)的全部頸部淋巴結(jié)FFPE標(biāo)本97份(例)，作為結(jié)核組；其中男34例(35.1%)，女63例(64.9%)，年齡15～70歲，平均年齡(32.01±1.22)歲。選取同期符合納入標(biāo)準(zhǔn)的全部其他淋巴結(jié)病變20份(例)，作為非結(jié)核組，包括結(jié)節(jié)病6例，淋巴瘤6例，壞死性淋巴結(jié)炎3例，巨大淋巴結(jié)增生癥(Castleman病)3例，淋巴結(jié)反應(yīng)性增生2例。其中男11例(55.0%)，女9例(45.0%)，年齡20～70歲，平均年齡(43.85±3.77)歲。

2. 納入標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)核組患者納入標(biāo)準(zhǔn)為病理形態(tài)學(xué)符合結(jié)核病病理變化特征，臨床癥狀和體征符合頸部淋巴結(jié)結(jié)核，抗結(jié)核藥物治療好轉(zhuǎn)證實(shí)為淋巴結(jié)結(jié)核，以臨床最后診斷為標(biāo)準(zhǔn)；其他淋巴結(jié)病變患者納入標(biāo)準(zhǔn)為通過(guò)病理學(xué)或臨床檢測(cè)結(jié)果明確診斷為其他淋巴結(jié)疾病。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1. 標(biāo)本處理：所有淋巴結(jié)標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅(HE)染色，顯微鏡下觀察組織學(xué)形態(tài)。

圖1 頸部淋巴結(jié)結(jié)核病理形態(tài)學(xué)顯示病變組織呈慢性肉芽腫性改變(HE ×200)圖2 Z-N 抗酸染色后觀察到紅色桿狀、略彎曲、串珠狀抗酸桿菌(油鏡 ×1000)

2. 抗酸染色法：所有117例患者的標(biāo)本采用萋-尼(Ziehl-Neelsen，Z-N)染色法查找抗酸桿菌，染色試劑盒(BA-4090B)購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。石蠟組織切片厚4 μm，以常規(guī)二甲苯脫蠟，以梯度乙醇脫水(高濃度到低濃度)后入水；經(jīng)石碳酸復(fù)紅染色1 h，水洗后鹽酸乙醇分化數(shù)秒至無(wú)紅色，再進(jìn)行水洗；采用亞甲藍(lán)溶液染色20 s，水洗；以梯度乙醇脫水和二甲苯透明后，采用中性膠封片，應(yīng)用油鏡( ×1000)進(jìn)行觀察。結(jié)果判定：觀察到紅色桿狀、略彎曲、串珠狀抗酸桿菌為抗酸染色陽(yáng)性(圖2)。

3. FQ-PCR方法：所有117例患者以FQ-PCR技術(shù)檢測(cè)MTB-DNA。FFPE標(biāo)本的DNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司，DNA提取按照試劑盒操作手冊(cè)進(jìn)行。MTB核酸測(cè)定試劑盒(熒光PCR法)購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，檢測(cè)MTB特異基因序列IS6110。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為羅氏Cobas Z 480全自動(dòng)熒光定量PCR分析儀。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，出現(xiàn)典型S形擴(kuò)增曲線為陽(yáng)性。

4. 分枝桿菌培養(yǎng)：52例結(jié)核組患者頸部淋巴結(jié)病灶清除組織、膿液同時(shí)送檢MTB培養(yǎng)，其中改良羅氏法23例，BACTEC MGIT 960(簡(jiǎn)稱(chēng)“MGIT 960”)液體培養(yǎng)法29例。改良羅氏法：接種后的改良羅氏培養(yǎng)基置于37 ℃培養(yǎng)，每周檢查一次細(xì)菌的生長(zhǎng)狀態(tài)直至有菌落生長(zhǎng)為止。以MTB標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv作為陽(yáng)性對(duì)照，以空白管作為陰性對(duì)照。MGIT 960液體培養(yǎng)法：取2 ml膿液標(biāo)本用于培養(yǎng)，嚴(yán)格按照MGIT 960系統(tǒng)操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，培養(yǎng)時(shí)間設(shè)定為42 d。儀器報(bào)告陽(yáng)性后，取培養(yǎng)液進(jìn)行涂片鏡檢，若查到抗酸桿菌則為陽(yáng)性；若未見(jiàn)抗酸桿菌則為陰性。

5. 探針熔解曲線檢測(cè)耐藥基因突變：對(duì)41例FQ-PCR檢查結(jié)果為陽(yáng)性且MTB-DNA含量能夠

滿足耐藥突變檢測(cè)下限的患者進(jìn)行探針熔解曲線法檢測(cè)利福平、異煙肼耐藥突變情況。MTB利福平耐藥突變檢測(cè)試劑盒(熒光PCR熔解曲線法；廈門(mén)致善生物科技股份有限公司)檢測(cè)rpoB基因利福平耐藥決定區(qū)507～533共27個(gè)氨基酸密碼子(81 bp)的突變；MTB異煙肼耐藥突變檢測(cè)試劑盒(熒光PCR熔解曲線法；廈門(mén)致善生物科技股份有限公司)檢測(cè)ahpC啟動(dòng)子區(qū)(-44～-30、-15～3位點(diǎn))、inhA94 密碼子、inhA啟動(dòng)子區(qū)(-17～-8位點(diǎn))、katG315密碼子突變。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。熔解曲線的熔點(diǎn)(Tm值)低于陽(yáng)性對(duì)照2 ℃及以上判定為突變。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、抗酸染色法與FQ-PCR技術(shù)的敏感度和特異度

97份(例)頸部淋巴結(jié)結(jié)核FFPE標(biāo)本中抗酸染色查到抗酸桿菌22份(例)，敏感度為22.7%；FQ-PCR技術(shù)檢測(cè)MTB-DNA陽(yáng)性65份(例)，敏感度為67.0%，F(xiàn)Q-PCR技術(shù)檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于抗酸染色法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=38.53，P<0.001)。非結(jié)核組標(biāo)本抗酸染色法與FQ-PCR法檢測(cè)結(jié)果均為陰性，兩者特異度均為100.0%。見(jiàn)表1。

二、分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果

52例結(jié)核組患者行病灶清除術(shù)的同時(shí)送檢頸部淋巴結(jié)病灶組織、膿液進(jìn)行MTB培養(yǎng)，其中改良羅氏法23例， MGIT 960液體培養(yǎng)法29例，結(jié)果均未見(jiàn)分枝桿菌生長(zhǎng)。

表1 抗酸染色法與FQ-PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果分析

注均以臨床最后診斷為標(biāo)準(zhǔn)；敏感度=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%，特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%，陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%，符合率=(真陽(yáng)性例數(shù)+真陰性例數(shù))/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù)+真陰性例數(shù))×100%

表2 探針熔解曲線法檢測(cè)14例利福平和(或)異煙肼耐藥情況

注a：無(wú)法評(píng)估；b：未行分枝桿菌培養(yǎng)

三、探針熔解曲線法檢測(cè)利福平和異煙肼耐藥突變情況

對(duì)41例FQ-PCR檢查結(jié)果為陽(yáng)性且MTB-DNA含量滿足耐藥突變檢測(cè)下限的患者標(biāo)本進(jìn)行耐藥突變檢測(cè)，利福平和異煙肼可評(píng)估標(biāo)本分別為10份(例)和27份(例)，其中利福平耐藥1份(例)，異煙肼耐藥13份(例)。見(jiàn)表2。

討 論

一、傳統(tǒng)淋巴結(jié)結(jié)核病理學(xué)診斷及細(xì)菌學(xué)診斷的局限性

傳統(tǒng)病理學(xué)診斷結(jié)核病主要依靠組織形態(tài)學(xué)觀察和抗酸染色查找抗酸桿菌，然而形態(tài)學(xué)改變并不特異，抗酸染色由于FFPE組織中荷菌量較少，單靠肉眼直接觀察易出現(xiàn)遺漏，存在敏感度和特異度低、費(fèi)時(shí)費(fèi)力等不足[6-7]。劉燕翔等[8]對(duì)144例頸部肉芽腫樣病變的病理組織采用抗酸染色法查找抗酸桿菌，陽(yáng)性檢出率為4.86%。車(chē)南穎等[9]的研究中，淋巴結(jié)結(jié)核抗酸染色陽(yáng)性率為27.5%。淋巴結(jié)細(xì)針穿刺或從破潰部位取膿液行抗酸桿菌涂片檢查和MTB培養(yǎng)仍作為常規(guī)檢查手段應(yīng)用于臨床，并以病變中培養(yǎng)出分枝桿菌作為診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。Purohit 等[10]的研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)針穿刺涂片和膿液培養(yǎng)的陽(yáng)性率分別為11.7%和23.1%。劉燕翔等[8]的研究中，頸部肉芽腫病變的細(xì)菌培養(yǎng)法陽(yáng)性檢出率為18.75%。肺外結(jié)核標(biāo)本的分枝桿菌培養(yǎng)存在陽(yáng)性率低、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，不能滿足臨床早期、快速診治的需要[11-12]，所以迫切需要能夠快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(Mycobateriumtuberculosiscomplex，MTBC)及其耐藥性的新方法和新工具。

二、分子病理學(xué)診斷結(jié)核病

結(jié)核病的病理學(xué)確診需要分子病理學(xué)檢查作為重要的輔助手段，通過(guò)檢測(cè)MTB特異基因如IS6110、16srDNA、Mpt64等可以明顯提高結(jié)核病的陽(yáng)性診斷率。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究及本科室的前期研究均證實(shí)基于核酸擴(kuò)增技術(shù)的分子生物學(xué)檢測(cè)方法在FFPE組織中檢測(cè)MTBC，明顯提高了敏感度，縮短了診斷時(shí)間，且在多種組織FFPE標(biāo)本中有良好的應(yīng)用價(jià)值，為結(jié)核病的診斷和鑒別診斷提供了可靠依據(jù)，大大提高了結(jié)核病診斷的準(zhǔn)確性[13-18]。由于分子病理學(xué)檢查方法具有較高的敏感度和特異度，2017年《中國(guó)結(jié)核病病理學(xué)診斷專(zhuān)家共識(shí)》將其作為結(jié)核病病理學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[19]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是目前臨床應(yīng)用最為廣泛的分子病理檢測(cè)技術(shù)，其主要優(yōu)勢(shì)在于操作簡(jiǎn)便、成本低廉、快速敏感等。本研究結(jié)核組97份(例)標(biāo)本中，抗酸染色查到抗酸桿菌22份(例)，敏感度為22.7%；FQ-PCR 技術(shù)檢測(cè)MTB-DNA陽(yáng)性65份(例)，敏感度為67.0%；FQ-PCR技術(shù)檢測(cè)敏感度明顯高于抗酸染色法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。非結(jié)核組兩種方法檢測(cè)結(jié)果均為陰性，特異度均為100.0%。

三、分子病理學(xué)診斷耐藥結(jié)核病

MTB的耐藥基因突變是產(chǎn)生耐藥結(jié)核病的最主要原因，利用分子病理技術(shù)檢測(cè)組織標(biāo)本中的MTB是否發(fā)生耐藥基因突變是病理學(xué)診斷耐藥結(jié)核病的重要手段。如通過(guò)檢測(cè)rpoB基因突變可以檢測(cè)利福平耐藥MTB，通過(guò)檢測(cè)katG、inhA、ahpC等基因突變可以檢測(cè)異煙肼耐藥MTB。

常用的技術(shù)有實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)和探針雜交技術(shù)，其中最具代表性的技術(shù)是GeneXpert檢測(cè)系統(tǒng)。Xpert技術(shù)以rpoB基因?yàn)榘谢颍瑫r(shí)檢測(cè)MTB和利福平耐藥。Polepole等[20]評(píng)估了GeneXpert技術(shù)用FFPE標(biāo)本診斷肺外結(jié)核和利福平耐藥的準(zhǔn)確性。研究共納入100例臨床懷疑結(jié)核病的FFPE標(biāo)本(包括淋巴結(jié)病變64例，男性生殖道病變10例，腹部病變8例，女性生殖系統(tǒng)病變5例，乳腺組織病變5例，滑膜組織病變4例，皮膚病變2例，舌部病變1例，甲狀腺病變1例)，進(jìn)行GeneXpert和PCR技術(shù)檢測(cè)MTB特異基因序列IS6110，同時(shí)進(jìn)行Z-N抗酸染色，以組織病理學(xué)診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示，在淋巴結(jié)組織中，GeneXpert檢測(cè)準(zhǔn)確率為41%，稍稍?xún)?yōu)于Z-N抗酸染色或PCR檢測(cè)；在非淋巴結(jié)組織中，PCR檢測(cè)的敏感度為82%，明顯高于GeneXpert檢測(cè)(P=0.004)。此外，GeneXpert方法檢測(cè)到3例利福平耐藥，14例利福平耐藥“不確定”。García-Basteiro等[21]對(duì)30例尸檢的肺組織標(biāo)本進(jìn)行MTB篩查，以real-time PCR和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)檢測(cè)方法確認(rèn)MTB-DNA的存在，依據(jù)微生物學(xué)和組織病理學(xué)結(jié)果診斷結(jié)核??；以GeneXpert方法對(duì)診斷出的8例肺結(jié)核標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中有7例陽(yáng)性、1例陰性，陰性患者的PCR和LAMP檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，界定為GeneXpert假陰性；GeneXpert技術(shù)在肺組織的檢測(cè)敏感度為87.5%，特異度為95.7%，GeneXpert與PCR 和LAMP方法對(duì)肺組織的檢測(cè)一致率為93.6%，對(duì)腦組織和肝組織則均為100.0%；未檢測(cè)到利福平耐藥。Che等[5]對(duì)82例臨床疑似結(jié)核病的淋巴結(jié)病變同時(shí)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)、GeneXpert及熔解曲線FFPE 標(biāo)本檢測(cè)，結(jié)果顯示熔解曲線FFPE標(biāo)本檢測(cè)利福平耐藥與GeneXpert檢測(cè)結(jié)果完全吻合。這些研究都初步驗(yàn)證了分子病理學(xué)方法檢測(cè)FFPE標(biāo)本診斷結(jié)核病及其耐藥性的可行性。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法與探針熔解曲線分析方法相結(jié)合也可以應(yīng)用于耐藥基因的檢測(cè)。目前應(yīng)用比較多的探針雜交技術(shù)有膜反向雜交法和基因芯片法等。這些技術(shù)都可以實(shí)現(xiàn)一次實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)多種抗結(jié)核藥物的耐藥相關(guān)基因突變。本研究以探針熔解曲線方法檢測(cè)41份(例)PCR陽(yáng)性頸部淋巴結(jié)結(jié)核FFPE標(biāo)本的利福平和異煙肼耐藥基因突變情況，結(jié)果顯示利福平耐藥1份(例)，異煙肼耐藥13份(例)。與Zhao等[22]報(bào)道的我國(guó)利福平單耐藥情況較為一致。本研究中，52例患者病灶清除術(shù)同時(shí)送檢頸部淋巴結(jié)病灶組織、膿液進(jìn)行MTB培養(yǎng)(改良羅氏培養(yǎng)法或MGIT 960液體培養(yǎng)法)，結(jié)果均未見(jiàn)分枝桿菌生長(zhǎng)，更無(wú)法進(jìn)一步進(jìn)行藥敏試驗(yàn)獲得藥敏結(jié)果。因此，分子病理技術(shù)檢測(cè)FFPE標(biāo)本MTB及其耐藥性，可以在一定程度上彌補(bǔ)傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)診斷陽(yáng)性率低的不足。

四、分子病理學(xué)診斷耐藥結(jié)核病的局限性及改良措施

本研究中利福平耐藥可評(píng)估標(biāo)本僅為10份(例)，可評(píng)估率為24.4%(10/41)，異煙肼可評(píng)估標(biāo)本27份(例)，可評(píng)估率為65.9%(27/41)。分析可評(píng)估率較低的原因可能與以下因素有關(guān)：(1)FFPE標(biāo)本荷菌量少。受組織標(biāo)本消化前處理效果影響，對(duì)于較大組織，4 μm厚度切取8～10片即達(dá)極限，而活檢組織標(biāo)本本身所含病變成分較少，可能獲取的菌體數(shù)量就更加有限。另外，F(xiàn)FPE樣本提取得到的DNA，大部分是人類(lèi)基因組DNA，只有少部分是菌類(lèi)DNA，可能對(duì)擴(kuò)增效率產(chǎn)生一定抑制。FFPE 樣本提取的DNA也存在一定的碎片化，且存儲(chǔ)時(shí)間越長(zhǎng)，碎片化或降解越嚴(yán)重。這些原因使得FFPE標(biāo)本提取到的有效DNA有限。(2)試劑敏感度對(duì)DNA含量要求較高，F(xiàn)FPE標(biāo)本提取的DNA中MTB-DNA含量需要達(dá)到耐藥試劑所需求的MTB-DNA檢測(cè)底限。應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，單純MTB-DNA檢測(cè)底限為500～1000 拷貝/ml，而利福平耐藥需要的檢測(cè)下限為20 000拷貝/ml，異煙肼耐藥需要的檢測(cè)下限為10 000拷貝/ml。所以，在MTB-DNA陽(yáng)性樣本中，會(huì)遇到耐藥試劑無(wú)法評(píng)估的樣本。

對(duì)于如何最大限度地挖掘FFPE樣本MTB-DNA和耐藥檢測(cè)的檢測(cè)效率，筆者分析可以通過(guò)以下途徑：首先，用于提取DNA的蠟塊應(yīng)由病理醫(yī)師核對(duì)HE切片后確定，選取形態(tài)學(xué)改變典型、病變成分多、易于富集菌的組織樣本進(jìn)行檢測(cè)；其次，建議選取2年內(nèi)的FFPE標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，避免由于儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、DNA降解造成的假陰性結(jié)果；此外，對(duì)于拷貝數(shù)小于耐藥試劑檢測(cè)下限50%以?xún)?nèi)的樣本，可以嘗試將DNA適當(dāng)濃縮之后再進(jìn)行耐藥檢測(cè)。

五、本研究的不足之處

筆者在本文的撰寫(xiě)過(guò)程中查詢(xún)了所有患者的病灶組織、膿液培養(yǎng)結(jié)果，初衷是要與組織標(biāo)本的分子病理結(jié)果作比較分析，以評(píng)估分子病理學(xué)檢測(cè)MTB及其耐藥性的敏感度和準(zhǔn)確性。實(shí)際查詢(xún)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)所有進(jìn)行MTB培養(yǎng)的患者培養(yǎng)結(jié)果均為“分枝桿菌未生長(zhǎng)”。查詢(xún)病歷發(fā)現(xiàn)多數(shù)患者是在外院進(jìn)行了穿刺涂片或活檢后考慮結(jié)核病，并且經(jīng)過(guò)了抗結(jié)核藥物治療，這些因素導(dǎo)致了在我院沒(méi)有進(jìn)行細(xì)菌學(xué)診斷或是細(xì)菌難以生長(zhǎng)(有文獻(xiàn)報(bào)道抗結(jié)核藥物治療影響培養(yǎng)結(jié)果[5])。因此，沒(méi)有培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)驗(yàn)證分子病理學(xué)檢測(cè)耐藥的準(zhǔn)確性。本研究探索了分子病理學(xué)診斷頸部淋巴結(jié)結(jié)核的敏感度及檢測(cè)頸部淋巴結(jié)結(jié)核耐藥性的可行性，然而，有關(guān)FFPE標(biāo)本耐藥檢測(cè)的敏感度和準(zhǔn)確性還有待更多的研究來(lái)評(píng)估。

綜上所述，分子病理學(xué)診斷技術(shù)可作為FFPE標(biāo)本檢測(cè)MTB的有效手段，提升頸部淋巴結(jié)結(jié)核的病原學(xué)陽(yáng)性率，并可篩選耐藥結(jié)核病患者，為臨床開(kāi)展精準(zhǔn)治療提供重要依據(jù)。