左愈臻，紀(jì) 鵬，武凡琳，鄧 婕，賈 寧

（1.甘肅省天水市清水縣畜牧獸醫(yī)局，741400；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070）

秦嶺細(xì)鱗鮭 （Brachymystaxlenok tsinlingensis）隸屬于鮭形目（Salmoniformes）鮭科（Salmonidae）細(xì)鱗鮭屬（Brachymystax Gunther）[1]，中國(guó)僅1屬1種，是一種野生名貴的陸封型冷水魚(yú)類(lèi)，被列為國(guó)家Ⅱ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)的水生野生動(dòng)物。但由于人為偷捕、生境的破壞和自然災(zāi)害等因素的影響，使其分布范圍和存活數(shù)量逐年銳減。動(dòng)物小腸不僅具有對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分消化與吸收的功能，同時(shí)也具有免疫屏障功能[2]。近年來(lái)，雖然有學(xué)者對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭消化道做了部分研究[3]。但到目前為止，對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭腸各段黏膜組織結(jié)構(gòu)和黏膜免疫的相關(guān)研究，在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。為保護(hù)我縣分布的秦嶺細(xì)鱗鮭這一珍稀物種，該試驗(yàn)對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)和黏膜免疫進(jìn)行了初步研究，探討秦嶺細(xì)鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和樣品處理

5例秦嶺細(xì)鱗鮭（♂3，♀2，體長(zhǎng)為14.1-31.6 cm，體重為25.8-260.4 g）腸由甘肅省天水市清水縣畜牧獸醫(yī)局人工馴化基地提供。將魚(yú)解剖后，迅速取出腸前、中、后3段，用新配置的生理鹽水沖洗干凈，置于4%多聚甲醛磷酸緩沖液（0.1 mol/L；pH=7.4）中固定。同時(shí)，在魚(yú)解剖后30 min內(nèi)從前段腸、中段腸和后段腸黏膜分別切取數(shù)塊（1 mm3），固定于2%多聚甲醛-2.5%戊二醛溶液中預(yù)固定，4℃冰箱保存。

1.2 石蠟切片及染色

常規(guī)石蠟包埋，制備連續(xù)橫斷切片(5 μm)，每隔10張取1張。經(jīng)HE染色、高碘酸-Schiff氏（PAS）染色和甲基綠派諾寧 （Methyl Green-Pyronin MGP）染色及甲苯胺藍(lán)（MTB）染色，光鏡下仔細(xì)研究腸結(jié)構(gòu)。

1.3 測(cè)量和數(shù)據(jù)處理

取各段腸絨毛走向平直、結(jié)構(gòu)完整的切片，用OLYMPUS BX-UCB/BX61型光學(xué)顯微鏡觀察、拍照、測(cè)量和計(jì)數(shù)。每段腸選擇5張切片，在低倍鏡下，每張切片選擇5個(gè)視野，每張照片選5根典型絨毛，用接目測(cè)微尺測(cè)定其高度（絨毛基部到絨毛頂端）和肌層厚度，分別計(jì)算各段腸中絨毛的平均高度和肌層厚度平均值。數(shù)據(jù)處理采用SPASS10.0進(jìn)行單因素方差分析和比較。

2 結(jié)果

2.1 秦嶺細(xì)鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)

秦嶺細(xì)鱗鮭腸壁有四層，分別為黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜。黏膜層由黏膜上皮、固有層和黏膜肌層組成；肌層是平滑肌，有較厚且明顯的內(nèi)環(huán)肌和很薄而不明顯的外縱肌兩層。漿膜由單層扁平細(xì)胞構(gòu)成。前段腸壁較厚，黏膜有褶皺突向腸腔，腸絨毛密集且短寬，且頂端有典型的嗜酸性紋狀緣；固有層分布有一定數(shù)量的腸腺；黏膜下層未見(jiàn)腸腺，肌層相對(duì)厚，平均厚度為343.5±4.2 μm（圖 1A）。 中段腸壁較厚，有 16-20個(gè)長(zhǎng)度不等的指狀絨毛突于腸腔 （平均長(zhǎng)度330.6±16.3 μm）、固有層和黏膜下層未見(jiàn)腸腺分布（圖1B），肌層較薄。后段腸絨毛稀疏且粗而短小，黏膜上皮和固有層均有一定數(shù)量的集合淋巴小結(jié)，其生發(fā)中心明顯（圖1C），固有層有少量腸腺分布，肌層較厚。

秦嶺細(xì)鱗鮭不同腸段的腸絨毛高度以前段腸最高，平均高度為 460.4±23.8Aμm，中段腸、后段腸依次降低；前段腸、中段腸、后段腸絨毛高度相比差異極顯著（p<0.01）（表1）。肌層以前段腸最厚，平均厚度為 856.7±5.6Dμm，中段腸（平均58.3±2.4Iμm）、后段腸（平均 115.6±4.7Eμm）；前段腸、中段腸、后段腸肌層厚度相比差異極顯著（p<0.01）（表 1）。

圖1 秦嶺細(xì)鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)（HE）（A：前段腸；B：中段腸；C：后段腸）

表1 秦嶺細(xì)鱗鮭腸組織結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn)

3 討論

動(dòng)物腸道的功能包括消化與吸收。消化功能指的是將食物消化成為可以吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，吸收功能指的是吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與水分。動(dòng)物小腸黏膜結(jié)構(gòu)是否完整或狀態(tài)是否良好是保證其發(fā)揮基本功能的前提[4]。資料顯示，腸黏膜絨毛高度與肌層厚度是衡量小腸消化與吸收功能的兩個(gè)重要指標(biāo)[5]。P Saenphoom[6]研究發(fā)現(xiàn)腸絨毛的高度和腸接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的面積有必然聯(lián)系。周艷華等[7]研究發(fā)現(xiàn)，小腸的黏膜與肌層的厚度和小腸節(jié)律性收縮與食糜機(jī)械消化效率有必然聯(lián)系。秦嶺細(xì)鱗鮭腸壁由黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。前段腸壁較厚，腸絨毛密集且短寬，頂端有典型的嗜酸性紋狀緣；固有層有一定數(shù)量的腸腺；黏膜下層未見(jiàn)腸腺。中段腸有16-20個(gè)長(zhǎng)度不等的指狀絨毛突于腸腔，固有層和黏膜下層未見(jiàn)腸腺分布。后段腸絨毛稀疏且粗而短小，黏膜上皮和固有層均有一定數(shù)量的集合淋巴小結(jié)，其生發(fā)中心明顯，固有層有少量的腸腺分布。前段腸絨毛高度最高，三段腸從前到后依次降低且差異極顯著（p<0.01）。肌層以前段腸最厚，三段腸肌層厚度相比差異極顯著（p<0.01）。該研究結(jié)果在以往研究中無(wú)報(bào)道，相似報(bào)道也僅僅卿素珠[3]等人通過(guò)運(yùn)用大體解剖、常規(guī)組織學(xué)方法對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭的消化系統(tǒng)組織形態(tài)進(jìn)行系統(tǒng)觀察后發(fā)現(xiàn)秦嶺細(xì)鱗鮭消化道組織結(jié)構(gòu)與其肉食性功能密切相關(guān)。本文揭示的秦嶺細(xì)鱗鮭腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)及特點(diǎn)對(duì)于其對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性有顯著價(jià)值。