杜德燕，方鵬飛，朱冬梅，鄒智坤，嚴(yán) 成，郭健寶

(華派生物工程集團(tuán)有限公司，四川成都641400)

豬支原體肺炎(Mycoplasmal pneumonia of suline，MPS)是由豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae，M.hyopneumonic)引起的一種豬的慢性呼吸道傳染病，臨床表現(xiàn)為慢性非生產(chǎn)性咳嗽。該病在我國常稱為豬喘氣病(或氣喘病)，國外常稱為豬地方性流行性肺炎，這種病在世界廣泛流行，特別是集約化生產(chǎn)程度高的國家和地區(qū)，給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬支原體肺炎造成的經(jīng)濟(jì)損失與日體重(daily weight gain，DWG)的降低、死亡率的增加、飼料利用率的下降以及給藥治療導(dǎo)致的成本增加等有關(guān)。同時(shí)該病也增加了其他呼吸道病原體的易感性，比如多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、化膿隱秘桿菌和豬鏈球菌等，同時(shí)豬肺炎支原體也是豬呼吸道疾病綜合征(porcine respiratory disease complex，PRDC)的主要病原體。

在豬屠宰場能觀察到肺炎是最常見的肺部病變之一，患病率從19%到79%不等，導(dǎo)致這些肺損傷的最主要細(xì)菌性呼吸道病原體之一就是豬肺炎支原體，豬肺炎支原體在肺臟具有較高的繁殖力和能夠誘導(dǎo)較為嚴(yán)重的炎癥過程，無數(shù)的豬肺炎支原體攻毒試驗(yàn)證明，在無并發(fā)癥感染的情況下，豬支原體肺炎的肺炎病變范圍主要集中在左右肺的尖、心、膈葉的前三分之一和中間葉，眼觀可見有紫紅色至灰白色的呈橡皮樣的實(shí)變結(jié)節(jié)，從肺臟切面上看，肺實(shí)質(zhì)顏色相對均一。當(dāng)然如果繼發(fā)了其他病原菌感染，肺炎病變則較復(fù)雜。豬支原體肺炎引起的豬肺炎病變不僅影響著豬的呼吸系統(tǒng)，還影響著平均日體重的增加，有研究報(bào)告顯示，由豬支原體肺炎引起的肺炎每10%病變區(qū)域可以導(dǎo)致體重少增加23～37 g/d，進(jìn)而影響到每頭豬的利潤率[1-3]。總之，有相當(dāng)多的研究顯示，肺炎病變影響著體重的增加，為驗(yàn)證兩者的關(guān)系，本試驗(yàn)將免疫與非免試驗(yàn)豬的肺炎病變和體重之間相關(guān)性進(jìn)行探討，也為豬肺炎支原體疫苗的合理評價(jià)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)分組 102頭14日齡的健康易感仔豬由四川省華派生物制藥有限公司定點(diǎn)豬場提供。所有試驗(yàn)豬均為豬呼吸道疾病綜合征、豬偽狂犬病、豬瘟靜脈血抗原陰性豬，副豬嗜血桿菌、支原體肺炎、傳染性胸膜肺炎母源抗體陰性豬，已觀察3 d，完全健康。將試驗(yàn)豬隨機(jī)分為12組，其中10組為免疫組各9頭，分別免疫不同廠家的疫苗，另外2組分別為空白對照組和攻毒對照組各6頭，各組試驗(yàn)豬嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 免疫組的試驗(yàn)豬14日齡首免0.5

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3 討論

煙曲霉在自然界廣泛存在，潮濕環(huán)境有利于霉菌繁殖，環(huán)境中存在大量霉菌孢子，可以通過飼料和空氣侵入體內(nèi)。機(jī)體低抗力正常情況下，不會繁殖。企鵝由南極引入溫帶飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境潮濕，企鵝年齡較大(已飼養(yǎng)17年)導(dǎo)致免疫力低下，所以在肺臟、氣囊等處繁殖，出現(xiàn)霉菌病變。

頭份，28日齡按相同的方式和劑量進(jìn)行二免，二免后4周進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，攻毒方法為所有免疫豬和攻毒對照豬均進(jìn)行氣管內(nèi)接種豬支原體肺炎濟(jì)南系攻強(qiáng)毒凍干肺組織毒100MID，攻毒后對臨床癥狀進(jìn)行觀察記錄，連續(xù)25～30 d后剖殺，觀察肺部病變。

毒試驗(yàn)豬每天觀察2次，每次15 min，監(jiān)測范圍包括總體健康狀況、活動情況、食欲和咳嗽等方面。觀察記錄標(biāo)記為0(沒有咳嗽)，1(追趕時(shí)輕度咳嗽)、2(休息時(shí)輕度咳嗽)、3(追趕時(shí)溫和咳嗽)、4(休息時(shí)溫和咳嗽)、5(追趕時(shí)嚴(yán)重咳嗽)、6(休息時(shí)嚴(yán)重咳嗽)，計(jì)算每天的累積咳嗽情況和平均咳嗽情況，試驗(yàn)豬分別在免疫前、攻毒前、剖殺前稱重。剖殺后用Goodwin氏55分法記分法對肺部病變進(jìn)行評分，計(jì)算肺炎病變減少率。

肺炎病變減少率=(對照豬肺炎幾何平均分-免疫豬肺炎幾何平均分)/對照豬肺炎幾何平均分×100%。

評分和評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：評分標(biāo)準(zhǔn)為Goodwin氏55分法記分，依據(jù)攻毒后對肺部各肺葉的病變程度，全程由一人進(jìn)行打分，避免了系統(tǒng)誤差。

評分標(biāo)準(zhǔn)：采用濟(jì)南系強(qiáng)毒對攻毒后各組進(jìn)行評判時(shí)，要求免疫組試驗(yàn)豬的肺炎病變減少率應(yīng)不低于60%，方能判定為合格。病變減少率越高，表明抵抗強(qiáng)毒的能力越強(qiáng)。

2 結(jié)果

2.1 咳嗽 在96頭免疫組和攻毒對照組的試驗(yàn)豬中，只有49頭發(fā)生了咳嗽，免疫組中，B組有1/9頭追趕時(shí)有輕度咳嗽，H組有2/9頭追趕時(shí)有輕度咳嗽，其余免疫組的咳嗽頭數(shù)和咳嗽指數(shù)均較這兩組高，而攻毒對照組所有試驗(yàn)豬6/6頭均出現(xiàn)咳嗽、氣喘、食欲下降等癥狀，在觀察期內(nèi)出現(xiàn)咳嗽的試驗(yàn)豬中，最早的在攻毒后7 d便可觀察到，但也有試驗(yàn)豬在攻毒后25 d才觀察到咳嗽等臨床癥狀。各試驗(yàn)組咳嗽癥狀的平均計(jì)分見中插彩版圖1。

2.2 體重 從統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可以得出，各試驗(yàn)組豬的基礎(chǔ)體重均在4 kg左右，但經(jīng)過免疫和攻毒后，各組差異較顯著，見圖2。在攻毒前，A組、B組、C組、D組、F組、E組、G組、H組、J組、空白組平均體重均能達(dá)到10 kg，但B組、H組、E組比其他組增重效果更明顯。

在攻擊強(qiáng)毒后，由于受到強(qiáng)毒對健康狀況的不同影響，各組體重表現(xiàn)出明顯差異，僅B組、H組、J組和空白對照組的體重平均值超過15 kg，其余組均受到較為嚴(yán)重的影響，其中B組和H組兩組的體重情況基本一致，超過空白對照組。

圖2 各試驗(yàn)組3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的平均體重

2.3 肺炎病變 攻毒后26 d，將所有試驗(yàn)豬進(jìn)行剖殺，觀察肺部病變，病變主要集中在肺的尖葉、心葉、膈葉的前三分之一以及中間葉，其中右尖葉、右心葉和左心葉病變率又較其他4個(gè)部位更高，表現(xiàn)為實(shí)質(zhì)樣病變，如“肉樣變”、“胰樣變”。將肺炎病變按Goodwin氏55分法記分法評分，計(jì)算出了每個(gè)免疫組的肺炎病變減少率，從圖3柱狀統(tǒng)計(jì)圖可以看出，B組的肺炎病變減少率最高，達(dá)72.3%，H組次之，為69.9%，說明兩組在肺炎病變減少率上相差不大。其余8組肺炎病變減少率均在60%以下，J組比其他組稍好，E組肺炎病變減少率最低，只有29.1%。

圖3 各免疫組肺炎病變減少率與攻毒后平均增重情況

2.4 肺炎病變與臨床參數(shù)比較 在近1個(gè)月的攻毒觀察期內(nèi)，從圖2可以看出，每個(gè)試驗(yàn)組的體重差異明顯，從圖3可以看出，10個(gè)免疫組的平均肺炎病變減少率與平均增重之間存在相關(guān)性，B組肺炎病變減少率和平均增重量最高，H組均次之，兩者的肺炎病變減少率在70%左右，平均增重在8 kg以上；肺炎病變減少率在60%以下的試驗(yàn)組，其平均增重也在7 kg以下，J組的兩項(xiàng)較其他組高，而A組、C組、D組、I組的肺炎病變較少率介于40%～50%之間時(shí)，其平均增重在4 kg左右。E組、F組、G組肺炎病變較少率在40%或以下，平均增重在3 kg或以下。

將所有免疫組和攻毒對照組的肺炎病變情況和體重增加情況進(jìn)行比較分析，見圖4。在25 d的攻毒觀察期內(nèi)，體重增加4 kg以下的，其肺炎病變大多在30分以上；而體重增加6.5 kg以上的，其肺炎病變評分大多在20分以下,從圖4的整體趨勢來看，體重增加量越大，豬肺炎病變評分就越小，說明豬支原體肺炎能影響到體重的增加。

在本次試驗(yàn)中，陰性攻毒對照組的肺炎病變幾何平均分為43.75，按Goodwin氏55分評分標(biāo)準(zhǔn)，算出的肺炎病變較少率應(yīng)在60%及以上算疫苗的合格，即本次肺炎病變評分應(yīng)小于等于17.5分為合格，以此推算出本次試驗(yàn)只有20頭豬合格，但對96頭豬的日常觀察來看，約1/3(27/76)發(fā)生肺炎的豬沒有觀察到咳嗽,說明豬感染豬支原體肺炎后，肺產(chǎn)生了病變，也影響到體重的增加，但是不一定能觀察到咳嗽或者喘氣。

圖4 各試驗(yàn)豬的肺炎病變評分及攻毒后增重情況

表1 咳嗽與肺炎病變的相關(guān)性

3 討論

本次試驗(yàn)為更好地觀察肺炎病變與體重增加之間的相關(guān)性，接種的各廠家的疫苗均為正常劑量的1/2，即使這樣，仍有廠家生產(chǎn)的疫苗接種14日齡仔豬后，體重增加較空白組更高，說明接種豬支原體肺炎疫苗能促進(jìn)免疫豬體重的增加，而且這種促進(jìn)隨著免疫豬生長日齡的增加會更明顯，在最終屠殺時(shí)，豬支原體肺炎的免疫豬與非免豬體重差異顯著，免疫豬平均的日增重比非免豬可多20g以上，這個(gè)結(jié)論已經(jīng)被其他研究者證實(shí)[4-8]。

在攻毒試驗(yàn)后，以上數(shù)據(jù)表明，豬肺炎病變與體重增加存在相關(guān)性，在此之前，也有研究者已經(jīng)證實(shí)這個(gè)結(jié)論[9-11]，肺炎病變面積越大，體重增加越小，甚至在短期內(nèi)幾乎會停滯不生長，導(dǎo)致后期“僵豬”的出現(xiàn)，有研究顯示[4,12]，日齡小的豬比日齡大的豬出現(xiàn)喘氣癥狀對體重增加的影響更大，日齡小的豬感染豬支原體肺炎后，對豬體重的影響是終生的，而肺損傷過程有時(shí)并不能觀察到臨床癥狀，正如本試驗(yàn)數(shù)據(jù)所顯示，約1/3的支原體肺炎病變豬觀察不到咳嗽或喘氣等臨床相關(guān)癥狀，導(dǎo)致有些養(yǎng)殖場不能找出飼料利用率降低和體重增加小的根本原因。當(dāng)然疫苗的接種能明顯降低肺炎病變和促進(jìn)體重增加，眾多的研究者已經(jīng)證實(shí)該結(jié)論[13]，本次試驗(yàn)中，即使減半接種，B組和H組疫苗仍有70%左右的肺炎病變減少率，體重增加也明顯高于空白對照組，H組疫苗為華派的豬支原體肺炎滅活疫苗“支肺通”。本試驗(yàn)的另一方面也說明了不同廠家的疫苗存在差異，養(yǎng)殖戶在選擇疫苗時(shí)要綜合多方面來考察。