李露 李偉 劉柏里 張海英 聶繼紅

摘 要 目的：研究新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物對結(jié)腸癌模型小鼠免疫功能的影響，為新疆阿魏屬植物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。方法：體外接種小鼠結(jié)腸癌CT-26.WT細(xì)胞復(fù)制小鼠結(jié)腸癌模型。將造模的50只小鼠隨機(jī)分為模型組（生理鹽水，灌胃）、順鉑組（5 mg/kg，腹腔注射）和新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物低、中、高劑量組（按生藥量計(jì)分別為1.0、2.0、3.0 g/kg，灌胃），每組10只；另選10只正常小鼠作為空白組（生理鹽水，灌胃）。順鉑組小鼠隔天給藥1次，其余各組小鼠均每天給藥1次，連續(xù)給藥10 d。給藥結(jié)束后，測定各組小鼠抑瘤率和脾指數(shù)；采用流式細(xì)胞術(shù)測定各組小鼠血液中T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+以及B淋巴細(xì)胞CD19+的數(shù)量，并計(jì)算CD4+/CD8+值；酶聯(lián)免疫吸附法測定小鼠血清中免疫球蛋白M（IgM）、IgG的含量。結(jié)果：與空白組比較，模型組小鼠脾指數(shù)顯著升高（P<0.01），但血液中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+細(xì)胞的數(shù)量以及血清中IgM、IgG含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與模型組比較，新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物各劑量組小鼠的瘤質(zhì)量均顯著降低（P<0.01），抑瘤率均在40%以上；新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物中、高劑量組小鼠脾指數(shù)以及血液中CD3+細(xì)胞數(shù)量、CD4+細(xì)胞數(shù)量、CD4+/CD8+值和血清中IgM、IgG含量均顯著升高（P<0.05或P<0.01）；新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物各劑量組小鼠血液中CD19+細(xì)胞數(shù)量顯著減少（P<0.05或P<0.01），但血液中CD8+細(xì)胞數(shù)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物對結(jié)腸癌模型小鼠具有一定的改善作用，并可顯著提高小鼠自身的細(xì)胞免疫能力和體液免疫能力。

關(guān)鍵詞 新疆阿魏；乙酸乙酯部位；結(jié)腸癌模型；小鼠；免疫功能

中圖分類號 R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）21-2939-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.21.14

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the effects of the extract from ethyl acetate part of Ferula sinkiangensis on immune function of colon cancer model mice， and to provide reference for further development and utilization of plants of the genus Ferula. METHODS： Colon cancer model mice were induced by incubated with colon cancer CT-26.WT cell. 50 model mice were randomly divided into model group （normal saline， i.g.）， cisplatin group （5 mg/kg， i.p.） and ethyl acetate part of F. sinkiangensis low-dose， medium-dose and high-dose groups （1.0， 2.0， 3.0 g/kg， calculated by crude drug， i.g.）， with 10 mice in each group. Other 10 normal mice were included in blank group （normal saline， i.g.）. Cisplatin group was given medicine every other day， and other groups were given medicine once a day， for consecutive 10 d. After medication， the inhibition rate of tumor and spleen index were determined. Flow cytometry was adopted to detect the number of blood T lymphocyte subsets CD3+， CD4+， CD8+ and B lymphocytes CD19+； CD4+/CD8+ value was calculated. ELISA method was adopted to detect the content of immune protein IgM and IgG in serum of mice. RESULTS： Compared with blank group， spleen index of mice was increased significantly in model group （P<0.01）. There was no statistical significance in the number of CD3+， CD4+， CD8+ and CD19+ cells in the blood， as well as the contents of lgM and lgG in the serum （P>0.05）. Compared with model group， the tumor mass of mice in ethyl acetate part of F. sinkiangensis groups were significantly reduced （P<0.01）， inhibitory rate of tumor was more than 40%. The spleen index， the number of CD3+ and CD4+， CD4+/CD8+ value， the contents of IgM and IgG in serum were increased significantly in ethyl acetate part of F. sinkiangensis medium-dose and high-dose groups （P<0.05 or P<0.01）. The number of CD19+ cells in blood was decreased significantly in ethyl acetate part of F. sinkiangensis groups（P<0.05 or P<0.01）. There was no statistical significance in the number of CD8+ cells in blood （P>0.05）. CONCLUSIONS： The extract from ethyl acetate part of F. sinkiangensis shows inhibitory effect on colon cancer model mice， and can significantly improve cellular immunity function and humoral immunity function.

KEYWORDS Ferula sinkiangensis； Ethyl acetate part； Colon cancer model； Mice； Immune function

阿魏為傘形科植物新疆阿魏（Ferula sinkiangensis K.M.Shen）或阜康阿魏（Ferula fukanensis K.M.Shen）的樹脂[1]，為新疆特色珍貴藥材，在治療腫瘤、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胃痛等方面有獨(dú)特的優(yōu)勢[2-3]。本課題組前期研究已證實(shí)，新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物能夠有效抑制結(jié)腸癌腫瘤的生長[4]。隨著對免疫系統(tǒng)與腫瘤作用關(guān)系的不斷研究，發(fā)現(xiàn)腫瘤在發(fā)生發(fā)展過程中與機(jī)體的免疫功能異常有著非常密切的聯(lián)系，機(jī)體免疫功能下降，可導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后效果差[5]。機(jī)體對腫瘤的免疫方式主要有細(xì)胞免疫、體液免疫和分泌細(xì)胞因子三種。在細(xì)胞免疫中，T淋巴細(xì)胞是最為重要的效應(yīng)細(xì)胞，被認(rèn)為是機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤的直接而又特異的識(shí)別者[6-7]，而T淋巴細(xì)胞又由多個(gè)不同的亞群（如CD3+、CD4+、CD8+等）組成，CD19+則用作標(biāo)記B淋巴細(xì)胞[8]；體液免疫指標(biāo)的變化也與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的聯(lián)系，當(dāng)腫瘤發(fā)生時(shí)，機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，可能表現(xiàn)為體液免疫亢進(jìn)，此時(shí)可以合成和分泌免疫球蛋白（如IgG、IgM等），執(zhí)行機(jī)體的體液免疫[9-10]。在本研究中，筆者擬建立BALB/c小鼠結(jié)腸癌模型，從免疫角度出發(fā)，探討新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物治療小鼠結(jié)腸癌的作用機(jī)制，為新疆阿魏屬植物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

IX71-12FL/PH倒置熒光顯微鏡（上海賴氏電子科技有限公司）；TGL-16B離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)）；GUAVAEASYCYTE 8HT流式細(xì)胞儀（美國Millpore公司）；xMarkTM酶標(biāo)儀（美國Thermo公司）。

1.2 藥品與試劑

新疆阿魏藥材（批號：20161012）由新疆省伊犁州食品藥品檢驗(yàn)所提供；紅細(xì)胞裂解液Lysing Buffer 10X Concentrate和CD3-別藻藍(lán)蛋白（APC）、CD4-異硫氰酸熒光素（FITC）、CD8-多甲藻黃素-花青素5.5（Per-cy5.5）、CD19-藻紅蛋白（PE）兔抗鼠、CD19單克隆抗體（武漢博士德生物制劑有限公司）；青-鏈霉素混合液（美國Hyclone公司，批號：F170221）；順鉑注射液（江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號：170402，規(guī)格：6 mL ∶ 30 mg）；IgM、IgG酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（美國Gibco公司，批號：均為466659）。

1.3 動(dòng)物與細(xì)胞

健康BALB/c小鼠60只，♀♂對半，體質(zhì)量18～24 g，4～6周齡，購自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)合格證號：SYXK（新）2011-0001；小鼠結(jié)腸癌CT-26.WT細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。

2 方法

2.1 新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物的制備

取100 g新疆阿魏，在研缽中研碎成細(xì)顆粒狀，過一號篩，以沸程為30～60 ℃的石油醚500 mL超聲（頻率53 Hz）提取40 min，以相同的方法將剩余殘?jiān)B續(xù)提取2次脫脂后，過濾得濾渣約90 g。取提取殘?jiān)?，?5%乙醇回流提取3次，每次450 mL、提取1 h，合并3次濾液，減壓濃縮后硅藻土拌樣，用5倍量的乙酸乙酯超聲（頻率53 Hz）萃取5 min，靜置后以抽濾瓶濾過，將濾液濃縮干燥，即得阿魏乙酸乙酯部位浸膏（得率為16.3%），并測得其中阿魏酸、法尼斯淝醇A、法尼斯淝醇C的含量分別為33.4、76.5、72.3 mg/g[11]。

2.2 造模、分組與給藥

將小鼠結(jié)腸癌CT-26.WT細(xì)胞復(fù)蘇，調(diào)整細(xì)胞密度為2×107個(gè)/mL，按0.1 mL/只分別接種于50只（♀♂對半）BABL/c小鼠左前肢腋窩下，復(fù)制結(jié)腸癌小鼠模型[12]。將造模的50只小鼠隨機(jī)分為模型組、順鉑組和新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物低、中、高劑量組，每組10只（♀♂對半）；另取10只（♀♂對半）正常小鼠作為空白組。從造模第2天開始給藥，給藥前24 h禁食不禁水。新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物低、中、高劑量組小鼠每天灌胃1次相應(yīng)藥液1.0、2.0、3.0 g/kg（按生藥量計(jì)，給藥劑量根據(jù)本課題組前期研究[4]及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整后設(shè)置），順鉑組小鼠隔天腹腔注射1次5 mg/kg順鉑無菌生理鹽水溶液[4]，空白組和模型組小鼠每天灌胃1次生理鹽水，連續(xù)給藥10 d。在給藥期間，因順鉑組3只小鼠死亡、阿魏乙酸乙酯部位提取物高劑量組2只小鼠死亡，為了保證結(jié)果的均一穩(wěn)定性，調(diào)整每組小鼠為7只。

2.3 抑瘤率和脾指數(shù)的測定

末次給藥1 h后，稱小鼠體質(zhì)量，摘眼球取血，然后將小鼠處死，剝?nèi)∽笄爸は碌牧鰤K并稱質(zhì)量（g），計(jì)算各組小鼠的抑瘤率[抑瘤率（%）=（模型組平均瘤質(zhì)量-給藥組平均瘤質(zhì)量）/模型組平均瘤質(zhì)量×100%]。解剖小鼠，取脾組織，用吸水紙吸干水分，稱質(zhì)量并計(jì)算各組小鼠的脾指數(shù)[脾指數(shù)=脾質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）]。然后將各組織置于-80 ℃冰箱中保存，備用。

2.4 血液中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+細(xì)胞數(shù)量的檢測

采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測。吸取小鼠血樣100 ?L，置于2 mL不含肝素的EP管中，做好標(biāo)記，分別加入2 ?L的CD4-FITC抗體和5 ?L的CD3-APC、CD8-Per- cy5.5、CD19-PE兔抗鼠抗體，振蕩混勻，室溫下避光反應(yīng)15 min。然后在每個(gè)樣品中加入1.5 mL的紅細(xì)胞裂解液Lysing Buffer 10X Concentrate，染色，振蕩混勻，4 ℃下避光靜置15 min，再以1 000 r/min離心5 min，棄去上清液，沉淀加入1 mL的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌1次，然后加入0.5 mL的PBS稀釋，混勻，上機(jī)檢測血液中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+細(xì)胞的數(shù)量，并計(jì)算CD4+/CD8+值。

2.5 血清中IgM、IgG含量的測定

采用ELISA法進(jìn)行檢測。將血液在室溫下靜置1 h左右，然后在4 ℃下以1 000 r/min離心10 min，收集血清。按照相應(yīng)試劑盒說明書操作，檢測各組小鼠血清中IgM、IgG含量。操作結(jié)束后，在酶標(biāo)儀上測量450 nm波長下各孔的光密度（OD）值，進(jìn)行定量分析。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較采用單因素方差分析和Scheffe檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組小鼠瘤質(zhì)量和抑瘤率的測定結(jié)果

與空白組比較，模型組小鼠瘤質(zhì)量顯著增加（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組小鼠瘤質(zhì)量均顯著降低（P<0.01）。新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物各劑量組小鼠的抑瘤率均達(dá)到40%以上，且抑瘤效果具有一定的量效關(guān)系，高劑量新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物的抑瘤效果與陽性藥物順鉑相當(dāng)。各組小鼠瘤質(zhì)量和抑瘤率測定結(jié)果見表1。

3.2 各組小鼠脾指數(shù)的測定結(jié)果

與空白組比較，模型組小鼠體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但脾質(zhì)量和脾指數(shù)均顯著增加（P<0.01）。與模型組比較，新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物各劑量組小鼠體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而順鉑因具有一定的化學(xué)毒性，順鉑組小鼠的體質(zhì)量顯著減輕（P<0.01）；新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物中、高劑量組小鼠的脾指數(shù)均顯著升高（P<0.01）。各組小鼠脾指數(shù)測定結(jié)果見表2。

3.3 各組小鼠血液中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+細(xì)胞數(shù)量的測定結(jié)果

與空白組比較，模型組小鼠血液中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+細(xì)胞數(shù)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與模型組比較，順鉑組和新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物中、高劑量組小鼠血液中CD3+、CD4+細(xì)胞數(shù)量均顯著增加（P<0.05或P<0.01），新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物各劑量組小鼠血液中CD19+細(xì)胞數(shù)量顯著減少（P<0.05或P<0.01），并且新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物中、高劑量組小鼠血液中CD4+/CD8+值顯著升高（P<0.05或P<0.01），各給藥組小鼠血液中CD8+細(xì)胞數(shù)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。小鼠血液中CD3+細(xì)胞檢測的流式直方圖見圖1和CD4+、CD8+、CD19+細(xì)胞檢測的流式散點(diǎn)圖見圖2，測定結(jié)果見表3。

3.4 各組小鼠血清中IgM、IgG含量的測定結(jié)果

與空白組比較，模型組小鼠血清中IgM、IgG含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與模型組比較，順鉑組和新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物低劑量組小鼠血清中IgM、IgG含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物中、高劑量組小鼠血清中IgM、IgG含量均顯著增加（P<0.05或P<0.01），這提示新疆阿魏乙酸乙酯部位能夠提高結(jié)腸癌模型小鼠機(jī)體的體液免疫功能，且具有明顯的劑量依賴性。各組小鼠血清中IgM、IgG含量測定結(jié)果見表4。

4 討論

《抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則》[13]規(guī)定，當(dāng)天然藥物對腫瘤的抑制率大于40%時(shí)，就可判定其有一定的抗腫瘤作用。本研究結(jié)果顯示，新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物對結(jié)腸癌模型小鼠的抑瘤率分別為45.35%、80.59%、93.61%，均高于40%，提示該部位對結(jié)腸癌具有抑制作用。脾是重要的免疫器官，常被用來評估機(jī)體的免疫功能，脾指數(shù)也被當(dāng)作參考判斷實(shí)驗(yàn)藥物是否對機(jī)體的免疫功能有所提高的一項(xiàng)指標(biāo)[14]。在本研究中，中、高劑量新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物可顯著提高結(jié)腸癌模型小鼠的脾指數(shù)，由此推測造模中小鼠接種腫瘤后，小鼠對腫瘤的排斥所產(chǎn)生的免疫功能增強(qiáng)，所以使得脾指數(shù)有所增加，新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物抑制結(jié)腸癌異位瘤與提高小鼠自身免疫應(yīng)答有一定的關(guān)系。

細(xì)胞免疫在機(jī)體免疫對抗腫瘤中扮演著主要的角色[15]，而作為細(xì)胞免疫最重要的T淋巴細(xì)胞，則通過功能各異的T淋巴細(xì)胞亞群來發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。 其中，CD3+細(xì)胞分布在每個(gè)T淋巴細(xì)胞中，代表T淋巴細(xì)胞的總數(shù)，還可以作為鑒別T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)[16]。CD4+細(xì)胞主要是輔助體液免疫和細(xì)胞免疫，如果CD4+細(xì)胞的表達(dá)水平降低，那么免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)作用也會(huì)隨之降低，隨之機(jī)體的抗腫瘤能力也會(huì)降低[17]。CD8+細(xì)胞在免疫過程中起負(fù)調(diào)節(jié)作用，可抑制機(jī)體自身抗體的生成，是一種抑制性T淋巴細(xì)胞[18]。CD4+/CD8+值越低，越容易導(dǎo)致機(jī)體的免疫功能受損，識(shí)別和殺傷突變細(xì)胞的能力將下降，繼而為腫瘤迅速生長、轉(zhuǎn)移、繼發(fā)感染創(chuàng)造條件[19]。本研究流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，中、高劑量新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物和順鉑均顯著增加了小鼠血液中CD3+、CD4+細(xì)胞的數(shù)量，表明用藥后結(jié)腸癌模型小鼠存在免疫功能提高的現(xiàn)象；且中、高劑量新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物能升高模型小鼠血液中CD4+/CD8+的值，說明用藥后結(jié)腸癌模型小鼠的細(xì)胞免疫功能處于免疫亢進(jìn)狀態(tài)，機(jī)體識(shí)別殺傷突變細(xì)胞的能力有所上升。CD19+細(xì)胞是由B淋巴細(xì)胞分泌的，具有兩個(gè)功能：一是能夠抑制反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的活性；二是能夠抑制效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的增殖以及免疫球蛋白的產(chǎn)生，從而參與細(xì)胞免疫的過程[20]。CD19+細(xì)胞數(shù)量越多，機(jī)體效應(yīng)T淋巴細(xì)胞活性就越低。本研究結(jié)果顯示，新疆阿魏乙酸乙酯部位各劑量組小鼠血液中CD19+細(xì)胞數(shù)量較模型組均顯著減少，表明新疆阿魏乙酸乙酯部位可能是通過降低小鼠體內(nèi)CD19+細(xì)胞數(shù)量，來增加小鼠體內(nèi)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞活性及免疫球蛋白的數(shù)量，從而參與機(jī)體的細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)。

免疫球蛋白同T淋巴細(xì)胞亞群一樣，屬于機(jī)體免疫防御機(jī)制的重要組成部分。當(dāng)B淋巴細(xì)胞受到抗原刺激時(shí)就會(huì)分泌免疫球蛋白（如IgA、IgM、IgG），這些抗體對B淋巴細(xì)胞的相關(guān)抗原進(jìn)行識(shí)別，促進(jìn)細(xì)胞與病原體的結(jié)合，進(jìn)行體液免疫[21]。血清中免疫球蛋白的主要組成是IgG，其可激活補(bǔ)體以及調(diào)理吞噬功能，在機(jī)體二次免疫應(yīng)答中扮演主要角色。本研究結(jié)果顯示，中、高劑量新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物均顯著提高了模型小鼠血清中IgM、IgG的含量，表明其提高了小鼠自身的體液免疫能力。

筆者選用抗腫瘤研究中最常用的順鉑為陽性對照，雖然順鉑抗腫瘤作用強(qiáng)，但是其是一種細(xì)胞非特異性藥物，是通過破壞細(xì)胞DNA 的功能而發(fā)揮作用的，所以其對機(jī)體免疫作用可能影響不大。在腫瘤形成過程中，惡變細(xì)胞在某些情況下能通過多種機(jī)制逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，在體內(nèi)迅速增殖，形成腫瘤[22]，這也可能是本研究中模型組小鼠各免疫指標(biāo)與空白組比較沒有顯著差異的主要原因。但是用藥后反而可能刺激機(jī)體免疫的產(chǎn)生，這與本研究給藥后小鼠免疫水平升高的結(jié)果相吻合。另外，本研究結(jié)果顯示，新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物給藥后小鼠血液中CD8+細(xì)胞數(shù)量略有下降，而CD8+細(xì)胞數(shù)量越低表示免疫抑制越強(qiáng)，即小鼠的抵抗力就越強(qiáng)，這說明了小鼠機(jī)體內(nèi)還處于自身免疫抗腫瘤狀態(tài)。

綜上所述，新疆阿魏乙酸乙酯部位提取物對結(jié)腸癌模型小鼠具有較好的抑瘤作用，這可能與提高小鼠自身的細(xì)胞免疫和體液免疫能力有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：190.

[ 2 ] 黃雅婷，岳麗君，申翔宇，等.新疆阿魏化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J].國際藥學(xué)研究雜志，2017，44（6）：495- 499.

[ 3 ] 羅福祥，盧軍，張海英，等.新疆阿魏乙酸乙酯部位對小鼠S180實(shí)體瘤的抑制作用[J].中國藥房，2016，27（31）：4388-4391.

[ 4 ] 羅福祥，盧軍，張海英，等.新疆阿魏乙酸乙酯部位體內(nèi)外對CT-26.WT細(xì)胞的影響[J].中成藥，2017，39 （2）：238- 243.

[ 5 ] CHEN Z，CHEN X，ZHOU E，et al. Intratumoral CD8+ cytotoxic lymphocyte is a favorable prognostic marker in nodenegative breast cancer[J]. PLoS One，2014，9（4）：e95475.

[ 6 ] YI JS，COX MA，ZAJAC AJ. T-cell exhaustion：characteristics，causes and conversion[J]. Immunology，2010，129（4）：474-481.

[ 7 ] SCHREIBER RD，OLD LJ，SMYTH MJ. Cancer immunoediting：interrating immunitys role in cancer suppression and promotion[J]. Science，2011，331（6024）：1565- 1570.

[ 8 ] ELINAV E，NOWARSKI R，THAISS CA，et al. Inflammation-induced cancer：crosstalk between tumours，immune cells and microorganisms[J]. Nat Rev Cancer，2013，13（11）：759-771.

[ 9 ] 王曉洪.惡性腫瘤患者血清免疫球蛋白檢測結(jié)果分析[J].中國民康醫(yī)學(xué)，2015，27（1）：83-84.

[10] 李紅.腫瘤患者血清免疫球蛋白檢測結(jié)果的分析[J].中國醫(yī)藥指南，2016，14（5）：92-93.

[11] 張海英，李偉，周龍龍，等.新疆阿魏乙酸乙酯部位質(zhì)量控制方法研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2016，23 （4）：83-86.

[12] 王麗娜，劉義帥，王洪偉，等. BALB/c小鼠原位移植肝癌模型的建立及鑒定[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，37（1）：1-3.

[13] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則[S]. 2006-12-19.

[14] 劉穎，敬岳，郭麗麗，等.固本止咳中藥對COPD模型小鼠脾、胸腺指數(shù)及Th1/Th2失衡的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015，8 （2）：504-506.

[15] 夏永欣，尚品杰，張向東.白花蛇舌草方劑聯(lián)合放療對食管癌患者生活質(zhì)量的影響及療效分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，19 （17）：209-211.

[16] 傅煜，符爽，陳芳，等.淋巴細(xì)胞亞群在免疫相關(guān)疾病中的應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)綜述，2016，22（14）：2708-2712.

[17] 周莉，張冠男，王琳，等.非小細(xì)胞肺癌患者外周血PD-l表達(dá)水平及淋巴細(xì)胞亞群分析[J].中國腫瘤生物治療雜志，2016，23 （3）：413-415.

[18] ZHU H，YE X，XIAO X，et al. Reteograde antegrade and laparoecople approaches to the management of large upper ureteral stones after shockwave lithotripay failure：a four-year retrospective study[J]. J Endourol，2014，28（1）：100-103.

[19] CHEUNG NW，NAPIER B，ZACCARIA C，et al. Hyperglycemia is associated with adverse outcomes in patients receiving total parenteral nutrition[J]. Diabetes Care，2005，28（10）：2367-2371.

[20] 朱赤紅，許沈華，凌雨田.乳腺癌外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測及其預(yù)后意義[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23 （14） ：2957-2960.

[21] TORRICELLI FC，MONGA M，MARCHINI CS，et al.Semi-rigid ureteroscopic lithotripsy versus laparoscopic ureterolithotorny for large upper ureteral stones：a meta-analysis of randomized controlled trials[J]. Int Brass J Urol，2016，42 （4）：645-655.

[22] 閻永貞.腫瘤免疫逃逸機(jī)制的研究進(jìn)展[J].復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2013，40（5）：619-624.

（收稿日期：2018-05-23 修回日期：2018-08-24）

（編輯：林 靜）