符超君　凌艷君　顏家朝

〔摘要〕 目的 觀察雙丹明目膠囊對糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy， DR）大鼠血糖血脂及血液流變學(xué)的影響，探討其可能的治療機(jī)制。方法 SD大鼠經(jīng)一次性尾靜脈注射STZ（50 mg/kg）誘導(dǎo)DR模型，隨機(jī)分為模型組，雙丹明目膠囊高、中、低組，導(dǎo)升明組，同時(shí)以正常大鼠為對照。連續(xù)干預(yù)30 d后，生化法檢測大鼠血糖、血脂水平，全自動(dòng)血液流變快測儀檢測大鼠全血粘度（WBV）、血漿粘度（PV）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、纖維蛋白原（FIB）等血液流變指標(biāo)。結(jié)果 與正常組比較，模型組大鼠血糖、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）水平均顯著升高（P<0.01），高密度脂蛋白（HDL-C）水平顯著下降（P<0.01），WBV、PV、ESR、HCT、FIB水平均顯著升高（P<0.01或P<0.05）；雙丹明目膠囊干預(yù)后，模型大鼠血糖、TC、TG、LDL-C水平均下降（P<0.05），HDL-C上升（P<0.05），WBV、PV、ESR、HCT、FIB水平均下降（P<0.05）。結(jié)論 雙丹明目膠囊治療DR的機(jī)制可能與有效改善DR大鼠血糖血脂紊亂、血液流變異常狀態(tài)有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 糖尿病視網(wǎng)膜病變；雙丹明目膠囊；血糖；血脂；血液流變學(xué)

〔中圖分類號(hào)〕R285.5；R774.1；R587.1 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.05.001

Effects of Shuangdan Mingmu Capsule on Blood Glucose， Blood Lipid and Blood Rheology in Diabetic Retinopathy Rats

FU Chaojun1， LING Yanjun2， YAN Jiazhao1， ZHAO Yongwang1， LIU Zhengrong2， QIN Yuhui1*

（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China； 2. Hunan Academy of Chinese medicine， Changsha， Hunan 410006， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effects of Shuangdan Mingmu capsule on blood glucose， blood lipid and blood rheology， and to explore its possible mechanism of treatment. Methods SD rats were injected with STZ （50 mg / kg） into the tail vein to induce diabetic model with retinopathy. The rats were randomly divided into model group， high dose， medium dose and low dose of Shuangdan Mingmu capsule groups and positive drug group， normal rats as controls. After continuous administration for 30 days， the blood glucose and blood lipid of rats were measured by biochemical method. The hemorrheological indexes were tested such as whole blood viscosity （WBV）， plasma viscosity （PV）， erythrocyte sedimentation rate （ESR）， hematocrit （HCT） and fibrinogen （FIB）. Results Compared with the normal group， the levels of blood glucose， total cholesterol （TC）， triglyceride （TG） and low density lipoprotein （LDL-C） in model group increased significantly （P<0.01） and high-density lipoprotein （HDL-C） levels decreased significantly （P<0.01）. The levels of WBV， PV， ESR， HCT， FIB increased obviously （P<0.01 or P<0.05）. After administration of Shuangdan Mingmu capsule， blood glucose， TC， TG， LDL-C levels of model rats decreased （P<0.05）， HDL-C increased （P<0.05）， the levels of WBV， PV， ESR， HCT， FIB declined （P<0.05）. Conclusion The mechanism of Shuangdan Mingmu capsule in the treatment of DR might be related to the effective improvement of blood glucose and lipid disorders， and abnormal blood rheology in DR rats.

〔Keywords〕 diabetic retinopathy； Shuangdan Mingmu capsule； blood glucose； blood lipid； blood rheology

糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy， DR）是糖尿病最嚴(yán)重、發(fā)生率最高的并發(fā)癥之一，據(jù)報(bào)道，約20%～40%的糖尿病患者有不同程度的視網(wǎng)膜病變情況，且發(fā)生率隨著糖尿病病程的發(fā)展而明顯增高[1]。目前，DR的治療尚缺乏有效的藥物，較公認(rèn)的治療藥物是西藥導(dǎo)升明，但考慮到其依賴性高、副作用較大等缺點(diǎn)以及中藥的優(yōu)勢，尋找一種能有效控制DR發(fā)生發(fā)展的中藥復(fù)方具有重要的臨床價(jià)值。

雙丹明目膠囊是湖南中醫(yī)藥大學(xué)秦裕輝教授結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)及現(xiàn)代研究成果而研發(fā)的國家準(zhǔn)字號(hào)新藥（國藥準(zhǔn)字Z20080062），主治肝腎陰虛、瘀血阻絡(luò)所致的糖尿病視網(wǎng)膜病變，經(jīng)臨床驗(yàn)證，其療效顯著，臨床使用安全[2-3]。臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明，雙丹明目膠囊能明顯改善DR患者視網(wǎng)膜病變狀況，降低DR模型大鼠視網(wǎng)膜中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達(dá)，抑制微血管生成，減緩視網(wǎng)膜損傷[4-5]。然而，雙丹明目膠囊能否有效改善模型大鼠的血糖血脂紊亂情況以及血液流變狀態(tài)，尚未進(jìn)行相關(guān)研究。本研究擬在前期基礎(chǔ)上，進(jìn)一步以血糖、血脂及血液流變學(xué)指標(biāo)為切入點(diǎn)，探討雙丹明目膠囊治療DR的療效，對于糖尿病微血管病變的臨床防治具有借鑒意義。

1 材料與方法

1.1 藥物

雙丹明目膠囊由女貞子、旱墨蓮、三七、山茱萸、山藥、牡丹皮、茯苓、紅土茯苓、牛膝、丹參、澤瀉11味藥材組成，飲片購自湖南上藥九旺醫(yī)藥有限公司。導(dǎo)升明（羥苯磺酸鈣）膠囊購自奧地利依比威藥品有限公司，批號(hào)：170603，制備藥物濃度為0.58 mg/mL。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠68只，體質(zhì)量220～240 g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（湘）2013-0004，飼養(yǎng)于湖南省中醫(yī)藥研究院SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。大鼠購入后先適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d，期間自由攝食飲水。

1.3 試劑與主要儀器

鏈脲佐菌素（STZ）購自美國Sigma公司；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司；纖維蛋白原含量測定試劑盒購自北京世帝科學(xué)儀器公司；血糖測量儀、血糖試紙購自美國Johnson公司；5417R低溫高速離心機(jī)購自德國Eppendorf公司；FASCO-3010D全自動(dòng)血液流變快測儀購自瑞士Roche公司；MK3型酶標(biāo)儀購自美國Thermo公司。

1.4 造模與干預(yù)

68只SD大鼠首先隨機(jī)分為正常組（10只）和糖尿病組（58只）。糖尿病組在高脂灌胃14 d后，采用一次性尾靜脈注射STZ（50 mg/kg）方法建立糖尿病模型，于STZ注射72 h后測定所有大鼠空腹血糖值。根據(jù)血糖測定結(jié)果，選取≥16.70 mmol/L的大鼠作為糖尿病模型大鼠。繼續(xù)飼養(yǎng)一周后，對所有糖尿病大鼠進(jìn)行眼底熒光血管造影，選取視網(wǎng)膜具有微血管病變的大鼠視為DR模型成功（48只）。然后，選取45只DR大鼠隨機(jī)分為模型組，雙丹明目膠囊高、中、低劑量組，導(dǎo)升明組，每組9只。雙丹明目膠囊高、中、低劑量組分別對應(yīng)臨床等效劑量的2倍、1倍、0.5倍，對應(yīng)藥物劑量分別為11.2、5.6、2.8 g/kg，導(dǎo)升明組等效給藥劑量為5.8 mg/kg，正常組與模型組均給予等容量的蒸餾水，持續(xù)給藥30 d。末次給藥后，所有動(dòng)物進(jìn)行血糖值測定后麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血保存于抗凝管中。

1.5 空腹血糖值測定

測定前所有大鼠禁食6 h，采用剪尾取血法剪取大鼠尾根部動(dòng)脈血，血糖儀測定各組大鼠的空腹血糖值。

1.6 血脂四項(xiàng)檢測

取抗凝管中的血液，于3 000 r/min離心10 min后，取上層血液即為大鼠血漿樣本，然后嚴(yán)格按照試劑盒說明書檢測血漿中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量。

1.7 血液流變學(xué)指標(biāo)檢測

采用血液粘度測試儀，取切速1 s-1，自動(dòng)測定全血粘度（WBV）值；WBV測試完成后，全血于3 000 r/min離心10 min吸取血漿，取切速200 s-1，測定血漿粘度（PV）值；另吸取1 mL全血置于壓積管中靜置1 h讀數(shù)記錄紅細(xì)胞沉降率（ESR）值；ESR值記錄完成后，于3 000 r/min離心30 min，讀數(shù)記錄紅細(xì)胞壓積（HCT）；血漿纖維蛋白原（FIB）的測定嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.8 數(shù)據(jù)分析處理

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用“x±s”表示，組間差異采用單因素方差分析（Oneway-ANOVA），t檢驗(yàn)，雙側(cè)檢驗(yàn)，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 雙丹明目膠囊對DR大鼠血糖、血脂四項(xiàng)的影響

與正常組比較，模型組大鼠血糖值、TC、TG、

LDL-C水平均顯著升高（P<0.01），HDL-C水平顯著下降（P<0.01）；與模型組比較，雙丹明目膠囊高劑量組大鼠血糖值、TC、TG、LDL-C水平均有不同程度的下降，HDL-C水平上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且中劑量組也有一定的降血糖效果（P<0.05）；然而，導(dǎo)升明組大鼠血糖值、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平均與模型大鼠差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見表1。

2.2 雙丹明目膠囊對DR大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

與正常組比較，DR模型組大鼠WBV、PV、ESR、HCT、FIB水平均顯著升高（P<0.01或P<0.05）；在給予高劑量的雙丹明目膠囊干預(yù)后，大鼠上述指標(biāo)均得到不同程度的逆轉(zhuǎn)（P<0.05）；此外，導(dǎo)升明也有改善模型大鼠血液流變狀態(tài)的功效（P<0.01或P<0.05）。結(jié)果見表2。

3 討論

DR是糖尿病微血管病變中最常見、也是最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，臨床多以視網(wǎng)膜微血管生成、出血、水腫、滲出等為主要特征[6]。DR的中醫(yī)病機(jī)可理解為肝腎陰虛、瘀血阻絡(luò)，其中陰虛為本、腎虛為根、血瘀為標(biāo)。中醫(yī)治療DR以滋陰、補(bǔ)腎、活血為基本法則，雙丹明目膠囊則是基于此理法并結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)成方，臨床療效顯著。前期研究表明，雙丹明目膠囊能減緩DR患者視網(wǎng)膜病變程度，改善DR大鼠視網(wǎng)膜微血管損傷，通過抑制視網(wǎng)膜VEGF表達(dá)而減少微血管的生成，保護(hù)視網(wǎng)膜組織。本研究在前期臨床和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，以DR模型大鼠為研究對象，探討雙丹明目膠囊對DR大鼠血糖血脂及血液流變學(xué)的影響。

血糖值作為糖尿病的核心指標(biāo)，與糖尿病患者視網(wǎng)膜病變的發(fā)生率密切相關(guān)，DR多發(fā)生于長時(shí)間未能有效控制血糖值的情況下[7]。脂類代謝紊亂是導(dǎo)致胰島素抵抗產(chǎn)生的重要原因，是2型糖尿病及其并發(fā)癥后期發(fā)生發(fā)展至不可控的關(guān)鍵因素[8]。血糖血脂的紊亂程度是影響糖尿病并發(fā)癥，尤其是微血管并發(fā)癥治療的重要阻力。然而，治療DR的臨床首選藥物導(dǎo)升明無降糖降脂效果，必須與其他西藥聯(lián)用以控制血糖值，而這加重了藥物的依賴性及潛在的風(fēng)險(xiǎn)性[9]。中藥立足于整體，能多環(huán)節(jié)、多途徑作用于疾病，改善患者依從性，增加用藥安全。本研究結(jié)果確證了導(dǎo)升明無降糖降脂作用，并發(fā)現(xiàn)雙丹明目膠囊能有效改善DR大鼠的血糖血脂紊亂狀態(tài)，具有獨(dú)特的治療優(yōu)勢。

DR的發(fā)生發(fā)展是多因素協(xié)同作用的結(jié)果，研究表明，糖尿病患者普遍存在血液流變學(xué)指標(biāo)的改變，而DR的發(fā)生與血液流變性紊亂密切相關(guān)[10]。糖尿病患者紅細(xì)胞聚集性增強(qiáng)，壓積增大，易導(dǎo)致視網(wǎng)膜微血管中微血栓形成，阻塞微血管并形成微血管瘤，進(jìn)一步加重視網(wǎng)膜組織缺血缺氧，加速疾病的惡化[11]。糾正患者血液流變性異常可顯著降低DR的發(fā)生率，是DR治療的靶點(diǎn)之一[12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雙丹明目膠囊和導(dǎo)升明均能顯著降低DR大鼠WBV、PV、ESR、HCT、FIB水平，降低血液粘度，抑制紅細(xì)胞聚集，其治療作用可能是通過改善大鼠血液流變異常狀態(tài)實(shí)現(xiàn)的。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)雙丹明目膠囊能有效改善DR疾病下血糖血脂紊亂、血液流變異常狀態(tài)，其可能與雙丹明目膠囊保護(hù)視網(wǎng)膜組織、治療DR的機(jī)制有關(guān)。本研究對于糖尿病微血管并發(fā)癥的中醫(yī)藥防治有一定的借鑒價(jià)值，但藥物更多深入的療效機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

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