林小晶 魯林 王曉慧
上海體育學(xué)院運(yùn)動科學(xué)學(xué)院(上海 200438)
雄激素睪酮與運(yùn)動能力密切相關(guān)。不僅較高的血睪酮水平有助于運(yùn)動能力的維持,而且運(yùn)動所致骨骼肌質(zhì)量的增加、運(yùn)動能力的提高與睪酮水平的增加密切相關(guān)[1,2],過度運(yùn)動造成的運(yùn)動性低血睪酮是運(yùn)動能力低下的重要因素之一。睪酮的生物學(xué)作用主要通過雄激素受體(androgen receptor,AR)的介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)[3-6]。AR屬于核受體超家族成員,除了在性器官及其相鄰組織有高表達(dá)外,在骨骼肌、心肌、運(yùn)動神經(jīng)等也有程度不等的AR分布。骨骼肌中的AR分布在肌源性衛(wèi)星細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及肌管中。
運(yùn)動能力主要由力量、速度、耐力、靈敏、柔韌和協(xié)調(diào)等素質(zhì)決定,其中以力量和耐力最為重要。運(yùn)動能力除了受神經(jīng)系統(tǒng)、心肺功能等影響外,主要受骨骼肌的影響,包括肌肉質(zhì)量、快慢肌纖維的比例和含量、肌球蛋白重鏈(myosin heavy chain,MHC)蛋白水平以及肌糖原含量等。肌肉質(zhì)量是影響運(yùn)動能力的最主要骨骼肌因素,質(zhì)量大的肌肉收縮能力相對更強(qiáng)。骨骼肌分為快?。ㄈ缰洪L伸肌,快肌纖維約占90%)、慢肌(如比目魚肌,慢肌纖維約占90%)和介于兩者中間的中間態(tài)?。ㄈ珉枘c肌,快慢肌纖維分別占70%和30%左右)??旒∈湛s力量大、收縮速度快,但耐力差,而慢肌正相反。MHC是一種“馬達(dá)”蛋白,可以水解ATP,為粗細(xì)肌絲間的滑動提供能量,所以有人認(rèn)為MHC可反映骨骼肌的內(nèi)在收縮能力。此外,肌糖原的儲備也是影響運(yùn)動能力的重要因素之一,高水平的肌糖原含量有利于向肌肉供能,提高肌肉收縮能力。
雄激素/AR對上述影響運(yùn)動能力的骨骼肌因素均有作用。AR基因敲除(AR knockout,ARKO)小鼠的研究證實(shí)了AR對不訓(xùn)練的安靜小鼠的骨骼肌有重要作用,包括促進(jìn)骨骼肌發(fā)育和肌肉肥大[7],調(diào)控骨骼肌的快慢肌纖維含量和比例,增加骨骼肌MHC水平[8],以及增加骨骼肌肌糖原含量[9],從而對運(yùn)動能力的提高起非常重要的作用。但AR在運(yùn)動所致的肌肉肥大和運(yùn)動能力增強(qiáng)的作用及機(jī)制,仍未完全闡明。盡管早有研究報道了運(yùn)動在引起骨骼肌肥大之前或同時,出現(xiàn)血清睪酮和骨骼肌AR表達(dá)水平的增加,提示雄激素/AR在運(yùn)動所致的肌肉肥大中可能起關(guān)鍵作用[10-13],但仍限于現(xiàn)象研究。
為確證AR在運(yùn)動所致的肌肉肥大和運(yùn)動能力增強(qiáng)中的作用及機(jī)制,ARKO小鼠無疑是很好的模型。但目前還沒有商品化的AR基因敲除小鼠(現(xiàn)有的AR基因敲除小鼠都是實(shí)驗(yàn)室自己構(gòu)建),且不同AR基因敲除小鼠的生物學(xué)行為不一致,更主要的是尚未見AR基因敲除小鼠運(yùn)動訓(xùn)練的研究報道。因此,利用AR阻斷劑研究AR的作用及機(jī)制,仍有一席之地。本課題用AR阻斷劑氟他胺(flutamide)來證實(shí)AR在抗阻和耐力訓(xùn)練所致大鼠運(yùn)動能力(最大力量、速度力量和耐力)增強(qiáng)中的作用及其機(jī)制(肌肉質(zhì)量、快慢肌纖維含量、MHC蛋白水平和肌糖原含量)。
48只6周齡的雄性SD大鼠,體重170~190 g,購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司(合格證號:SCXK(京)2012-0001)。于上海體育學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)室SPF級環(huán)境喂養(yǎng),所有大鼠均自由飲水飲食。飼養(yǎng)環(huán)境溫度控制在20~25℃,相對濕度為40%~70%,以及12h/12h的晝夜節(jié)律。
1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組
48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組(n=8):正常對照組(control,C)、氟他胺組(flutamide,F(xiàn))、耐力訓(xùn)練組(endurance training,E)、耐力訓(xùn)練+氟他胺組(endur?ance training+flutamide,E+F)、抗阻訓(xùn)練組(resistance training,R)、抗阻訓(xùn)練+氟他胺組(resistance training+flutamide,R+F)。
1.2.2 氟他胺緩釋片的包埋
正式運(yùn)動干預(yù)前3 d,氟他胺包埋組(F組、E+F組和R+F組)大鼠在麻醉后,在其頸后部切一個0.5 cm的切口,將氟他胺緩釋片(美國Innovative Rearch of Amer?ica,21天緩釋片,50 mg/片)塞入頸部皮下(每只一片),縫合皮膚,完成氟他胺的皮下包埋[14]。C組、E組和R組做頸部切口后縫合,不包埋任何東西。
1.2.3 運(yùn)動干預(yù)
C組和F組大鼠不進(jìn)行任何運(yùn)動干預(yù),E組和E+F組大鼠進(jìn)行耐力訓(xùn)練,R組和R+F組大鼠進(jìn)行抗阻訓(xùn)練。耐力訓(xùn)練組大鼠采用中等強(qiáng)度的跑臺運(yùn)動(跑速20 m/min,每天1 h)??棺栌?xùn)練組的大鼠采用遞增負(fù)荷的尾部負(fù)重爬梯訓(xùn)練,即大鼠被放置于爬梯(高1 m,每級階梯間隔2 cm,傾斜85°放置)的底部,尾部負(fù)重進(jìn)行爬梯訓(xùn)練,3組/d,4次/組,組間間隔20 s。以體重的40%作為起始負(fù)重,每2天遞增10%體重的負(fù)荷,終負(fù)荷為體重的120%[15]??棺韬湍土τ?xùn)練均是3周,每周訓(xùn)練6 d。
1.2.4 大鼠力量(最大力量、速度力量)和耐力的檢測
于3周運(yùn)動訓(xùn)練的最后1 d,進(jìn)行力量的檢測,包括反映最大力量的最大抓力、反映速度力量的啟動時最大負(fù)重的檢測。①最大抓力的檢測:在大、小鼠的抓力檢測儀(上海欣軟信息科技有限公司)上,測試人員抓住大鼠的尾巴往后拉,大鼠會本能地抓住前方的抓桿。當(dāng)測試人員的拉力超過大鼠最大的抓力時,大鼠松開抓桿,在松開即刻時儀器會自動記錄并顯示該最大抓力值,相對最大抓力(反映最大力量)=最大抓力/體重。②啟動時最大負(fù)重的檢測:大鼠尾巴上系一布條,布條后面連接重物,檢測大鼠在地面上能夠拖動重物(標(biāo)準(zhǔn):拖動距離≥30 cm)的最大負(fù)重,啟動時相對最大負(fù)重(反映速度力量)=啟動時最大負(fù)重/體重。
力量檢測1 d后,檢測大鼠的一次力竭運(yùn)動時間(跑臺速度35 m/min),以反映其耐力。大鼠力竭的判斷標(biāo)準(zhǔn):連續(xù)對大鼠進(jìn)行電刺激,大鼠不能繼續(xù)跑,在暫停跑之后表現(xiàn)為呼吸非常急促、神情十分倦怠,大鼠在腹臥位狀態(tài)下被捕捉時的逃避反應(yīng)明顯減弱。
1.2.5 血清睪酮水平和肌糖原含量的檢測
運(yùn)動干預(yù)后36 h,腹腔注射10%水合氯醛(3 ml/kg體重)麻醉大鼠,下腔靜脈取血,離心收集血清,-80℃保存。大鼠取血后處死,取腓腸肌和比目魚肌,置于-80℃保存。
血清睪酮水平的檢測采用ELISA方法(試劑盒購于美國R&D公司),腓腸肌和比目魚肌的肌糖原含量采用蒽酮法檢測,均按試劑盒說明書進(jìn)行操作。
1.2.6 腓腸肌和比目魚肌的AR、MHC等蛋白水平檢測
Western blot方法檢測骨骼肌AR、MHC等蛋白水平。簡要步驟為:取適量的腓腸肌和比目魚肌剪碎,加入500 μl的含PMSF的RIPA裂解液(RIPA∶PMSF=100∶1,購于上海碧云天公司),機(jī)械勻漿后超聲裂解組織,4℃14000 rpm離心20 min后取上清,用BCA試劑盒檢測上清液中的蛋白濃度。將50 μg的待測樣品進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳后,轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,5%脫脂奶粉封閉。之后,分別加入AR、MHC、慢肌鈣蛋白(ss-TnT,1∶500,美國santa cruz公司)、快肌球蛋白(fs-myosin,1∶1000,美國abcam公司)和內(nèi)參GAPDH(1∶1000,美國CST公司)的一抗4℃孵育過夜。TBST洗4次,加入相應(yīng)的二抗(HRP標(biāo)記,美國santa cruz公司),常溫下孵育1 h,TBST洗4次后在Tanon 5200 Multi全自動化學(xué)發(fā)光/熒光圖像分系統(tǒng)(上海天能科技有限公司)上顯影。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析處理,所得結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。采用單因素方差分析比較C、F、R和R+F組,以及C、F、E和E+F組的各檢測指標(biāo),用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行事后的組間多重比較。P<0.05為顯著性差異,P<0.01為非常顯著性差異。
2.1.1 氟他胺對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠血清睪酮水平的影響
如表1所示,與C組比較,R組、E組和F組大鼠的血清睪酮水平均升高(P<0.01)。R+F組與R組比較、E+F組與E組比較,大鼠的血清睪酮水平均無差異。
2.1.2 氟他胺對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠骨骼肌AARR蛋白水平的影響
如圖1A顯示,與C組比較,R組大鼠腓腸肌的AR蛋白水平增加(P<0.05),F(xiàn)組大鼠的則降低(P<0.05);與R組比較,R+F組大鼠腓腸肌的AR蛋白水平降低(P<0.01)。對于比目魚肌,與C組比較,E組大鼠比目魚肌的AR蛋白水平增加(P<0.05);與E組比較,E+F組大鼠比目魚肌的AR蛋白水平降低(P<0.05)(圖1B)。
2.2.1 氟他胺對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠力量(最大力量和速度力量)的影響
1980年2月24日,結(jié)束完一天的表演,夜深人靜時,雨果撞向水池的墻壁,發(fā)出令人心驚的響聲,“咚”“咚”“咚”,海洋館的工作人員察覺到情況不對,以為雨果生病了,然而又想不出什么辦法。之后幾天,情況依舊,海洋館的工作人員只好晚上派人觀察水池里的情況。
如表2所示,與C組比較,R組大鼠的相對最大抓力(P<0.05)和啟動時相對最大負(fù)重(P<0.05)均增加,但E組大鼠的上述兩指標(biāo)無變化,F(xiàn)組大鼠的相對最大抓力降低(P<0.05)。與R組比較,R+F組大鼠的相對最大抓力(P<0.05)和啟動時相對最大負(fù)重(P<0.01)均降低。與E組比較,E+F組大鼠的相對最大抓力和啟動時相對最大負(fù)重均無顯著性差異。
表1 氟他胺對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠血清睪酮水平的影響
圖1 氟他胺對抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸肌(A)、耐力訓(xùn)練大鼠比目魚肌(B)的AR蛋白水平的影響
表2 氟他胺對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠的相對最大抓力、啟動時相對最大負(fù)重、一次力竭運(yùn)動時間的影響
2.2.2 氟他胺對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠耐力的影響
如表2所示,與C組比較,E組大鼠的耐力(一次力竭運(yùn)動時間)增加(P<0.01),但R組和F組大鼠的無改變。與E組比較,E+F組大鼠的耐力沒有降低,甚至有增強(qiáng)的趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.06)。
2.3.1 氟他胺對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠體重的影響
實(shí)驗(yàn)前各組大鼠體重?zé)o顯著性差異。3周運(yùn)動干預(yù)后,與C組比較,E組(P<0.05)和F組(P<0.01)大鼠的體重降低,但R組大鼠的體重?zé)o變化。與R組比較,R+F組大鼠的體重降低(P<0.05)。與E組比較,E+F組大鼠的體重?zé)o變化(表3)。
2.3.2 氟他胺對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠腓腸肌和比目魚肌相對質(zhì)量的影響
2.3.3 氟他胺對抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸肌、耐力訓(xùn)練大鼠比目魚肌的快慢肌纖維含量的影響
如圖3A所示,與C組比較,R組大鼠腓腸肌fs-my?osin的含量增加(P<0.05),而ss-TnT的含量無顯著性差異;與R組比較,R+F組大鼠腓腸肌的fs-myosin含量減少(P<0.01)。對于比目魚肌,與C組比較,E組大鼠比目魚肌ss-TnT的含量增加(P<0.01)、而fs-myosin的含量無顯著性差異;與E組比較,E+F組大鼠比目魚肌的ss-TnT含量無變化(圖3B)。
表3 氟他胺對抗阻訓(xùn)練和耐力訓(xùn)練大鼠體重的影響
圖2 氟他胺劑對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠腓腸?。ˋ)和比目魚肌(B)相對質(zhì)量的影響
圖3 氟他胺對抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸?。ˋ)和耐力訓(xùn)練大鼠比目魚肌(B)的快慢肌纖維含量的影響
2.3.4 氟他胺對抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸肌、耐力訓(xùn)練大鼠比目魚肌MMHHCC蛋白水平的影響
如圖4A所示,與C組比較,R組大鼠腓腸肌的MHC蛋白水平增加(P<0.01);與R組比較,R+F組大鼠腓腸肌的MHC蛋白水平降低(P<0.01)。對于比目魚肌,與C組比較,E組大鼠的比目魚肌MHC蛋白水平增加(P<0.01);與E組比較,E+F組大鼠比目魚肌MHC的蛋白水平降低(P<0.01)(圖4B)。
圖4 氟他胺對抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸肌(A)和耐力訓(xùn)練大鼠比目魚?。˙)MHC蛋白水平的影響
2.3.5 氟他胺對抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸肌、耐力訓(xùn)練大鼠比目魚肌肌糖原含量的影響
如表4所示,與C組比較,R組大鼠腓腸?。≒<0.01)、E組大鼠比目魚?。≒<0.01)的肌糖原含量均增加。與R組比較,R+F組大鼠腓腸肌的肌糖原含量降低(P<0.05)。與E組比較,E+F組大鼠比目魚肌的肌糖原含量降低(P<0.01)。
表4 氟他胺對抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸肌和耐力訓(xùn)練大鼠比目魚肌肌糖原含量的影響
氟他胺是常用的AR阻斷劑,主要通過其代謝產(chǎn)物2-羥基氟他胺(主要活性形式)在靶組織內(nèi)與AR結(jié)合來阻斷睪酮、雙氫睪酮與AR結(jié)合,從而抑制AR活性[16]。本研究證實(shí)氟他胺逆轉(zhuǎn)了抗阻訓(xùn)練所致腓腸肌、耐力訓(xùn)練所致比目魚肌的AR蛋白水平的增加,但對抗阻和耐力訓(xùn)練大鼠血清睪酮水平的增加無顯著影響,提示氟他胺除了文獻(xiàn)報道的阻斷AR與睪酮結(jié)合外,還能通過降低訓(xùn)練大鼠骨骼肌的AR蛋白水平,而非改變血清睪酮水平,來抑制AR信號發(fā)揮作用。此外,本研究還發(fā)現(xiàn)對于不訓(xùn)練的對照大鼠,氟他胺能顯著增加其血清睪酮水平,這與早已報道的氟他胺增加前列腺癌等患者的血清睪酮水平類似[17]。
3.2.1 AR介導(dǎo)抗阻訓(xùn)練所致力量的增加,但不介導(dǎo)耐力訓(xùn)練所致耐力的增加
外源補(bǔ)充雄激素可以促進(jìn)骨骼肌蛋白質(zhì)合成,增加骨骼肌質(zhì)量、增強(qiáng)肌肉力量[14,15],但外源補(bǔ)充雄激素的副作用限制了其廣泛使用。近年來AR調(diào)節(jié)劑,特別是副作用少的組織特異性的新型非甾體類選擇性AR調(diào)節(jié)劑已成為研究熱點(diǎn)。已證實(shí)上調(diào)AR的調(diào)節(jié)劑能增加老年女性肌肉減少癥患者的瘦體重(去脂體重)、肌肉質(zhì)量和肌肉力量,提高身體機(jī)能[18];以及增加肌營養(yǎng)不良小鼠的體重、瘦體重和抓力[19]。
運(yùn)動也是增加骨骼肌AR蛋白水平的一種上調(diào)劑[11,12]。本研究也發(fā)現(xiàn)運(yùn)動訓(xùn)練選擇性地增加骨骼肌AR蛋白水平(抗阻運(yùn)動增加腓腸肌、耐力運(yùn)動增加比目魚肌的AR蛋白水平),且氟他胺逆轉(zhuǎn)了抗阻訓(xùn)練所致最大力量和速度力量的增加,證實(shí)了抗阻訓(xùn)練增加大鼠力量的作用是通過AR介導(dǎo)的。但耐力訓(xùn)練增加大鼠的耐力很可能與AR無關(guān),或至少AR不是主要因素(氟他胺不僅不降低耐力訓(xùn)練大鼠的一次力竭運(yùn)動時間,還有延長的趨勢,P=0.06,無統(tǒng)計學(xué)差異)。AR對力量和耐力作用的不同,在ARKO小鼠的研究中也得以證實(shí)。如某種全敲的ARKO小鼠的快肌如趾長伸肌質(zhì)量降低、收縮力下降,而慢肌比目魚肌盡管質(zhì)量降低,收縮力卻增強(qiáng),而耐力有較小幅度的增加[13,20,21];再如某種骨骼肌特異性的ARKO(muscle-specific ARKO,mARKO)小鼠盡管四肢肌肉質(zhì)量沒有改變,但耐力增加(表現(xiàn)為力竭運(yùn)動時間的延長,增加了109%)[22];以及另兩種mARKO小鼠盡管肌肉質(zhì)量下降,但趾長伸肌[6]或比目魚肌的耐力卻沒有改變[5]。表明AR對力量的大小是關(guān)鍵因素,但對耐力無顯著影響。
3.2.2 AR介導(dǎo)訓(xùn)練所致運(yùn)動能力提高的機(jī)制
3.2.2.1 肌肉質(zhì)量的增加
肌肉質(zhì)量是影響運(yùn)動能力的最主要骨骼肌因素,所以,文獻(xiàn)常將肌肉收縮能力(如力量、耐力等)與肌肉質(zhì)量放在一起討論和報道。AR在肌肉質(zhì)量、力量和耐力中的作用在不訓(xùn)練的安靜ARKO小鼠上也得以證實(shí)。全敲的ARKO雄性小鼠出現(xiàn)了體重和瘦體重的減輕[23],且多個四肢骨骼肌如趾長伸肌、脛骨前肌、腓腸肌和比目魚肌的質(zhì)量均顯著降低了15%~22%[20,21]。不僅肌肉質(zhì)量下降,全敲的ARKO小鼠的快肌如趾長伸肌和中間態(tài)肌如腓腸肌的收縮力量也下降[13,20,21]。
但目前尚未見運(yùn)動訓(xùn)練對ARKO小鼠運(yùn)動能力和肌肉質(zhì)量等影響的研究報道。本研究用AR阻斷劑氟他胺證實(shí)了抗阻訓(xùn)練所致腓腸肌、耐力訓(xùn)練所致比目魚肌的質(zhì)量增加都是通過AR介導(dǎo)的。鑒于肌肉質(zhì)量是影響肌肉收縮力的主要因素,以及AR在抗阻訓(xùn)練增加腓腸肌質(zhì)量、大鼠最大力量和速度力量中的重要作用,推測抗阻訓(xùn)練所致腓腸肌質(zhì)量的增加是大鼠力量增加的機(jī)制之一。然而,對于耐力,盡管AR介導(dǎo)了耐力所致慢肌比目魚肌的質(zhì)量增加,但氟他胺阻斷AR后并不影響耐力(甚至有增加的趨勢),該結(jié)果與全敲的ARKO小鼠的比目魚肌盡管質(zhì)量降低,但收縮力增強(qiáng),耐力也有較小幅度的增加[13,20,21]相類似,表明慢肌的肌肉質(zhì)量不是影響大鼠耐力的主要因素。
3.2.2.2 其他機(jī)制:快慢肌纖維含量的改變、MHC蛋白水平和肌糖原含量的增加
與全敲的ARKO小鼠不同,mARKO小鼠中很少出現(xiàn)肌肉質(zhì)量下降,常表現(xiàn)為肌肉力量下降。如肌衛(wèi)星細(xì)胞特異性的ARKO(satellite cell-specific ARKO,satAR?KO)小鼠,四肢肌肉的肌肉質(zhì)量沒有變化,但小鼠在生長過程中的多個時間點(diǎn)上(12周、16周、20周、32周和52周)后肢握力顯著降低[13];再如mARKO小鼠,四肢肌肉質(zhì)量也不改變,但其后肢握力也下降,且后肢握力始終保持低水平(盡管肌肉質(zhì)量在青春期有增加),喪失了握力在青春期隨年齡增加而增加、到24周時最大的特性[5]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),20周大的該mARKO小鼠后肢握力的下降是由于快?。ㄈ缰洪L伸?。┖椭虚g態(tài)骨骼肌(如腓腸肌和脛骨前?。┑淖畲髲?qiáng)直張力下降20%~25%所致,而慢?。ㄈ绫饶眶~?。┑淖畲髲?qiáng)直張力卻沒有改變[5]。以上研究表明,除肌肉質(zhì)量這個主要影響因素之外,還有其他骨骼肌因素能影響運(yùn)動能力。這包括快慢肌纖維的比例和含量、MHC蛋白水平以及肌糖原含量等,由于抗阻訓(xùn)練僅引起腓腸肌、耐力訓(xùn)練僅引起比目魚肌的相對質(zhì)量增加,因此,本研究僅檢測了抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸肌、耐力訓(xùn)練大鼠比目魚肌的上述指標(biāo)。
AR影響骨骼肌的快慢肌纖維的比例。無論是全敲的ARKO小鼠[21],還是組織特異性的ARKO小鼠[6,13]均出現(xiàn)快肌減少、慢肌增多,以及快/慢肌纖維比例的降低。目前最常用的檢測快慢肌纖維含量和比例的方法是利用快慢肌纖維特異性熒光抗體的免疫組化。在mARKO的雄性小鼠中,免疫熒光顯微鏡證實(shí)了I型(相當(dāng)于慢?。┘±w維的增加和IIa型(相當(dāng)于快?。┘±w維的減少,其改變幅度都在10%左右[13]。此外,也有實(shí)驗(yàn)室利用Western Blot方法,用快慢肌纖維特異性抗體來檢測快慢肌纖維的含量。Altuwaijri等人就是最早用此方法來證實(shí)全敲的ARKO雄性小鼠股四頭肌的快肌纖維減少、慢肌纖維增多和快/慢肌纖維比例的降低[24]。我們的研究用fs-myosin和ssTnT的特異抗體分別來檢測骨骼肌快慢肌纖維的含量,證實(shí)了氟他胺使抗阻訓(xùn)練大鼠腓腸肌的快肌纖維減少,但對耐力訓(xùn)練大鼠比目魚肌的快慢肌纖維含量無顯著影響(盡管有增加慢肌纖維的趨勢,P=0.06,無統(tǒng)計學(xué)差異),表明抗阻訓(xùn)練增加大鼠腓腸肌的快肌纖維含量是通過AR介導(dǎo)的,但耐力訓(xùn)練增加比目魚肌的慢肌纖維含量的作用不是通過AR介導(dǎo),至少AR的介導(dǎo)不是主要因素。
有研究報道了AR阻斷劑不僅顯著降低安靜大鼠趾長伸肌的MHC蛋白水平,也可逆轉(zhuǎn)由跑臺運(yùn)動所致的趾長伸肌MHC水平的增加,說明AR介導(dǎo)了安靜和運(yùn)動引起的大鼠趾長伸肌收縮能力的增加[8]。我們的結(jié)果更進(jìn)一步,證實(shí)了不同訓(xùn)練方式所致骨骼肌MHC蛋白水平的增加(抗阻訓(xùn)練增加腓腸肌、耐力訓(xùn)練增加比目魚肌的MHC蛋白水平)都是通過AR介導(dǎo)的。
此外,睪酮能增加大鼠多種骨骼肌如趾長伸肌、比目魚肌和腓腸肌的肌糖原含量,以及體外培養(yǎng)的骨骼肌細(xì)胞的肌糖原含量[25]。Ramamani A等人報道大鼠去勢后咀嚼?。ㄒЪ。氨奂∪猓湃^肌和肱二頭?。笸燃∪猓ü赏鈧?cè)肌和股薄?。┖托⊥燃∪猓枘c肌和比目魚?。┑募√窃烤@著減少;且補(bǔ)充睪酮后,該大鼠的上述骨骼肌的肌糖原含量均顯著增加[26]。ARKO小鼠的腓腸肌也出現(xiàn)肌糖原含量減少[9]。以上結(jié)果表明,雄激素及AR對保持和增加不訓(xùn)練的安靜大、小鼠的多種骨骼肌肌糖原含量起重要作用。我們的研究證實(shí)了AR不僅增加不訓(xùn)練骨骼肌肌糖原含量,還能增加運(yùn)動訓(xùn)練(抗阻訓(xùn)練增加腓腸肌、耐力訓(xùn)練增加比目魚肌)大鼠的骨骼肌肌糖原含量。
抗阻訓(xùn)練增強(qiáng)大鼠最大力量和速度力量的作用是通過AR介導(dǎo)的,其機(jī)制與腓腸肌相對質(zhì)量、快肌纖維含量、內(nèi)在收縮力和肌糖原含量的增加有關(guān)。但耐力訓(xùn)練增強(qiáng)大鼠耐力的作用可能與AR無關(guān)。耐力訓(xùn)練通過AR盡管介導(dǎo)了比目魚肌相對質(zhì)量、內(nèi)在收縮力和肌糖原含量的增加,但不影響慢肌纖維的含量,這可能是氟他胺沒有降低大鼠耐力的機(jī)制之一,但仍需進(jìn)一步的研究證實(shí)。