軒乾坤，郭 建，吳文娟，李廣波

（同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200123）

宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性生命健康的惡性腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率在腫瘤中居第4位[1]。有研究結(jié)果表明，99.7%的宮頸癌發(fā)生與高危型人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染直接相關(guān)，高危型HPV持續(xù)性感染是引起宮頸癌發(fā)生的必要因素[2-3]。HPV感染后其基因整合到宿主細(xì)胞基因組，并啟動(dòng)癌基因E6、E7的表達(dá)。HPV E6、E7是導(dǎo)致宮頸癌變發(fā)生和發(fā)展的重要因素[4]，檢測(cè)HPV E6、E7 mRNA的表達(dá)對(duì)于宮頸癌的篩查具有重要意義。為此，本研究評(píng)價(jià)了HPV E6/E7 mRNA在臨床HPV感染篩查中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年7月—2017年4月同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院婦科門診就診的患者5 308例，年齡22～65歲。所有患者均進(jìn)行宮頸細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行HPV DNA檢測(cè)或HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)。就診原因：白帶增多、性生活后出血、異常陰道出血及體檢異常等。

1.2 方法

1.2.1 液基薄層細(xì)胞學(xué)（thinprep cytologic test，TCT）檢測(cè) 所有對(duì)象均選擇非月經(jīng)期，將采集的宮頸脫落細(xì)胞裝入裝有細(xì)胞保存液的小瓶中，送至病理科，由病理科出具檢驗(yàn)報(bào)告，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照國際癌癥協(xié)會(huì)推薦的TBS（2001）分類標(biāo)準(zhǔn)，分為正?；蜓装Y、低度鱗狀上皮內(nèi)病變（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）、高度鱗狀上皮內(nèi)病變（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）、鱗狀細(xì)胞癌和腺癌（adenocarcinoma，CA）、意義不明的不典型鱗狀細(xì)胞（atypical squamous cell of undetermined significance，ASCUS）。

1.2.2 HPV DNA檢測(cè) 采用cobas 4800全自動(dòng)HPV樣本制備和檢測(cè)平臺(tái)（瑞士羅氏公司）檢測(cè)HPV DNA。該儀器檢測(cè)原理是基于實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)的多通道核酸檢測(cè)，以β球蛋白的管家基因?yàn)閮?nèi)對(duì)照，1次檢測(cè)可報(bào)告HPV16型、18型和其他12種高危HPV亞型（31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68b）不分型的陰、陽性結(jié)果。

1.2.3 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè) 采用新柏氏液體細(xì)胞學(xué)采樣瓶留取標(biāo)本，采用PANTHER系統(tǒng)（美國HOLOGIC Gen-Probe公司）及APTIMA HPV E6/E7 mRNA高危和分型試劑檢測(cè)HPV E6/E7 mRNA。該系統(tǒng)的檢測(cè)原理是基于轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增技術(shù)（transcription-mediated amplification，TMA）和雙動(dòng)力化學(xué)發(fā)光技術(shù)。第1步檢測(cè)14個(gè)高危型，報(bào)告陰、陽性，陽性標(biāo)本進(jìn)行第2步的分型檢測(cè)，報(bào)告HPV16型、HPV18/45型；如第1步檢測(cè)陽性，第2步檢測(cè)陰性則報(bào)告其他11個(gè)高危HPV亞型（31、33、35、39、51、52、56、58、59、66和68）不分型的陽性結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA初篩陽性率的比較

5 308 例患者中有4 062例檢測(cè)了HPV DNA，有1 246例檢測(cè)了HPV E6/E7 mRNA。HPV DNA初篩陽性率[17.67%（718/4 062）]明顯高于HPV E6/E7 mRNA[12.12%（151/1 246）]（P＜0.05）。

2.2 各組HPV DNA和HPV E6/E7mRNA陽性率的比較

根據(jù)TCT檢測(cè)結(jié)果將5 308例患者分為4個(gè)組：正常組（4 976例）、ASCUS組（231例）、LSIL組（69例）、HSIL組（32例）。HSIL組、LSIL組及ASCUS組HPV DNA陽性率與HPV E6/E7 mRNA陽性率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；正常組HPV DNA陽性率（15.07%）明顯高于HPV E6/E7 mRNA陽性率（8.90%）（P＜0.05）。見表1。

2.3 HPV DNA、HPV E6/E7mRNA陽性者中各組所占比例的比較

表1 正常組、ASCUS組、LSIL組、HSIL組HPV DNA、HPV mRNA陽性率比較

718例HPV DNA陽性者中正常組574例（79.95%）、ASCUS組82例（11.42%）、LSIL組40例（5.57%）、HSIL組22例（3.06%）。151例HPV E6/E7 mRNA陽性者中，正常組104例（68.88%）、ASCUS組24例（15.89%）、LSIL組15例（9.93%）、HSIL組8例（5.30%）。HPV DNA陽性者各組比例與HPV E6/E7 mRNA陽性者各組比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

以LSIL和HSIL為細(xì)胞病理學(xué)陽性，以正常和ASCUS為細(xì)胞病理學(xué)陰性。HPV E6/E7 mRNA陽性者中細(xì)胞病理學(xué)陽性患者的比例[15.23%（23/151）]明顯高于HPV DNA陽性者中細(xì)胞病理學(xué)陽性患者的比例[8.64%（62/718）]（P＜0.05）。

2.4 HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA篩查L(zhǎng)SIL和HSIL的敏感性和特異性

以LSIL和HSIL為細(xì)胞病理學(xué)陽性，以正常和ASCUS為細(xì)胞病理學(xué)陰性，計(jì)算HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA篩查L(zhǎng)SIL+HSIL的敏感性和特異性。HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA 篩查L(zhǎng)SIL+HSIL的敏感性分別為83.78%和85.19%，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；特異性分別為83.55%和89.49%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

目前，隨著HPV高危型與宮頸癌發(fā)病相關(guān)性研究的深入，HPV分型檢測(cè)越來越受到關(guān)注。HPV持續(xù)感染是宮頸癌及其癌前病變發(fā)生、發(fā)展的必要條件。檢測(cè)高危型HPV的持續(xù)感染可以輔助宮頸癌及其癌前病變的早期診斷和治療。美國陰道鏡及宮頸病理協(xié)會(huì)在其宮頸癌篩查指南中建議30～65歲的女性應(yīng)把HPV分型檢測(cè)和宮頸細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)作為篩查策略[5]。

有研究結(jié)果表明，HPV DNA陽性者中有絕大多數(shù)是HPV一過性感染，約70%～80%的女性在一生中有可能感染HPV，其中有90%的感染者可在8～24 個(gè)月內(nèi)自然清除，只有高危型HPV的持續(xù)性感染才有可能導(dǎo)致宮頸病變或?qū)m頸癌[6-8]。HPV感染后，HPV DNA基因整合到宿主細(xì)胞染色體中，E6/E7表達(dá)的癌基因蛋白有抑制抑癌蛋白p53和Rb的功能，影響感染細(xì)胞的生長(zhǎng)周期，導(dǎo)致細(xì)胞向癌變方向發(fā)展[9-10]。HPV E6/E7 mRNA是與宮頸癌進(jìn)展相關(guān)的mRNA，如未檢出mRNA轉(zhuǎn)錄物說明病毒仍處于游離或休眠狀態(tài)；而高頻率的E6/E7 mRNA轉(zhuǎn)錄活動(dòng)說明高危型HPV已整合入宿主基因并干擾細(xì)胞周期控制，導(dǎo)致LISL和HSIL的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，HPV DNA篩查陽性率明顯高于HPV E6/E7 mRNA篩查陽性率。正常組HPV DNA陽性率明顯高于HPV E6/E7 mRNA陽性率，表明部分HPV感染者尚未引起宿主細(xì)胞的病理改變。ASCUS組、LSIL組、HSIL組HPV DNA陽性率與HPV E6/E7 mRNA陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與文獻(xiàn)報(bào)道[11]一致。

TCT陽性是患者進(jìn)行陰道鏡檢測(cè)和宮頸病理活檢的重要依據(jù)。本研究以TCT結(jié)果（LSIL+HSIL為細(xì)胞病理學(xué)陽性，正常+ASCUS為細(xì)胞病理學(xué)陰性）為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA篩查L(zhǎng)SIL+HSIL的敏感性和特異性。結(jié)果顯示，HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA 篩查L(zhǎng)SIL+HSIL的敏感性一致（P＞0.05），但HPV E6/E7 mRNA的特異性優(yōu)于HPV DNA（P＜0.05）。HPV E6/E7 mRNA陽性者中細(xì)胞病理學(xué)陽性患者的比例[15.23%（23/151）]明顯高于HPV DNA陽性者中細(xì)胞病理學(xué)陽性患者的比例[8.64%（62/718）]（P＜0.05）。由此可見，HPV E6/E7 mRNA陽性提示細(xì)胞病變的特異性更高。NOLTE等[12]的研究結(jié)果顯示，與TCT相比，HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA的敏感性和特異性均較高，更適合于宮頸癌的初篩。還有研究結(jié)果顯示，對(duì)于宮頸上皮內(nèi)瘤變患者治療后的隨訪，采用HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)可有效評(píng)估復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[13-14]。

臨床上HPV篩查的目的并不僅僅是為了檢測(cè)HPV感染，還要發(fā)現(xiàn)宮頸癌高風(fēng)險(xiǎn)人群，進(jìn)而決定哪些人不需要進(jìn)行進(jìn)一步的治療并回歸常規(guī)人群管理。HPV E6/E7 mRNA是有致癌作用的mRNA，故與HPV DNA檢測(cè)相比，可有效減少HPV一過性感染的檢出并有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值，從而減少不必要的陰道鏡組織學(xué)檢查，并減輕患者不必要的心理壓力，降低醫(yī)療費(fèi)用。