李善姬，宋春梅，葛紅娟，張洋婷，劉 敏，梁承武

(吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

失眠癥屬于睡眠障礙的范疇，主要表現(xiàn)為入睡困難或早醒，常伴有睡眠不深與多夢(mèng)。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，由于失眠、抑郁或焦慮等疾病的發(fā)生，可嚴(yán)重影響人們的正常生活、工作和學(xué)習(xí)，并能加重或誘發(fā)其他心腦血管方面的疾病，增加社會(huì)和家庭的負(fù)擔(dān)，因此開發(fā)具有防治失眠癥或能改善睡眠質(zhì)量的新藥具有重要意義。針對(duì)失眠的藥物治療在改善睡眠的同時(shí)容易影響正常生理睡眠，以及清醒后存在藥物延續(xù)作用。此外，藥物治療失眠癥常引起藥物依賴、耐受等不良反應(yīng)，因此該類藥物多按照“按需用藥”和“間斷性用藥”的原則使用。而中醫(yī)藥治療失眠，因其不良反應(yīng)小以及依賴性輕，具有一定優(yōu)勢(shì)[1-2]。

寶心寧膠囊為擬研制開發(fā)的具有滋陰養(yǎng)血、寧心安神、安神鎮(zhèn)靜作用，用于失眠癥的中藥復(fù)方新藥，由酸棗仁、琥珀、珍珠母、黃芩、梔子和冰片組成[3]，具有鎮(zhèn)靜安神，清熱瀉火之效，適用于治療心火擾動(dòng)、熄風(fēng)定眩以及神志不安所致的眩暈和失眠癥[4-7]。為探索其療效機(jī)理，本研究探討寶心寧膠囊對(duì)小鼠睡眠的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

清潔級(jí)昆明小鼠，雌雄各半，體重(20±2)g。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-(吉)2011-0004，購于長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

寶心寧膠囊，規(guī)格：0.3 g/粒，批號(hào)：20170201，由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)植物化學(xué)研究中心提供。地西泮片，規(guī)格：2.5 mg/片，批號(hào)：1611014，天津力生制藥股份有限公司產(chǎn)品。戊巴比妥鈉，規(guī)格：500 mg/瓶，批號(hào)：WXBB6772V，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。

多功能小鼠自主活動(dòng)記錄儀，型號(hào)：YLS-1A，山東省社會(huì)科學(xué)院設(shè)備站產(chǎn)品；大小鼠轉(zhuǎn)棒儀，型號(hào)：DXP-2，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所產(chǎn)品。

1.2 寶心寧膠囊對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量小鼠睡眠率的影響

50只昆明小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白對(duì)照組,陽性對(duì)照組(地西泮片10 mg/kg)組,寶心寧膠囊高、中、低(1800、900、450 mg/kg)給藥劑量組。給藥組灌胃不同濃度的寶心寧混懸液，1次/d，20 mL/kg，連續(xù)給藥1周，對(duì)照組給予等容量蒸餾水灌胃。實(shí)驗(yàn)期間每2天稱量體重1次，正常攝食飲水。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定戊巴比妥鈉閾下催眠劑量80%～90%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量為32 mg/kg。選擇接近藥物達(dá)峰濃度的平均時(shí)間，即給動(dòng)物灌胃超純水1 h后，腹腔注射戊巴比妥鈉，記錄15 min內(nèi)入睡動(dòng)物數(shù)(翻正反射消失達(dá)1 min以上者)，進(jìn)行協(xié)同睡眠測(cè)定。比較對(duì)照組與不同劑量給藥實(shí)驗(yàn)組入睡動(dòng)物數(shù)之間的差異。組間顯著性統(tǒng)計(jì)處理方法采用χ2檢驗(yàn)。

1.3 寶心寧膠囊對(duì)戊巴比妥鈉閾上劑量小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的影響

將50只昆明小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，分組及給藥同“1.2”。

選擇戊巴比妥鈉劑量。給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉，30 min內(nèi)小鼠翻正反射消失達(dá)到1 min以上者，說明其進(jìn)入睡眠狀態(tài)。試驗(yàn)前通過預(yù)試驗(yàn)確定使小鼠完全入睡，但又不使睡眠時(shí)間過長(zhǎng)(≤10 min)的戊巴比妥鈉的劑量為44 mg/kg。末次給藥1 h按44 mg/kg劑量給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉溶液。記錄戊巴比妥鈉注射時(shí)間、小鼠入睡時(shí)間及睡眠結(jié)束時(shí)間，入睡時(shí)間與注射時(shí)間差計(jì)為睡眠潛伏期，睡眠結(jié)束時(shí)間與入睡時(shí)間差計(jì)為睡眠時(shí)間。給藥組與對(duì)照組交替進(jìn)行試驗(yàn)，觀察被試藥物和戊巴比妥鈉聯(lián)用對(duì)小鼠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間的作用。結(jié)果以平均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用組間t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

在戊巴比妥鈉閾下劑量,空白對(duì)照組,陽性對(duì)照組組,寶心寧膠囊高、中、低小鼠睡眠動(dòng)物數(shù)分別為0、10、8、7、5只。與對(duì)照組比較，寶心寧膠囊高、中兩個(gè)劑量均有提高睡眠率的作用(P<0.01和P<0.05)，均與戊巴比妥鈉產(chǎn)生協(xié)同作用。

與對(duì)照組比較，寶心寧膠囊3個(gè)給藥劑量組均能顯著延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠時(shí)間，明顯加快小鼠入睡時(shí)間(P<0.01和P<0.05)，結(jié)果見表1。

表 1 寶心寧膠囊對(duì)小鼠睡眠發(fā)生率的影響(n=10,min)

與空白對(duì)照組比較：*P<0.05，**P<0.01

3 討 論

頭痛發(fā)作時(shí)患者多伴有煩躁、失眠、焦慮、緊張等中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮的癥狀。此時(shí)，將病人安置在環(huán)境柔和安靜的房間里，并給予適量的鎮(zhèn)靜催眠藥物，使病人保持適度的睡眠，即可有效緩解其急性期癥狀。因此，在研究抗偏頭痛藥物中方劑的鎮(zhèn)靜催眠作用是不可缺少的。戊巴比妥鈉是臨床已知的常用中樞鎮(zhèn)靜藥物，本實(shí)驗(yàn)選用此藥物作為已知藥物，觀察被測(cè)藥物即寶心寧膠囊與戊巴比妥鈉是否有協(xié)同作用。即用藥后動(dòng)物是否出現(xiàn)閉目、低頭、俯臥、自發(fā)活動(dòng)受抑制等表現(xiàn)；用藥后是否具有對(duì)抗中樞神經(jīng)興奮作用，增強(qiáng)中樞神經(jīng)抑制藥的催眠作用[8-9]。

本實(shí)驗(yàn)中，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定80%～90%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量為32 mg/kg。對(duì)照組小鼠注射戊巴比妥鈉后僅以閉目、低頭、俯臥、自發(fā)活動(dòng)受抑制等表現(xiàn)為主，未出現(xiàn)翻正反射消失。且在注射藥物30 min后均恢復(fù)正常。高、中、低劑量組小鼠均出現(xiàn)了閉目、低頭、俯臥、自發(fā)活動(dòng)受抑制的表現(xiàn)，其中高劑量組小鼠有8只翻正反射消失，中劑量組有7只翻正反射消失，低劑量組有5只翻正反射消失。與對(duì)照組比較P<0.01和P<0.05，給予寶心寧膠囊后，寶心寧膠囊高、中兩個(gè)劑量均有提高睡眠率的作用，均與戊巴比妥鈉產(chǎn)生協(xié)同作用。

本研究通過觀察寶心寧膠囊對(duì)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間、睡眠潛伏期的影響，評(píng)價(jià)寶心寧膠囊對(duì)小鼠的催眠作用，并與地西泮進(jìn)行了對(duì)照。結(jié)果表明，寶心寧膠囊3個(gè)給藥劑量均能顯著延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠時(shí)間，明顯加快小鼠入睡時(shí)間，提示寶心寧膠囊對(duì)戊巴比妥鈉有協(xié)同的催眠作用，具有良好的鎮(zhèn)靜、催眠作用。

以酸棗仁、琥珀、珍珠母、黃芩、梔子和冰片諸多藥物配伍的寶心寧膠囊，擬研制開發(fā)為具有滋陰養(yǎng)血、寧心安神、安神鎮(zhèn)靜作用新藥,適用于治療心火擾動(dòng)以及神志不安所致的眩暈和失眠癥。實(shí)驗(yàn)表明：寶心寧膠囊可明顯提高睡眠率的作用，延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠時(shí)間，明顯加快小鼠入睡時(shí)間。顯示寶心寧膠囊具有改善小鼠睡眠作用。

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