周彥娜，薄世興，陳 瑩，黃厚今

(1 遵義醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學教研室，貴州遵義 563000;2遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院干部保健病房，貴州遵義 563000)

睡眠剝奪(sleep deprivation)指由生活事件或各種病理生理原因如藥物效應、慢性疾病、精神疾病或睡眠障礙導致的睡眠減少的狀態(tài)，且睡眠減少可以激發(fā)器官的一些改變，包括免疫功能、認知功能、內分泌功能等［1］。目前已有實驗報道，應用丙泊酚大鼠背側中縫核微量注射、五味子凍干粉、針刺可改善睡眠剝奪大鼠的睡眠［2-4］;藥理研究表明，靈芝具有免疫調節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、抗疲勞、降血糖、降血壓、消炎和鎮(zhèn)靜催眠等藥理作用［5］，而關于靈芝對睡眠剝奪大鼠睡眠的改善作用目前尚未見報道。本實驗旨在研究復方靈芝口服液對睡眠剝奪大鼠睡眠的影響。

1 材料及方法

1.1 主要試劑、儀器和藥品

復方靈芝口服液，貴州吉仁堂藥業(yè)有限公司;氯苯丙氨酸(PCPA)，美國Sigma 公司;巴比妥鈉、戊巴比妥鈉，上海紫一試劑廠;注射器、生理鹽水若干。

1.2 實驗方法

健康SPF 級雌性SD 大鼠，體重180～200g，由第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院動物中心提供，合格證號:SCXK(渝)2012-0005。光照每12h 明暗交替，自由飲食，開始實驗前適應性飼養(yǎng)5d。隨機分為5 組:空白組(B組)睡眠剝奪組(M 組)、復方靈芝口服液干預低、中、高劑量組(GL 組、GM 組、GH 組);GL 組、GM組、GH 組分別給予0.15、0.75、1.5g/(kg·bw)復方靈芝口服液灌胃，B 組及M 組給予同等體積的去離子水灌胃，每天1 次，連續(xù)灌胃至實驗結束;灌胃14d 后，除B 組外，其余各組連續(xù)2d 每天腹腔注射氯苯丙氨酸［300mg/(kg·bw)］制造睡眠剝奪模型［6］，B 組給予腹腔注射同等體積的生理鹽水，造模成功后進行催眠實驗。

依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范實施手冊》(2003年版)［7］中關于改善睡眠保健食品的判定標準進行，采用的實驗方法有直接睡眠實驗、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗，根據(jù)預試驗結果得出，戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗的藥物用量分別為12、25、120mg/(kg·bw)，連續(xù)3d 依次進行直接睡眠實驗和戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗，每天晚上9:00 開始實驗。

實驗數(shù)據(jù)中入睡動物數(shù)為分類變量資料，采用卡方檢驗;其余數(shù)據(jù)均為計量資料，以均數(shù)± 標準差(±s)表示，采用ANOVA 方差分析，統(tǒng)計軟件選用SPSS18.0 軟件，檢驗水準α=0.05。

2 結果與分析

2.1 戊巴比妥鈉閾下劑量睡眠情況

給予復方靈芝口服液后，各組大鼠均未出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象;根據(jù)表1 中數(shù)據(jù)可看出，隨著靈芝劑量增加，各組出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象動物數(shù)也增加，但統(tǒng)計學未見差異。

表1 戊巴比妥鈉閾下劑量睡眠情況

2.2 延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間

與B 組相比，M 組大鼠的戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間均明顯延長(P＜0.05);與M 組相比，GM 組和GH組較M 組大鼠的戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間明顯延長(P＜0.05)，與GL 組相比，GM 組和GH 組較GL 組睡眠時間明顯延長(P＜0.05)，且GM 組與GH 組相比有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)(表2)。

表2 延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間(±s)

表2 延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間(±s)

注:a 與B 組相比P＜0.05，b 與M 組相比P＜0.05，b 與GL 組相比P＜0.05，c 與GM 組相比，P＜0.05。

2.3 巴比妥鈉睡眠潛伏期

由表3 可見，經方差分析，F(xiàn)=1.133，P=0.353 ＞0.05，各組之間潛伏期無差異。

表3 巴比妥鈉睡眠潛伏期(±s)

表3 巴比妥鈉睡眠潛伏期(±s)

3 討論

復方靈芝口服液的成分均選自國家公布的藥食兩用中藥，且已有多項試驗證實具有鎮(zhèn)靜催眠的功效［5，8］，是我國具有鎮(zhèn)靜催眠作用的中醫(yī)藥方劑中的常用藥物。檢測藥物的鎮(zhèn)靜催眠作用評價方法是參照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范實施手冊》 (2003 版)［7］進行的，包括延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間實驗、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗三項實驗中二項陽性，且無明顯直接睡眠作用，可判定該受試樣品具有改善睡眠的功能。

3.1 直接睡眠實驗和戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗

實驗研究發(fā)現(xiàn)，給予復方靈芝口服液后，各組大鼠均未出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象，說明直接睡眠實驗陰性。戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗是檢測藥物是否具有改善睡眠功能的重要指標之一;實驗結果發(fā)現(xiàn)，隨著靈芝劑量增加，各組出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象動物數(shù)也增加，但統(tǒng)計學未見差異。

3.2 延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間實驗

延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間實驗是檢測藥物是否具有改善睡眠功能的重要指標之一，本實驗結果顯示，與B 組相比，M 組睡眠時間明顯延長，說明睡眠剝奪狀態(tài)可以增加大鼠戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間;與M 組和GL 組相比，GM 組、GH 組大鼠的睡眠時間明顯延長，且GH 組較GM 組明顯延長，說明給予復方靈芝口服液可明顯延長睡眠剝奪大鼠戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間。

3.3 巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗

巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗是檢測藥物是否具有改善睡眠功能的重要指標之一，實驗研究發(fā)現(xiàn)，各個組間未見差異性，即該項實驗結果呈陰性?？紤]原因是:(1)巴比妥鈉藥物的量在預試驗時未確定好;(2)實驗動物因為重復給予戊巴比妥鈉，對此類藥物產生了耐受性，需要加大劑量。總之，關于復方靈芝口服液對巴比妥鈉誘導的睡眠潛伏期尚需進一步驗證。

4 結論

復方靈芝口服液可延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間，但對增加睡眠剝奪的入睡動物數(shù)和縮短巴比妥鈉誘導的潛伏期無明顯作用，且無直接睡眠作用，說明復方靈芝口服液可明顯延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間。

［1］Venancio D P，et al.Sleep Deprivation Alters Rat Ventral Prostate Morphology，Leading to Glandular Atrophy:A Microscopic Study Contrasted with the Hormonal Assays ［J］.BioMed Research International，2012，10:1-6.

［2］肖軍，等.中縫背核注射丙泊酚對睡眠剝奪模型大鼠睡眠行為的影響［J］.臨床麻醉學雜志，2010，7:616-618.

［3］程少冰，張毅敏，唐純志，等.針刺對不同時段睡眠剝奪大鼠模型行為學及TNF-α 含量的影響［J］.中國老年學雜志，2012，32(1):77-79.

［4］王曉蕾，李飛，李廷利.五味子凍干粉改善睡眠剝奪果蠅睡眠作用的實驗研究［J］.世界科學技術:中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2010，3:409-412.

［5］賈薇，吳岷，張勁松，等.靈芝成分改善睡眠功能試驗初探［J］.食用菌學報，2005，12(3):43-47.

［6］肖成榮，馬增春，李海靜，等.PCPA 失眠大鼠模型的制作及其機制［J］.毒理學雜志，2007，21(4):326-326.

［7］中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗與評價技術規(guī)范［S］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003，632-635.

［8］江海濤，等.靈芝提取物及復合制劑改善睡眠和免疫調節(jié)的研究［J］.食用菌，2009，3:64-66.