陸義紅，蔣莉莎，宋恩學(xué)(安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，合肥230601)

子宮頸癌是女性最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，研究表明其發(fā)生發(fā)展與癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相關(guān)[1～3]。microRNA(miRNA)是一類非編碼小RNA分子，通過(guò)結(jié)合靶基因的3'非編碼區(qū)而調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，從而參與重要的生理病理過(guò)程[4，5]。miRNA在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過(guò)程中起重要作用，腫瘤組織中也存在大量的miRNA異常表達(dá)[6，7]。研究表明，miRNA與多種腫瘤進(jìn)程相關(guān)，在不同腫瘤中存在特異性表達(dá)，可作為腫瘤發(fā)生及預(yù)后的重要生物標(biāo)志物[8]。miR-126在乳腺癌、結(jié)腸癌、白血病、胰腺癌等多種腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，可抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移[9]，但miR-126在子宮頸癌組織中的表達(dá)鮮有報(bào)道。本研究探討子宮頸癌組織中miR-126表達(dá)變化與患者臨床病理特征、療效及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機(jī)選取2008年11月～2016年11月本院收治的子宮頸癌患者98例，于入院后行腫瘤標(biāo)志物及MRI檢查，符合子宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，均采用廣泛子宮切除(EH)聯(lián)合盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)(LPL)治療，術(shù)中留取子宮頸癌組織，均經(jīng)病理檢查確診。患者年齡29～71(53.17±3.56)歲，國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)臨床分期為Ⅰa2期23例、Ⅰb1期21例、Ⅰb2期18例、Ⅱa期31例、Ⅱb期5例，鱗狀細(xì)胞癌54例、腺癌30例、腺鱗癌14例，高分化25例、中分化66例、低分化41例，病理分級(jí)為G1 32例、G2 19例、G3 47例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移66例、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者未行宮頸放化療等抗腫瘤治療，生殖道解剖結(jié)構(gòu)正常，自愿簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在免疫缺陷相關(guān)合并癥、合并其他惡性腫瘤。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 子宮頸癌組織中miR-126表達(dá)檢測(cè) 采用熒光定量PCR法。將子宮頸癌組織標(biāo)本勻漿破碎，按照TRIzol試劑(Invitrogen)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行總RNA提取，DEPC水溶解RNA。RNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)參照HairpinitTM miRNAs qPCR Quantitation Kit試劑盒說(shuō)明書(shū)，反應(yīng)體系20 μL：包括total RNA 1 μg、oligo(dT)0.5 μL、Random primer 0.5 μL、Random primer 0.5 μL、10 mmol/L dNTP 2 μL、RNase inhibitor 0.5 μL、5×buffer 4 μL、M-MLV 0.5 μL，剩余用H2O(RNase free)補(bǔ)齊；反應(yīng)條件：16 ℃ 30 min合成RNA/DNA雜合雙鏈，42 ℃ 30 min水解RNA鏈，85 ℃ 5 min合成DNA雙鏈。采用Applied Biosystems 7500儀器進(jìn)行熒光定量PCR，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性15 s， 60 ℃退火1 min，共40個(gè)循環(huán)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystems公司。采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-126的相對(duì)表達(dá)量，以U6 mRNA為內(nèi)參。miR-126的相對(duì)表達(dá)量高于其平均值為高表達(dá)，低于或等于其平均值為低表達(dá)。

1.3 隨訪 兩年內(nèi)患者定期回醫(yī)院復(fù)查。隨訪內(nèi)容包括盆腔檢查、陰道檢查脫落細(xì)胞學(xué)檢查、胸部X線檢查、血常規(guī)及宮頸鱗狀細(xì)胞癌抗原檢測(cè)等。記錄患者復(fù)發(fā)(出現(xiàn)新的病灶或腫大淋巴結(jié))及生存情況。若2年內(nèi)未復(fù)發(fā)為治療有效，若復(fù)發(fā)為治療無(wú)效)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)與百分?jǐn)?shù)表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-126表達(dá)與子宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 miR-126的表達(dá)與子宮頸癌分化程度、臨床分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)(P均<0.05)，與年齡、分型、腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 miR-126表達(dá)與子宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[例(%)]

2.2 miR-126表達(dá)與療效及預(yù)后的關(guān)系 術(shù)后2年，miR-126高表達(dá)41例中治療有效34例(82.93%)、無(wú)效7例(17.07%)；低表達(dá)57例中治療有效39例(68.42%)、無(wú)效18例(31.58%)；二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。術(shù)后2年，miR-126高表達(dá)41例中生存37例(90.24%)、死亡4例(9.76%)；低表達(dá)57例中生存46例(80.70%)、死亡11例(19.30%)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

近年來(lái)，子宮頸癌的發(fā)病率逐年升高，位于女性惡性腫瘤的第二位。人們生活工作壓力增大、免疫力低、首次性生活年齡<16歲、生活習(xí)慣不良等，都會(huì)導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)病率升高[1]。全球每年約有20多萬(wàn)女性死于子宮頸癌，嚴(yán)重威脅女性身心健康[2]。目前，子宮頸癌患者日趨年輕化。子宮頸癌的發(fā)展是一個(gè)漸變到突變的過(guò)程，因此早診斷早治療是關(guān)鍵[12]。臨床治療子宮頸癌主要采取手術(shù)治療，主要目的在于切除原發(fā)病灶及周圍癌變組織，并且遵循避免盲目擴(kuò)大手術(shù)范圍、減少術(shù)后并發(fā)癥的原則，提高患者的生存質(zhì)量[13]。隨著近年醫(yī)學(xué)研究的發(fā)展，腹腔鏡技術(shù)應(yīng)用較為廣泛，LRH治療子宮頸癌技術(shù)越發(fā)成熟，患者更易于接受。因此本研究均采用LRH聯(lián)合LPL的治療方案[14]。

有關(guān)miRNA與腫瘤的研究越來(lái)越深入。miRNA在腫瘤的進(jìn)程中起重要作用，尤其可對(duì)在腫瘤發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移中直接參與的基因進(jìn)行表觀調(diào)控[13]。部分miRNA在人類腫瘤組織中存在異常表達(dá)，被鑒定為癌基因、抑癌基因，為腫瘤特異性診斷和治療提供了新的靶點(diǎn)[14]。miRNA位于基因組中常發(fā)生變異的區(qū)域，而這些區(qū)域的變異會(huì)伴隨腫瘤的發(fā)生[15，16]。相關(guān)研究顯示，miR-126在不同的腫瘤組織中均存在表達(dá)異常[17～20]，在胃癌組織中miR-126的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度有關(guān)，此外miR-126可抑制胃癌細(xì)胞的侵襲[17]。Crk基因是miR-126的靶基因，miR-126可通過(guò)抑制Crk的表達(dá)而抑制非小細(xì)胞肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移[18]。

本研究結(jié)果顯示，miR-126的表達(dá)與子宮頸癌分化程度、臨床分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)，與年齡、分型、腫瘤直徑無(wú)關(guān)，提示miR-126可能在宮頸癌的進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。術(shù)后2年，miR-126高表達(dá)患者的療效優(yōu)于低表達(dá)患者，復(fù)發(fā)率、病死率低于低表達(dá)者。miR-126低表達(dá)的子宮頸癌患者易復(fù)發(fā)及死亡?？梢?jiàn)miR-126在子宮頸癌組織中發(fā)揮抑癌基因樣作用。本研究為miR-126成為子宮頸癌臨床治療靶點(diǎn)與預(yù)后預(yù)測(cè)的生物標(biāo)記物提供了理論基礎(chǔ)。

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