譚曉山，李 俊，李 平，尹楊莎，陳光候，李鵬程，陳大芳，龍清孟

（貴州省種畜禽種質(zhì)測定中心，貴州 貴陽 550001）

在養(yǎng)豬生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用豬人工授精技術(shù)可有效地提高良種利用率，充分利用雜種優(yōu)勢，減少疾病的傳播，克服時間和區(qū)域的差異，節(jié)省人力、物力、財力，提高經(jīng)濟效益[1]。影響精液保存效果的因素有很多，除了公豬精液本身的品質(zhì)這個最直接的原因外，稀釋液的品質(zhì)也是影響精液保存效果的直接原因[2-3]。為研究不同稀釋液配方對不同種豬精液保存效果的影響，本試驗選擇了《豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范》（GB/T 25172—2010）中的 4種稀釋液配方，以便篩選出對杜洛克種豬和大約克種豬精液保存效果最佳的配方。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

選擇體況良好、無繁殖疾病的杜洛克種公豬與大約克種公豬各3頭作為試驗動物。

1.2 試驗時間與地點

試驗時間2017年11月，試驗地點位于貴州省納雍縣骔嶺鎮(zhèn)貴州霧翠茗香生態(tài)農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，平均海撥1 970.9 m，采樣時氣溫約為8℃。

1.3 儀器設(shè)備

全自動精液質(zhì)量分析系統(tǒng)（德國Minitube）、移液器（Eppendorf）、正置顯微鏡（奧林巴斯）、水浴鍋、17℃恒溫箱、高壓滅菌鍋等。

1.4 稀釋液配方

4種不同稀釋液配方組成詳見表1。

表1 不同稀釋液配方組成 g/L

1.5 試驗方法

于當?shù)貢r間上午11：00左右，待氣溫上升后通過人工采精方法收集2個品種種公豬精液，并立即進行活力等檢測，然后按照1∶2的比例進行3倍稀釋，稀釋液提前置于37℃水浴鍋中預(yù)熱，以減少對精子的刺激。精液樣品稀釋完畢后，立即置于17℃樣品運輸箱（車載冰箱）中運回實驗室。

分別于17℃保存后的24 h、48 h、96 h，通過全自動精子質(zhì)量分析系統(tǒng)對種豬精液進行活力檢測，載玻片、移液器吸頭等提前置于37℃恒溫加熱板上預(yù)熱。精子活力（前進式活力）以呈前進運動精子所占的百分率表示[4]。

為檢測稀釋液滅菌處理對種豬精液保存效果的影響，于采精后分別用滅菌與未滅菌的稀釋液稀釋保存種豬精液，并在17℃保存24 h后進行活力檢測。稀釋液滅菌條件為120℃、高壓（1.2 Mpa）條件下20 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 種豬原精液質(zhì)量

杜洛克、大約克種豬精液質(zhì)量，檢測結(jié)果詳見表2。

表2 種豬原精液質(zhì)量

2.2 不同稀釋液對杜洛克種豬精子活力的影響

2.2.1 杜洛克種豬24 h精子活力 精液保存24 h后，在37℃下對杜洛克種豬精子活力進行檢測，4種配方對精子活力（前進式活力）的影響均差異不顯著。其中，配方4的精子前進式活力和快速前進活力最高，分別為（70.60±5.94）%、（27.70±3.64）%；配方 2 的最低，分別為（63.91±1.92）%、（15.18±0.35）%，詳見表3。

表3 杜洛克種豬24 h精子活力

2.2.2 杜洛克種豬48 h精子活力 對保存48 h后的杜洛克種豬精子活力檢測，除環(huán)狀移動活力外，其余指標均差異不顯著。其中，配方4的精子前進式活力和快速前進活力最高，分別為（64.99±20.68）%、（27.83±19.08）%；配方2的最低，分別為（37.95±1.84）%、（4.56±3.71）%；與24 h檢測結(jié)果一致，詳見表 4。

表4 杜洛克種豬48 h精子活力

2.2.3 杜洛克種豬96 h精子活力 在96 h檢測時，4種配方對杜洛克種豬精子各指標差異均不顯著，但配方4保存效果最好，前進式活力和快速前進活力分別達（53.44±24.00）%、（18.88±19.75）%；配方 2效果最差，分別只有（17.00±11.77）%、（4.56±4.35）%；這與24 h、48 h檢測結(jié)果一致，詳見表5。

表5 杜洛克種豬96 h精子活力

2.3 不同稀釋液對大約克種豬精子活力的影響

2.3.1 大約克種豬24 h精子活力 精液保存24 h后，在37℃下對大約克種豬精子活力進行檢測，4種配方對精子前進式活力和快速前進活力的影響均差異不顯著。其中，配方2的精子前進式活力最高，為（76.82±4.95）%；配方 4的最低，為（62.26±17.43）%；這與杜洛克種豬相反。配方3的精子快速前進活力最高，為（39.13±14.32）%；配方 1的最低，為（19.50±4.67）%；這與杜洛克種豬結(jié)果不一致，詳見表6。

表6 大約克種豬24 h精子活力

2.3.2 大約克種豬48 h精子活力 對保存48 h后的大約克種豬精子活力檢測，4種配方對精子活力的影響均差異不顯著。但配方4的精子前進式活力和快速前進活力最高，分別為（56.84±14.99）%、（22.52±6.26）%，與杜洛克種豬一致。配方3的精子前進式活力最低，為（47.12±37.70）%；配方 1的精子快速前進活力最低，為（11.09±5.51）%，與 24 h檢測結(jié)果一致，詳見表7。

表7 大約克種豬48 h精子活力

2.3.3 大約克種豬96 h精子活力 96 h檢測精子活力發(fā)現(xiàn)，4種配方對大約克種豬精子前進式活力和快速前進活力的影響均差異均不顯著。但配方2的精子前進式活力和快速前進活力最高，分別為（45.90±38.67）%、（17.29±15.61）%；配方 4的最低，分別只有（19.42±8.42）%、（4.94±0.15）%，詳見表 8。

表8 大約克種豬96 h精子活力

2.4 稀釋液滅菌處理對精子活力的影響

從表9中可以看出，4種配方經(jīng)高溫滅菌處理后，在鮮精的稀釋倍數(shù)、保存環(huán)境及條件一致的情況下，其精子前進活力和快速前進活力均顯著低于未滅菌的4種配方。4種配方滅菌處理后，配方3的精子前進活力和快速前進活力最高，分別為（16.19±0.96）%、（6.19±1.44）%，這一點與未滅菌處理的檢測結(jié)果基本一致。

表9 稀釋液滅菌處理對大約克種豬精子活力的影響

3 討論

3.1 不同稀釋液的精液保存效果

96 h內(nèi)，4種配方保存精液對精子前進式活力和快速前進活力的影響均差異不顯著。不同配方對兩個品種精液保存效果各不同。

對杜洛克種豬，24 h內(nèi)、48 h內(nèi)和96 h內(nèi)的精子前進式活力和快速前進活力，配方4的保存效果均是最好，配方2的保存效果最差。在實際生產(chǎn)中，低溫保存的精液要求精子活力（呈前進運動精子所占的百分率）不低于0.6[5]（百分制則為60%），因此，4種配方對杜洛克種豬精液保存效果在24 h時均是有效的，在48 h時只有配方4能滿足要求，96 h時則均達不到要求。對大約克種豬，24 h時和96 h時，配方2保存效果最佳；48 h時，配方4效果最好。本次試驗發(fā)現(xiàn)48 h、96 h時，4種配方保存的精子前進式活力均達不到0.6。不同配方對不同品種豬的精液保存效果上存在差異的原因可能與品種有關(guān)，具體原因有待于進一步研究。

3.2 稀釋液滅菌的精液保存效果

4種稀釋液配方高溫滅菌后保存的精子前進式活力和快速前進活力均顯著低于未滅菌的稀釋液，且稀釋液經(jīng)滅菌后由無色變?yōu)樽攸S色和棕紅色，可能是由于葡萄糖高溫滅菌時分解產(chǎn)生5-羥甲基糠醛（5-羥基呋喃甲醛）導(dǎo)致的，且溶液的色度與5-羥甲基糠醛含量成正比[6]；而精子是通過糖酵解過程將葡萄糖、果糖等六碳糖分解為乳酸而獲得能量的，且自身缺乏糖類物質(zhì)[4]，從而導(dǎo)致滅菌后的稀釋液保存效果顯著低于未滅菌的稀釋液保存效果。

因此，在實際生產(chǎn)過程中，添加有葡萄糖等糖類的稀釋液應(yīng)盡量避免高溫滅菌，或滅菌后再添加糖類等物質(zhì)，以免引起相關(guān)物質(zhì)變性而影響精液保存效果。

4 結(jié)論

依據(jù)GB/T 25172—2010《豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范》中的4種稀釋液配方配制的稀釋液，在24 h內(nèi)均可以用于杜洛克和大約克種豬原精液的稀釋和配種。因此，建議在實際生產(chǎn)過程中杜洛克和大約克豬分別選擇配方4和配方2用于種豬精液稀釋和配種，且為了保證良好的輸配效果，低溫保存時間不宜超過24 h。同時，配制的稀釋液不用高溫高壓滅菌處理，以免引起相關(guān)物質(zhì)變性而影響保存效果。

[1]邵順寧，尹慶寧.影響豬人工授精效果的原因及對策[J].當代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2013（5）：34-36.

[2]王龍.不同稀釋液保存公豬精液的效果試驗[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2016，41（4）：3-5.

[3]白永成.淺述影響豬人工授精效果的原因及技術(shù)要點[J].現(xiàn)代畜牧科技，2017（6）：71.

[4]楊利國主編.動物繁殖學[M].第2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010：105.

[5]時洪君.豬的人工授精操作要點[J].現(xiàn)代畜牧科技，2015（4）：49.

[6]溫玉麟.葡萄糖溶液的穩(wěn)定性[J].藥學通報，1959（12）：642-644.