趙曉娥, 宋愛愛，孫念琴，張 靜, 魏 強(qiáng), 徐明輝，李延華,馬保華*

(1. 西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)部動(dòng)物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 陜西 楊凌 712100;2. 許昌百益奶山羊養(yǎng)殖場, 河南 許昌 461000； 3. 富平縣畜牧技術(shù)推廣中心, 陜西 富平711700)

動(dòng)物體內(nèi)生殖激素對其生殖活動(dòng)調(diào)控有重要作用，直接調(diào)控母畜的發(fā)情和排卵、生殖道內(nèi)的生殖細(xì)胞的運(yùn)行、胚胎附植以及懷孕和泌乳[1]。妊娠期間激素水平的動(dòng)態(tài)變化對維持妊娠、胎兒的生長發(fā)育、及乳腺發(fā)育起重要作用。然而，在自然繁殖情況下，生殖激素存在季節(jié)性變化，這種季節(jié)性變化使動(dòng)物處于相對固定的繁殖周期。研究表明，綿羊血液中FSH和LH的水平存在著明顯的季節(jié)性變化，在春分時(shí)低，在夏至和秋分時(shí)明顯升高[2-3]；灘羊P4分泌量秋冬季節(jié)顯著高于春夏季節(jié)[2]。奶山羊在不同季節(jié)妊娠后，季節(jié)性變化是否引起妊娠母羊激素水平變化還不清楚。因此，本研究隨機(jī)選擇8月、10月、12月、翌年2月妊娠的關(guān)中奶山羊各10只，分別于配種后20 d、75 d、130 d及出現(xiàn)分娩癥狀時(shí)采集其靜脈血，離心分離血清，采用ELISA試劑盒檢測血清中雌激素(E2)、孕酮(P4)、促卵泡生成素(FSH)、促黃體素(LH)、催乳素(PRL)和生長激素(GH)水平變化規(guī)律，為調(diào)控奶山羊的在不同季節(jié)配種提供內(nèi)分泌方面的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及管理

試驗(yàn)選擇年齡1.5～4歲體況良好關(guān)中奶山羊，無繁殖及傳染性疾病，發(fā)情周期正常，于8月、10月、12月、翌年2月同期發(fā)情、配種處理；隨機(jī)選擇8月、10月、12月、翌年2月妊娠的關(guān)中奶山羊各10只，共40只。舍飼飼喂，常規(guī)管理。

1.2 試驗(yàn)方法

分別于試驗(yàn)羊妊娠后20 d、75 d、130 d及分娩時(shí)采集其靜脈血， 2 000 r/min離心10 min，將分離的血清移入2 mL離心管中，-20 ℃保存。分別用生殖激素與生長激素ELISA試劑盒(上海邦奕生)對血清中的雌激素(E2)、孕酮(P4)、促卵泡生成素(FSH)、促黃體素(LH)、催乳素(PRL)和生長激素(GH)水平進(jìn)行測定，由上海邦奕生物科技有限責(zé)任公司代測。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel軟件和SPASS 17.0 軟件的ANOVA模塊對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行差異顯著性統(tǒng)計(jì)和分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)后均以平均值(X)±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間E2檢測結(jié)果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出現(xiàn)分娩癥狀時(shí)靜脈血中E2水平的ELISA檢測結(jié)果如圖1所示。由圖1可見，8月、10月、12月、2月妊娠母羊妊娠期間，靜脈血中E2水平呈上升趨勢，130 d后基本穩(wěn)定。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d，75 d，130 d和分娩前外周血中E2濃度變化范圍分別為17.45～18.43 ng/L，26.60～29.198 ng/L， 48.79～52.90 ng/L，46.63～53.63 ng/L，在同一妊娠階段，不同月份妊娠母外周血中E2水平無顯著性差異(P>0.05)。表明母羊不同妊娠月份對其E2水平?jīng)]有影響。

2.2 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間P4檢測結(jié)果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出現(xiàn)分娩癥狀時(shí)靜脈血中P4水平的ELISA檢測結(jié)果如圖2所示。由圖2可以看出，8月、10月、12月、2月妊娠母羊妊娠期間，靜脈血中P4水平呈緩慢上升趨勢，分娩時(shí)，急劇下降。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中FSH濃度的變化范圍分別為4829.92～5358.40 pmol/L， 5128.26～6123.54 pmol/L， 5466.99～6305.63 pmol/L， 1899.39～1938.86 pmol/L，8月份妊娠母羊在妊娠的75 d，P4水平顯著高于10月份妊娠母羊(P<0.05)，其余妊娠階段，不同月份妊娠母羊外周血中P4水平無顯著性差異(P>0.05)。說明母羊妊娠月份不同對其P4水平有影響，但影響較小。

圖1 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間E2水平Fig.1 The E2 levels of pregnant dairy goats in different months

圖2 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間P4水平Fig.2 The P4 levels of pregnant dairy goats in different months

2.3 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間FSH檢測結(jié)果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出現(xiàn)分娩癥狀時(shí)靜脈血中FSH水平的ELISA檢測結(jié)果如圖3所示。由圖3可見，妊娠母羊在妊娠期間，靜脈血中FSH水平一直呈緩慢下降趨勢。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中FSH濃度的變化范圍分別為6.60～6.99 IU/L，6.04～6.51 IU/L，5.91～6.77 IU/L，4.45～5.57 IU/L，2月份妊娠母羊在妊娠的130 d， FSH水平顯著低于10月份妊娠母羊(P<0.05)，分娩前，2月份和12月份妊娠母羊外周血中FSH水平高于8月份和10月份妊娠母羊，差異顯著(P<0.05)。說明母羊妊娠月份不同對其FSH水平有一定的影響，特別是妊娠后期影響較大。

2.4 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間LH檢測結(jié)

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出現(xiàn)分娩癥狀時(shí)靜脈血中LH水平的ELISA檢測結(jié)果如圖4所示。由圖4可見，8月、10月、12月、2月妊娠母羊妊娠期間，靜脈血中LH水平一直呈下降趨勢。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中LH濃度的變化范圍分別為200.53～207.09 pg/L，154.89～185.62 pg/L，142.33～152.28 pg/L，155.85～175.47 pg/L，2月份妊娠母羊在妊娠的75 d，LH水平顯著高于12月份妊娠母羊(P<0.05)，其余妊娠階段，不同月份妊娠母羊外周血中LH水平無顯著性差異(P>0.05)。說明母羊妊娠月份不同對其LH水平有影響，但影響不大。

2.5 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間PRL檢測結(jié)果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出現(xiàn)分娩癥狀時(shí)靜脈血中PRL水平的ELISA檢測結(jié)果如圖5所示。由圖5可見，8月、10月、12月、2月妊娠母羊妊娠期間，靜脈血中PRL水平一直呈緩慢上升趨勢。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中PRL濃度的變化范圍分別為367.37～411.29 ng/L，432.92～457.14 ng/L，469.74～517.33 ng/L，528.87～626.88 ng/L，在同一妊娠階段，不同月份妊娠母羊外周血中PRL水平無顯著性差異(P>0.05)。說明母羊妊娠月份不同對其PRL水平?jīng)]有影響。

2.6 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間GH檢測結(jié)果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出現(xiàn)分娩癥狀時(shí)靜脈血中GH水平的ELISA檢測結(jié)果如圖6所示。由圖6可見，8月、10月、12月、翌年2月妊娠母羊在妊娠期間，靜脈血中GH水平一直呈緩慢上升趨勢。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中FSH濃度的變化范圍分別為15.55～17.99 μg/L， 18.15～19.78 μg/L ，22.38～25.22 μg/L，24.29～28.71 μg/L， 2月份妊娠母羊在分娩前， GH水平顯著低于其他月份妊娠母(P<0.05)羊，其余妊娠階段，不同月份妊娠母羊外周血中GH水平無顯著性差異(P>0.05)。說明母羊妊娠月份不同對其GH水平影響不大，僅在分娩時(shí)有影響。

圖3 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間FSH水平Fig.3 The FSH levels of pregnant dairy goats in different months

圖4 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間LH水平Fig.4 The LH levels of pregnant dairy goats in different months

圖5 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間PRL水平Fig.5 The PRL levels of pregnant dairy goats in different months

圖6 不同月份妊娠奶山羊妊娠期間GH水平Fig.6 The GH levels of pregnant dairy goats in different months

3 討 論

對哺乳動(dòng)物來說，P4、 E2、FSH、LH、PRL是維持及評估母體妊娠的主要生殖激素[4-5]。母羊妊娠期間血清中E2含量持續(xù)升高，同時(shí)伴隨著孕酮水平的持續(xù)升高，P4在妊娠早期含量水平較高[6-7]，測定體液中孕酮的含量，可用于早期妊娠診斷[8-9]。有研究表明E2正反饋調(diào)控P4的合成，相反，伴隨著FSH和LH含量相對下降，則E2、P4負(fù)反饋調(diào)節(jié)FSH和LH分泌。分娩時(shí)，E2和P4的濃度下降促使子宮肌對催產(chǎn)素的敏感性增強(qiáng)，同時(shí)刺激前列腺素的合成及釋放，有利于分娩啟動(dòng)[1，10]。在本研究中，不同批次奶山羊妊娠后20～130 d，E2和P4的濃度一直處于上升趨勢，分娩前下降；FSH和LH一直處于緩慢下降趨勢，分娩時(shí)，LH上升。據(jù)報(bào)道，灘羊母羊懷孕后，血清中P4濃度呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢，到懷孕后期達(dá)到最高濃度[11]，海門山羊和布爾山羊的E2水平分別在妊娠16，20天開始上升，到分娩前達(dá)最大值，分娩后下降[12]，奶山羊進(jìn)入妊娠期后，外周血中FSH和LH總體呈現(xiàn)下降趨勢[13]，到懷孕后期LH表達(dá)量升高，F(xiàn)SH的變化則相對較小[14]，以上結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果一致。說明本試驗(yàn)的結(jié)果是準(zhǔn)確的，符合妊娠母羊生殖激素的變化規(guī)律，即奶山羊在不同月份受孕后，妊娠期間生殖激素的變化規(guī)律是一致的。但是，奶山羊妊娠月份的不同對其激素水平還是有影響的的。在本試驗(yàn)中，奶山羊妊娠月份的不同對其P4、 E2水平影響很小，妊娠后期及分娩時(shí)對FSH有一定的影響，但并未影響妊娠的進(jìn)行，一方面可能是因?yàn)槿焉镆烟幱诤笃陔A段，另一方面可能與FSH并不是維持妊娠的主要激素有關(guān)。

PRL在妊娠早期的作用也是不可忽視的，PRL能夠保護(hù)胚胎在著床時(shí)避免母畜的排斥作用[15]，除此之外， PRL能發(fā)揮孕酮類似的生理功能，有利于母體內(nèi)胎兒的發(fā)育。PRL的分泌和E2、FSH、LH分泌之間存在一定關(guān)系，E2可能通過雌二醇受體α(ERα)和雌二醇受體β(ERβ)作用于PRL、FSH和LH的分泌，但是以ERα對PRL和FSH的分泌調(diào)控為主，推測其主要目的是為產(chǎn)后泌乳做準(zhǔn)備[16]。當(dāng)PRL升高時(shí)，促卵泡素和促黃體素降低[17]。GH是由腦垂體分泌的一種蛋白質(zhì)，具有多種生理功能。GH通過調(diào)節(jié)奶山羊的乳腺及其外組織間的營養(yǎng)競爭，影響奶山羊乳腺的發(fā)育。本試驗(yàn)中，不同月份妊娠的奶山羊，PRL和GH濃度的變化趨勢是一致的，妊娠期間直到分娩一直呈緩慢上升趨勢，這與妊娠母羊乳腺的發(fā)育階段相關(guān)，即GH與PRL和E2共同協(xié)同調(diào)節(jié)乳腺上皮細(xì)胞的合成，促使乳腺導(dǎo)管增生和乳腺腺泡的發(fā)育。但是，奶山羊妊娠月份的不同對其GH水平有影響，僅在分娩時(shí)有影響，對其PRL水平幾乎無影響。說明奶山羊在不同月份受孕能維持其正常妊娠及乳腺發(fā)育。不同月份奶山羊受孕后，在整個(gè)妊娠期間，靜脈血中E2，P4，F(xiàn)SH，LH，PRL及GH濃度的變化趨勢一致。奶山羊在不同月份配種妊娠后對其生殖內(nèi)分泌影響不大。

4 小 結(jié)

本研究結(jié)果表明，不同月份奶山羊受孕后，在整個(gè)妊娠期間，靜脈血中E2，P4，F(xiàn)SH，LH，PRL及GH濃度的變化趨勢一致。奶山羊妊娠月份的不同對其激素水平有影響，但影響不大，其激素水平能維持其正常妊娠及乳腺發(fā)育。奶山羊在不同月份配種妊娠后對其生殖內(nèi)分泌影響不大。

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