霍少杰 吳繼春 杜 江

貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院/貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州 貴陽 550025

羽脈野扇花(LindlSarcococcahookeriana.)為黃楊科(Buxaceae)野扇花屬植物，常綠灌木。本屬約有20種，分布于亞洲東部和南部，我國已知有8種及幾個變種[1]，是傳統(tǒng)的民族民間用藥。羽脈野扇花和野扇花(S. ruscifolia Stap)同為貴州苗族民間習(xí)用藥材，常混用，又名三兩銀、三兩金、羊不食等，用于治療胃潰瘍、胃痛、腹瀉、發(fā)熱、咽喉痛、跌打損傷、腦憨癥等疾病[2-3]。野扇花屬植物的化學(xué)成分研究始于上世紀(jì)60年代，從中發(fā)現(xiàn)大量孕甾烷生物堿，以及三萜、甾體、糖苷等類型化合物。迄今已從該屬植物中分離得到100余個孕甾烷生物堿[4]，它們中的大多數(shù)化合物因具有明顯的膽堿酯酶抑制活性而受到各國學(xué)者的廣泛關(guān)注[5-9]，有望從中發(fā)現(xiàn)新的治療阿爾茨海默病的先導(dǎo)化合物。從羽脈野扇花中還分離到一系列具有抗利什曼蟲[10-12]、抗瘧原蟲[9]、抗菌[11-12]、細(xì)胞毒[13-14]、抗炎[15]、免疫抑制[16]及促雌激素生成[17]等活性的成分。本課題組前期對野扇花和羽脈野扇花中的化學(xué)成分進(jìn)行了初步研究，并對研究成果做了相關(guān)的文獻(xiàn)報道[18,19]。為了深入研究該屬植物的活性成分，課題組繼續(xù)對黔產(chǎn)羽脈野扇花的生物堿成分進(jìn)行了分離研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 JEOL ECX-400導(dǎo)核磁共振譜儀(日本電子株式會社)；R-215型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琦)；ZF-2型紫外光譜儀(上海安亭電子儀器廠)；RE-5210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-DⅢ型多用真空泵(鄭州華儀器有限責(zé)任公司)；SK8210HP超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 層析硅膠：(200-300目、300-400目)青島海洋化工有限公司；顯色劑：改良碘化鉍甲試劑；其它試劑均為國產(chǎn)分析純。

實(shí)驗(yàn)藥材于2015年7月采于貴州省赫章縣韭菜坪，由貴陽中醫(yī)學(xué)院趙能武教授鑒定為羽脈野扇花(BaillSarcococcahookeriana.)。

2 提取分離

羽脈野扇花根莖(14.5 kg)自然干燥后粉碎，用95%甲醇超聲提取四次，提取液減壓回收溶劑，濃縮后得總提取物?？偺崛∥镉?% H2SO4溶液調(diào)pH到1，乙酸乙酯萃取除去脂溶性雜質(zhì)，剩余酸水液用飽和Na2CO3溶液調(diào)pH至9，二氯甲烷萃取得總生物堿156 g?？偵飰A進(jìn)行硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇(100∶0→5∶1)梯度洗脫，薄層層析檢測，分為A-E五個部分。A部分進(jìn)行硅膠柱層析，石油醚-二氯甲烷-二乙胺(100∶1∶1→5∶1∶1)梯度洗脫，分為A1-A5五個部分。A1部分通過反復(fù)硅膠柱層析(分別以石油醚-二氯甲烷-二乙胺和二氯甲烷-甲醇為洗脫系統(tǒng))得化合物1(188 mg)和2(76 mg)。B部分進(jìn)行硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇(100∶1→10∶1)梯度洗脫，分為B1-B3三個部分。B3部分通過反復(fù)硅膠柱層析(分別以石油醚-二氯甲烷-二乙胺和二氯甲烷-甲醇為洗脫系統(tǒng))得化合物3(46 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色細(xì)針狀晶體，易溶于氯仿，改良碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色。1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ: 5.36 (m, 1H, H-6), 3.36 (s, 3H, OCH3), 3.07 (tt,J= 11.3, 4.5 Hz, 1H, H-3), 2.17 (s, 3H, NMe2), 1.00 (s, 3H, H-19), 0.88 (d,J= 6.4 Hz, 3H, H-21), 0.68 (s, 3H, H-18).13C NMR (CDCl3, 100MHz) δ: 140.8 (C-5), 121.6 (C-6), 80.3 (C-3), 61.1 (C-20), 56.9 (C-14), 55.6 (OMe), 54.7 (C-17), 50.1 (C-9), 41.4 (C-13), 39.9 (NMe2), 39.5 (C-12), 38.6 (C-4), 37.2 (C-1), 36.9 (C-10), 31.9 (C-8), 31.8 (C-7), 28.0 (C-2), 27.7 (C-16), 24.1 (C-15), 21.1 (C-11), 19.4 (C-19), 12.1 (C-18), 9.8 (C-21)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報道的NMR數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為Pachyaximine (A)。

化合物2 無色細(xì)針狀晶體，易溶于氯仿，改良碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色。1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ:5.35 (m, 1H, H-6), 3.61 (s, 1H,H-16), 3.35 (s, 3H,OMe),3.06 (tt,J= 11.3, 4.5 Hz, 1H,H-3),2.89 (d,J= 6.4 Hz, 1H,H-20), 2.28 (s, 6H,NMe2),1.01 (s, 3H,H-19), 0.91 (s, 3H,H-18),1.17 (d,J=6.7 Hz, 3H, H-21).13C-NMR (CDCl3, 100MHz) δ:141.1(C-5), 121.4(C-6), 80.3(C-3), 73.6(C-17), 61.1(C-16), 56.0(C-20), 55.8(OMe), 50.5(C-9), 45.6(C-14), 43.2(NMe2), 42.1(C-13), 38.8(C-4), 37.2(C-10), 37.2(C-1), 32.9(C-12), 31.7(C-7), 30.4(C-8), 28.1(C-2), 27.4(C-15), 20.8(C-11), 19.5(C-19), 15.8(C-18), 13.6(C-21)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報道的NMR數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為(20S)-20-(N,N-dimethylamino)-16α,17α-epoxy-3β-methoxy-pregn-5-ene。

化合物3白色細(xì)針狀晶體易溶于氯仿，改良碘化鉍鉀顯色劑顯色呈橘紅色。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ: 5.62 (d,J=8.9 Hz, 1H,NH),5.50(s,1H,H-2′),5.26(t,J=2.8Hz,1H,H-4),5.11(d,J=3.6Hz,1H,H-2),4.32(dt,J=8.4,4.0Hz,1H,H-3),2.46(t,J=8.6Hz,1H),2.10(s,3H,MeCO),2.08(s,3H,MeCO),1.12(s,3H,H-19),0.89(d,J=6.5Hz,3H,H-21),0.63(s,3H,H-18).13C-NMR (CDCl3,100MHz)δ:170.7(MeCO), 170.5(MeCO), 166.1(C-1′), 152.2(C-3′), 118.1(C-2′), 74.2(C-4), 72.0(C-2), 61.4(C-20), 56.4 (C-9), 55.7(C-17), 49.3(C-3), 48.8(C-5), 41.8(C-13), 40.9(C-1), 39.9(NMe2), 39.6(C-12), 34.9(C-8), 34.8(C-10), 31.8(C-7), 27.7(C-16), 27.3(C-6), 25.2(C-15), 24.1(C-5′), 21.5(C-11), 21.2(MeCO), 20.7(MeCO), 20.0(C-4′), 15.4(C-19), 12.4(C-18),10.1(C-21)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報道的NMR數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為(2α,3β,4β,20S)-2,4-bis(acetoxy)-20-(N,N-dimethylamino)-3-[(3-methylbut-2-enoyl)amino]-5α-pregnane。

4 討論

野扇花屬植物在貴州省資源豐富，民間使用廣泛，國外學(xué)者從該屬植物中分離出大量的孕甾烷生物堿，然而關(guān)于該屬植物的化學(xué)成分研究，國內(nèi)報道較少。本實(shí)驗(yàn)從黔產(chǎn)苗藥三兩銀中分離鑒定了3個孕甾烷生物堿，分別為Pachyaximine (A) (1)、(20S)-20-(N,N-dimethylamino)-16α,17α-epoxy-3β- methoxy-pregn-5-ene (2)、(2α,3β,4β,20S)-2,4-bis(acetoxy)-20-(N,N-dimethylamino)-3-[(3-methylbut-2-enoyl)amino]-5α-pregnane (3)，化合物結(jié)構(gòu)見圖1。3個化合物均為首次從該植物中分離得到。

苗族人民在長期與疾病斗爭的過程中形成了獨(dú)特的診療體系，在治療外傷和一些地方性多發(fā)病方面往往有獨(dú)到的效果。課題組在民間調(diào)研時發(fā)現(xiàn)野扇花屬植物在苗族民間廣泛應(yīng)用于治療胃腸潰瘍、腦憨癥等疾病。結(jié)合三兩銀在民間醫(yī)藥中的應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)對其進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分和生物活性研究,為合理開發(fā)苗藥三兩銀的藥用價值提供理論基礎(chǔ)。

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