張戰(zhàn)鋒，龐志宇，謝在春，陳久凱

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405）

分子診斷技術(shù)是以聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)為核心的新一代檢測(cè)手段，目前廣泛用于感染性疾病中的微生物鑒定及藥物敏感性檢測(cè)[1]、白血病及實(shí)體腫瘤診斷和個(gè)體化用藥基因位點(diǎn)[2]、優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè)[3]等多個(gè)方面[4]，是各大、中型醫(yī)院檢驗(yàn)科不可或缺的亞學(xué)科之一。作為被廣泛使用的新技術(shù)，PCR因其檢測(cè)原理的特殊性使其具有臨床中其他檢測(cè)技術(shù)（如ELISA、化學(xué)發(fā)光以及電化學(xué)發(fā)光等）無(wú)法達(dá)到的高靈敏性和高特異性，但其高靈敏性和高特異性的特點(diǎn)使該技術(shù)的影響因素同樣較廣[5]，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中任何一個(gè)小的錯(cuò)誤或不當(dāng)操作都可能導(dǎo)致非真實(shí)的檢測(cè)結(jié)果，這就要求技術(shù)操作人員具有較高的專(zhuān)業(yè)素質(zhì)和責(zé)任心。實(shí)習(xí)生進(jìn)入檢驗(yàn)科PCR室往往是他們第一次真正接觸PCR技術(shù)，因此，對(duì)學(xué)生實(shí)習(xí)期間系統(tǒng)、全面的帶教是保證其學(xué)習(xí)效果的前提。筆者一直從事分子診斷工作，針對(duì)PCR以及實(shí)習(xí)帶教總結(jié)了一些心得體會(huì)，希望能夠?yàn)橥袔Ы烫峁┮恍﹨⒖肌?/p>

1 實(shí)驗(yàn)室整體介紹及重要概念構(gòu)建

學(xué)生進(jìn)科的第一天往往對(duì)分子診斷實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有整體認(rèn)識(shí)，帶教教師可先對(duì)實(shí)習(xí)生介紹實(shí)驗(yàn)室整體情況以及需要注意的事項(xiàng)和概念，讓實(shí)習(xí)生從宏觀上認(rèn)識(shí)分子診斷技術(shù)應(yīng)用中如何達(dá)到其質(zhì)量要求。如首先介紹分子診斷室建立的時(shí)間，目前該實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的項(xiàng)目及內(nèi)容，實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)成，如總共有幾個(gè)區(qū)，分別是什么，這樣分區(qū)的原因，不同分區(qū)之間嚴(yán)格區(qū)分并且流向單一，不同分區(qū)物品不可隨意移至其他區(qū)等[6]。同時(shí)介紹實(shí)驗(yàn)室最為重要的“無(wú)污染”“無(wú)核酸”概念，介紹核酸污染常見(jiàn)的原因、表現(xiàn)、危害及處理方法[7]，重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)污染在“防”而不在“治”的理念。

針對(duì)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展項(xiàng)目，整體介紹項(xiàng)目?jī)?nèi)容及實(shí)驗(yàn)流程。如介紹所有的實(shí)驗(yàn)流程大致分為3個(gè)部分：核酸提取、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析。核酸提取部分根據(jù)所提核酸為DNA或RNA的不同又有不同的方法，DNA常用的提取方法有化學(xué)裂解法和熱裂解法，RNA常用的提取方法有柱提法和磁珠法。擴(kuò)增有熒光定量PCR和普通PCR，熒光定量PCR一般可以直接進(jìn)行結(jié)果分析，而普通PCR往往需要后續(xù)產(chǎn)物檢測(cè)的步驟，如基于核酸雜交原理的HPV分型檢測(cè)項(xiàng)目。產(chǎn)物分析所需注意的地方應(yīng)視具體項(xiàng)目而定。通過(guò)實(shí)驗(yàn)室總體介紹，幫助實(shí)習(xí)生建立初步的PCR實(shí)驗(yàn)室整體概念。

2 因材施教

由于實(shí)習(xí)生來(lái)自不同醫(yī)學(xué)院校，所以對(duì)分子診斷技術(shù)課程的學(xué)習(xí)并非一致，有的院校甚至沒(méi)有開(kāi)展分子診斷相關(guān)課程。這種情況要求我們?cè)趲Ы踢^(guò)程中不能千篇一律，對(duì)于基礎(chǔ)較好的學(xué)生應(yīng)該結(jié)合教材、相關(guān)參考書(shū)補(bǔ)充和強(qiáng)化分子生物學(xué)相關(guān)理論知識(shí)。在接觸檢驗(yàn)項(xiàng)目之前，首先熟悉檢驗(yàn)項(xiàng)目的SOP文件，尤其是熟悉各項(xiàng)目的原理、應(yīng)用及其臨床意義。這樣不僅是將理論知識(shí)融入實(shí)踐的一個(gè)良好過(guò)渡，更能讓實(shí)習(xí)生在開(kāi)展實(shí)際操作之前對(duì)即將從事的工作有初步的感性認(rèn)識(shí)，使他們能較快適應(yīng)工作。對(duì)于沒(méi)有分子診斷相關(guān)知識(shí)背景的學(xué)生首先應(yīng)關(guān)注其基礎(chǔ)知識(shí)的學(xué)習(xí)，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室所開(kāi)展項(xiàng)目中的核酸提取、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析等步驟所涉及的基礎(chǔ)知識(shí)進(jìn)行詳細(xì)、系統(tǒng)地講解，使學(xué)生能夠進(jìn)行SOP文件閱讀及后面的操作，否則很容易導(dǎo)致其操作中錯(cuò)誤的發(fā)生，以及對(duì)試驗(yàn)中遇到的問(wèn)題無(wú)法進(jìn)行分析和解決，無(wú)法保證檢測(cè)質(zhì)量。

3 教學(xué)相長(zhǎng)

教學(xué)相長(zhǎng)是一種普遍的教育教學(xué)經(jīng)驗(yàn)認(rèn)識(shí)，也是現(xiàn)代教育教學(xué)改革的一種理念。古今中外都十分重視，并且積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。在我國(guó)教育教學(xué)體制改革浪潮下，教學(xué)相長(zhǎng)越來(lái)越受到重視[8]。這里強(qiáng)調(diào)的是，教學(xué)相長(zhǎng)這個(gè)詞往往用在教師方面，是帶教教師自我提升教學(xué)水平的方法。在實(shí)習(xí)帶教中我們發(fā)現(xiàn)師生之間積極互動(dòng)、信息交換、角色轉(zhuǎn)換等多維互動(dòng)模式都會(huì)收到好的教學(xué)效果。因此，“教學(xué)相長(zhǎng)”這個(gè)方法可以作為實(shí)習(xí)生學(xué)習(xí)的一種途徑。對(duì)于一個(gè)教學(xué)醫(yī)院，實(shí)習(xí)生往往較多，帶教科室會(huì)根據(jù)情況將實(shí)習(xí)生分成多個(gè)小組同時(shí)在不同專(zhuān)業(yè)組進(jìn)行學(xué)習(xí)，因此實(shí)習(xí)生來(lái)到各專(zhuān)業(yè)組的時(shí)間就有先后。先來(lái)的學(xué)生通過(guò)一段時(shí)間的學(xué)習(xí)已經(jīng)基本掌握專(zhuān)業(yè)組內(nèi)各個(gè)項(xiàng)目所要求學(xué)習(xí)的內(nèi)容，對(duì)于后來(lái)的學(xué)生，帶教教師可以通過(guò)學(xué)生一對(duì)一帶教的方式讓學(xué)生教學(xué)生，而其則是對(duì)學(xué)生講解不清或錯(cuò)誤的地方進(jìn)行補(bǔ)充和更正。這樣不僅能使學(xué)生回顧所學(xué)內(nèi)容，而且能由被動(dòng)學(xué)習(xí)變?yōu)橹鲃?dòng)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)自己掌握不牢內(nèi)容并重點(diǎn)學(xué)習(xí)。對(duì)于后來(lái)的學(xué)生而言，學(xué)生與學(xué)生之間的交流和信息的傳遞會(huì)更容易接受。所以，在臨床帶教過(guò)程中“教學(xué)相長(zhǎng)”教學(xué)模式同樣可以應(yīng)用到實(shí)習(xí)生上。

4 理論和技能考核

完善的考核不僅是對(duì)學(xué)生學(xué)習(xí)過(guò)程的總結(jié)，也同樣是對(duì)臨床帶教效果的考驗(yàn)?？己朔譃閮刹糠郑豪碚摵图寄?。理論考核主要針對(duì)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目所涉及的基本方法原理、注意事項(xiàng)等內(nèi)容展開(kāi)，這里值得一提的是，理論考核中同樣應(yīng)包含典型案例分析、結(jié)果解釋等內(nèi)容。技能考核則只是針對(duì)實(shí)際操作，對(duì)學(xué)生動(dòng)手能力進(jìn)行考查。但技能考核不僅僅是核酸提取及儀器使用，應(yīng)該包含某個(gè)項(xiàng)目的所有流程[9]。比如試劑準(zhǔn)備、樣本離心、加樣槍使用、核酸提取步驟、PCR儀開(kāi)機(jī)、程序選擇、樣本編號(hào)、樣本錄入、結(jié)果分析及結(jié)果報(bào)告等方面。針對(duì)技能考核應(yīng)編制合適的考核表格，表格中針對(duì)以上考核內(nèi)容進(jìn)行說(shuō)明，在實(shí)習(xí)生整個(gè)操作過(guò)程中實(shí)時(shí)進(jìn)行打分并記錄，在考核完畢后就考核中出現(xiàn)的錯(cuò)誤及時(shí)與學(xué)生溝通。目前PCR項(xiàng)目多是手工操作，并且每個(gè)樣本的加樣量少且加樣孔密，在帶教過(guò)程中需著重培養(yǎng)學(xué)生操作過(guò)程中的專(zhuān)注力，否則極易發(fā)生樣品加錯(cuò)孔或加樣量不準(zhǔn)的現(xiàn)象，對(duì)結(jié)果造成較大影響。

5 新技術(shù)、新方法的學(xué)習(xí)和創(chuàng)新

PCR技術(shù)作為近些年發(fā)展最為迅速的檢驗(yàn)亞學(xué)科之一，應(yīng)用或基于該技術(shù)的產(chǎn)品層出不窮。實(shí)習(xí)生作為檢驗(yàn)事業(yè)未來(lái)的主要實(shí)踐者，不僅要掌握基本的理論和技能，而且要意識(shí)到專(zhuān)業(yè)知識(shí)不斷學(xué)習(xí)和探索的重要性。目前很多基于PCR技術(shù)的新產(chǎn)品正逐步走向臨床，比如循環(huán)腫瘤細(xì)胞或DNA的檢測(cè)[10-11]、核酸提取的自動(dòng)化儀器使用[12-13]等。在此值得一提的是，在學(xué)習(xí)的同時(shí)，對(duì)知識(shí)的總結(jié)和探索同樣是實(shí)習(xí)生需要重點(diǎn)培養(yǎng)的部分。這方面的培養(yǎng)最主要的方式就是論文寫(xiě)作。目前大多數(shù)醫(yī)學(xué)院校對(duì)本科生均有寫(xiě)論文要求，這也是醫(yī)學(xué)教育工作者逐漸認(rèn)識(shí)到知識(shí)總結(jié)、創(chuàng)新對(duì)學(xué)生、對(duì)學(xué)科發(fā)展重要性的體現(xiàn)。當(dāng)然，這些論文不是都要求有學(xué)術(shù)價(jià)值的，更看重的是對(duì)學(xué)習(xí)能力的培養(yǎng)，讓學(xué)生運(yùn)用學(xué)到的知識(shí)、方法、理論來(lái)表述自己的看法和觀點(diǎn)。除此之外，結(jié)合我國(guó)國(guó)情，通過(guò)畢業(yè)論文還可以考查一個(gè)大學(xué)生最基本的學(xué)術(shù)素養(yǎng)和治學(xué)態(tài)度。所以，本科生的畢業(yè)論文更看重的是過(guò)程，從選題到資料收集，動(dòng)手做或思考論證，再到后期的寫(xiě)作修改，是一個(gè)最基礎(chǔ)的學(xué)術(shù)研究過(guò)程。

分子生物學(xué)技術(shù)鑒于其突出的檢測(cè)能力，經(jīng)過(guò)短短十幾年的發(fā)展已廣泛用于多個(gè)行業(yè)。在醫(yī)學(xué)界中已經(jīng)成為一種不可或缺的疾病輔助檢測(cè)手段[14-15]，是檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)學(xué)生應(yīng)該熟練掌握和運(yùn)用的學(xué)科知識(shí)。實(shí)習(xí)生作為檢驗(yàn)學(xué)未來(lái)發(fā)展的重要參與者，其實(shí)習(xí)過(guò)程不僅對(duì)自身具有重要作用，對(duì)學(xué)科的發(fā)展同樣具有重要意義。而帶教教師在很大程度上決定了學(xué)生在此過(guò)程中學(xué)習(xí)的好壞，因此，希望能夠通過(guò)本心得體會(huì)與檢驗(yàn)帶教教師共同探討臨床帶教方法，以培養(yǎng)出優(yōu)秀的檢驗(yàn)后備人才。