尹加忠

云南省德宏州人民醫(yī)院檢驗科 （云南 德宏 678400）

近年來醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)不斷進步，化學(xué)發(fā)光法對乙肝表面抗原（HBsAg）靈敏度也越來越高（達到0.03IU/mL）。最新臨床檢驗數(shù)據(jù)顯示，新生兒HBsAg經(jīng)常會出現(xiàn)一過性陽性，但新生兒的母親很多都不是乙肝患者，這種現(xiàn)象越來越多的受到臨床醫(yī)師的關(guān)注。有研究表明新生兒接種乙肝疫苗后會出現(xiàn)HBsAg假陽性[1]。本研究對通過本院132例HBsAg陽性新生兒進行乙肝兩對半檢測，分析其一過性陽性的出現(xiàn)原因，為后期臨床檢驗工作提供參考，現(xiàn)總結(jié)報告如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

收集德宏州人民醫(yī)院2016年12月～2017年6月的1251例新生兒乙肝兩對半定量檢測結(jié)果，其中132例HBsAg陽性患兒均為本院出生1～5d新生兒，且出生時均注射乙肝疫苗，HBsAg陽性患兒中男童70例，女童62例。

1.2 儀器與試劑

儀器：雅培ARCHITECT i2000化學(xué)發(fā)光分析儀。試劑：乙型肝炎病毒表面抗原檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光法），質(zhì)控品由臨川檢驗中心提供。

1.3 方法

檢測指標：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，合稱“乙肝二對半”。操作方法嚴格遵循二步夾心法的化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLEIA法），操作過程中均進行室內(nèi)質(zhì)控。檢測前將儀器置于最佳狀態(tài)，具體步驟如下：①用移液器向比色杯內(nèi)分別加入R1試劑、樣品50μL、20μL，42?C反應(yīng)2min；②加入R2試劑30μL，42?C反應(yīng)1min后進行磁分離；③加入清洗液350μL進行磁分離并清洗，重復(fù)4次；④加入R3試劑100μL，42?C反應(yīng)2.5min后進行磁分離；⑤同步驟③；⑥依次加入R4試劑、R5試劑50μL、100μL并混勻，42?C反應(yīng)5min，檢測發(fā)光強度；⑦以標準品發(fā)光強度為y軸，濃度為x軸，制作標準曲線；⑧通過標準曲線公式求出樣本HBsAg濃度。

1.4 判定標準

陰性：檢測結(jié)果＜0.03IU/mL的樣本；陽性：檢測結(jié)果＞0.03IU/mL。初次檢測結(jié)果在0.03～5.00IU/mL，樣本需經(jīng)2000g，15min離心后重新復(fù)檢。復(fù)檢結(jié)果均＜0.03IU/mL，判定為陰性；復(fù)檢結(jié)果均＞0.03IU/mL，判定為陽性；復(fù)檢結(jié)果不一致，需再次復(fù)檢。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2.結(jié)果

132例患兒中，7例HBsAg、HBsAb陽性，4例HBsAg、HBeAb陽性，2例HBsAg、HBeAb、HBcAb陽性，1例HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb陽性，但在一月后復(fù)查結(jié)果顯示132例新生兒HBsAg均為陰性，見表1。

表1. 新生兒入院后乙肝兩對半檢測結(jié)果

3.討論

乙肝病毒會嚴重損害人類健康，并引起一系列肝臟疾病，降低患者生存質(zhì)量[2]。接種乙肝疫苗后機體內(nèi)會出現(xiàn)保護性抗體，如果感染乙肝病毒，抗體便會立即將其清除，目前此種方法是預(yù)防感染乙肝的最有效辦法。目前臨床主要運用化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAg，但本研究方法有很多干擾因素，如試劑、標本、操作等，其中標本內(nèi)源性因素最難處理與規(guī)避[3]。

新生兒作為特殊群體，采血較為困難，因此常常出現(xiàn)采樣量不足、采樣不當?shù)?，進而造成血樣溶血，如果未能及時檢測，可能還會出現(xiàn)細菌感染。人為操作時不注意無菌操作，造成加樣槍污染，因此必須使用一次性槍頭，加樣需控制好速度，洗滌液適量，避免出現(xiàn)交叉感染，防止非特異性吸附而呈現(xiàn)假陽性，本研究中不存在此問題，操作時嚴格遵循操作說明，且專人操作，盡量避免人為因素影響。因此，檢測結(jié)果與待測樣本質(zhì)量、人為操作水平等均具有很大關(guān)聯(lián)。此外，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)樣本中HBsAg含量一致時，由于樣本中蛋白質(zhì)濃度不同，HBsAg檢測結(jié)果也會不同，并且檢測結(jié)果與蛋白質(zhì)濃度呈負相關(guān)[4]。但樣本中蛋白質(zhì)濃度降低時，檢測結(jié)果卻并不會一直升高，蛋白質(zhì)濃度過低時，檢測結(jié)果反而降低，因此蛋白質(zhì)濃度對檢測結(jié)果也會有一定影響。提高離心速度可消除脂血因素干擾，但有學(xué)者對比外觀正常血清標本發(fā)現(xiàn)離心速度并不會影響HBsAg測定結(jié)果[5]。

本研究發(fā)現(xiàn)在132例患兒中，7例HBsAg、HBsAb陽性，4例HBsAg、HBeAb陽性，2例HBsAg、HBeAb、HBcAb陽性，1例HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb陽性，但在一月后復(fù)查結(jié)果顯示132例新生兒HBsAg均為陰性，研究中所有患兒均接受過乙肝疫苗接種，分析原因可能是乙肝疫苗接種會使新生兒HBsAg出現(xiàn)一過性陽性。劉華等[6]學(xué)者也發(fā)現(xiàn)新生兒在接種疫苗兩周內(nèi)容易出現(xiàn)HBsAg一過性陽性，而超過兩周則無影響。因此建議臨床檢驗需在接種兩周后再進行HBsAg檢測，從而規(guī)避乙肝疫苗對檢測結(jié)果的影響，這與本研究結(jié)論具有一致性。

綜上所述，新生兒乙肝HBsAg檢測出現(xiàn)一過性陽性主要影響因素有：接種乙肝疫苗、人為操作不當、血樣質(zhì)量三方面，因此建議臨床檢驗可以多次進行復(fù)檢并對比每次結(jié)果，針對接種過疫苗的新生兒可在一個月后再檢測HBsAg，條件允許時可進行定量、HBV-DNA檢測，結(jié)合其他實驗室診斷結(jié)果得出綜合檢測結(jié)果，盡量減少失誤，保障新生兒身心健康發(fā)展[7]。

[1]張麗,陳波.新生兒乙肝疫苗接種對乙肝病毒表面抗原陽性率的影響[J].臨床檢驗雜志(電子版),2016,5(4):202-204.

[2]沈彥,陳永健,周永列.新生兒乙肝疫苗接種對乙肝表面抗原即時檢測結(jié)果的影響[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),2015,27(7):738-740.

[3]覃彥平.臨床ELISA檢測干擾因素分析及處理[J].中國誤診學(xué)雜志,2011,11(18):4399-4400.

[4]徐磊,張文倩,王琳.血清蛋白質(zhì)濃度對ELISA檢測HBsAg的影響[J].臨床血液學(xué)雜志(輸血與檢驗),2017,30(1):83-86.

[5]吳連杰,任繼欣,賈長鳳.化學(xué)發(fā)光法定量檢測乙型肝炎表面抗原前離心速度標準化的實驗研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(14):1852-1853.

[6]劉華,王穎智,沈云岳,等.乙肝疫苗接種后新生兒乙型肝炎表面抗原一過性陽性的研究[J].檢驗醫(yī)學(xué),2015,30(11):1107-1112.

[7]劉榮靜,習(xí)浩林,列坤.乙型肝炎病毒表面抗原弱反應(yīng)性標本的檢測及臨床意義[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2010,5(3):404-405.