刁愛坡，趙 青

(天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院，天津 300457)

惡性腫瘤是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一.近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的迅速發(fā)展，以調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫功能來(lái)清除腫瘤微小殘留病灶或明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療，已被廣泛研究和應(yīng)用于臨床并取得了一定療效，成為繼手術(shù)、放療和化療之后的又一重要的腫瘤治療手段．

腫瘤免疫治療按照治療的原理可分為非特異性免疫調(diào)節(jié)劑治療、腫瘤疫苗治療、免疫檢查點(diǎn)阻斷治療和免疫細(xì)胞治療．非特異性免疫調(diào)節(jié)劑治療是通過(guò)使用干擾素、白細(xì)胞介素–2(IL-2)、胸腺肽、胸腺肽α、香菇多糖、豬苓多糖、酵母多糖等增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，激活機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答[1–4]．腫瘤疫苗治療是利用腫瘤細(xì)胞或腫瘤抗原物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體的特異性免疫和體液免疫，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤能力，預(yù)防術(shù)后擴(kuò)散和復(fù)發(fā)．治療腫瘤常用的腫瘤疫苗包括多肽疫苗、核酸疫苗、重組病毒疫苗、細(xì)菌疫苗、樹突細(xì)胞(dendritic cell，DC)疫苗等[5]．免疫檢查點(diǎn)阻斷治療是通過(guò)阻斷腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制信號(hào)，即免疫檢查點(diǎn)，解除免疫細(xì)胞活性抑制，增強(qiáng)抗腫瘤活性．目前研究最為深入的免疫檢查點(diǎn)為細(xì)胞程序性死亡受體 1(programmed death 1，PD-1)/程序性死亡配體1(programmed death ligand 1，PD-L1)，以及細(xì)胞毒性淋巴T細(xì)胞抗原4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4，CTLA-4)[6–7]．免疫細(xì)胞治療(cell-mediated immunotherapy)則是通過(guò)采集人體自身免疫細(xì)胞，經(jīng)過(guò)體外修飾和培養(yǎng)，使其數(shù)量擴(kuò)增成千倍增多，靶向性殺傷功能增強(qiáng)，然后再回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，從而殺滅血液及組織中的腫瘤細(xì)胞．免疫細(xì)胞治療能夠靶向腫瘤細(xì)胞而不傷及正常組織細(xì)胞，并可產(chǎn)生免疫記憶，預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)．腫瘤免疫學(xué)研究及其臨床應(yīng)用已成為腫瘤治療研究中開展最廣泛、最深入的領(lǐng)域之一，本文僅就腫瘤免疫細(xì)胞治療中以嵌合抗原受體 T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞為核心的免疫細(xì)胞治療技術(shù)的研究情況進(jìn)行綜述．

1 嵌合抗原受體T細(xì)胞療法

嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)T細(xì)胞免疫療法是一種新型腫瘤免疫細(xì)胞療法，1989年由 Gross等[8]提出，近幾年被改良并應(yīng)用到臨床中．它是將抗原抗體的高親和性與 T淋巴細(xì)胞的殺傷作用相結(jié)合，通過(guò)構(gòu)建特異性嵌合抗原受體，經(jīng)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)使 T淋巴細(xì)胞表達(dá)特異性嵌合抗原受體，特異性識(shí)別靶抗原從而殺傷靶細(xì)胞．目前，臨床上CAR技術(shù)在血液系統(tǒng)腫瘤和實(shí)體瘤的治療上均取得了明顯的效果．

CAR-T細(xì)胞的嵌合抗原受體的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)如圖 1所示，其基礎(chǔ)設(shè)計(jì)組成包括抗原結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)．

圖1 嵌合抗原受體基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)Fig. 1 Schema of chimeric antigen receptor structure

抗原結(jié)合區(qū)由單鏈抗體(single chain fragment variable，scFv)與鉸鏈區(qū)(spacer)連接形成．單鏈抗體由輕鏈可變區(qū)(VL)、重鏈可變區(qū)(VH)以及它們之間的 15個(gè)氨基酸((Gly4,Ser)3，linker)鏈接肽組成，鉸鏈區(qū)通常來(lái)源于CD8[9]或者IgG[10]．抗原結(jié)合區(qū)對(duì)特定腫瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigen，TAA)有特異識(shí)別功能，其與 TAA間的親和力決定了 CAR-T細(xì)胞與靶細(xì)胞的結(jié)合能力[11]．跨膜區(qū)(transmembrane domain，TD)通常由同源或異源二聚體膜蛋白，如CD3、CD4、CD8、CD28組成，主要起著連接抗原結(jié)合區(qū)與胞內(nèi)信號(hào)區(qū)進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用．胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)主要由 T細(xì)胞受體 TCR/CD3ζ鏈、免疫球蛋白 Fc受體的 γ鏈或 CD3ε鏈構(gòu)成，通常包含免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine_based activation motifs，ITAMs)，負(fù)責(zé)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[12]．

自 1989年起，CAR結(jié)構(gòu)不斷改進(jìn)，目前已發(fā)展到第四代，如圖2所示．

圖2 四代CAR的嵌合受體組成Fig. 2 1st-4th generation of CARs

第一代 CAR胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)只包含單一的TCR/CD3ζ鏈或Fc受體的γ鏈或CD3ε鏈結(jié)構(gòu)域，在體外實(shí)驗(yàn)中可以識(shí)別靶抗原并有效殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)分泌 INF-γ，但是在臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出體內(nèi)存活時(shí)間短，回輸 3周后，外周血中無(wú)法檢測(cè)到第一代CAR-T細(xì)胞[13]．第二代 CAR胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)除了TCR/CD3ζ鏈結(jié)構(gòu)域外，串聯(lián)了一個(gè)協(xié)同刺激分子結(jié)構(gòu)域(co-simulation domain，CSD)，例如 CD27、CD28、CDl34(OX40)或 CDl37(4-1BB)等[14–15]．加入?yún)f(xié)同刺激分子后，第二代 CAR-T細(xì)胞可以分泌更多的 IL-2，細(xì)胞凋亡信號(hào)通路處于抑制狀態(tài)，抗原刺激后 CAR-T細(xì)胞大量擴(kuò)增[15–16]，彌補(bǔ)了第一代 CAR-T細(xì)胞隨著時(shí)間延長(zhǎng)數(shù)量減少的缺陷．其中，加入 CD28共刺激結(jié)構(gòu)域，除了增強(qiáng)細(xì)胞持續(xù)活化外，還有效解除了調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞(regulatory T cells，Treg)對(duì) CAR-T的抑制作用[17]，使第二代 CART細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中能夠更好地發(fā)揮殺傷功能．第三代CAR是在TCR/CD3ζ鏈結(jié)構(gòu)域的基礎(chǔ)上，同時(shí)串聯(lián)了兩個(gè)協(xié)同刺激分子結(jié)構(gòu)域，可使 T細(xì)胞持續(xù)活化增殖，細(xì)胞因子持續(xù)分泌，增強(qiáng)殺傷腫瘤細(xì)胞作用．體外分析二代與三代 CAR-T細(xì)胞的功能并無(wú)明顯區(qū)別，但在針對(duì)不同腫瘤類型的小鼠模型中，它們表現(xiàn)出不同的治療活性[15,18]．第四代 CAR (T cells redirected for universal cytokine killing，TRUCKs)除了嵌合抗原受體基因外，整合表達(dá)免疫因子、整合共刺激因子配體，如促炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素–12(IL-12)等，成功激活 CAR的信號(hào)通路[19]. 這種被改造后的T細(xì)胞可以在CAR識(shí)別靶抗原后，通過(guò)激活下游轉(zhuǎn)錄因子 NFAT(nuclear factor activated T cells)來(lái)誘導(dǎo)表達(dá) IL-12，從而招募環(huán)境中的其他免疫細(xì)胞(樹突狀細(xì)胞、吞噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞等)，參與對(duì)不表達(dá)靶抗原的腫瘤細(xì)胞的清除．同時(shí)，被募集在腫瘤附近的免疫細(xì)胞還可以通過(guò)分泌某些細(xì)胞因子(如干擾素–γ、腫瘤壞死因子–α、IL-4和 IL-5等)來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤附近的微環(huán)境，解除其免疫抑制性，通過(guò)調(diào)動(dòng)機(jī)體自身免疫力參與對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用．

CAR結(jié)構(gòu)基因需要借助特殊的方法整合到T細(xì)胞基因中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)，如使用病毒載體、電穿孔、轉(zhuǎn)座子以及直接轉(zhuǎn)入 mRNA 或蛋白[20–23]．成功表達(dá)CAR的T細(xì)胞需要在體外擴(kuò)增到足夠的數(shù)量才能輸入體內(nèi)產(chǎn)生治療效果．體外擴(kuò)增的方法通常用抗CD3和抗 CD28抗體或是基因修飾過(guò)的表達(dá)靶抗原的抗原提呈細(xì)胞等激活 T細(xì)胞擴(kuò)增．最近又有研究將一段編碼10個(gè)氨基酸的肽段基因序列作為表位標(biāo)簽添加到 CAR結(jié)合區(qū)，然后使用針對(duì)這個(gè)表位標(biāo)簽的單抗特異性選擇修飾CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增與純化[24]．

目前臨床應(yīng)用研究最為深入的代表性CAR-T療法為靶向 CD19的 CAR-T細(xì)胞免疫治療，該療法在治療兒童和成人復(fù)發(fā) B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)和B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)方面表現(xiàn)出穩(wěn)定高效的抗腫瘤效果[25]．在各種臨床研究中，雖然 CAR的設(shè)計(jì)有所不同，但是從臨床響應(yīng)數(shù)據(jù)(表 1)中可以看出，靶向CD19的CAR-T細(xì)胞治療是復(fù)發(fā)/難治B細(xì)胞惡性腫瘤的一種非常有效的治療方法．

表1 靶向CD19的CAR-T細(xì)胞治療臨床研究情況Tab. 1 Clinical responses to CD19 CAR therapy

雖然 CAR-T療法的臨床試驗(yàn)效果良好，但治療過(guò)程中也存在著潛在的毒副作用，如較為常見的發(fā)熱、皮疹、寒顫、低血壓等，嚴(yán)重時(shí)可引起細(xì)胞因子釋放綜合癥、腫瘤溶解綜合癥等[25]．因此，為提高CAR-T的有效性和安全性，一系列可控型CAR-T及其他新型基因修飾 T細(xì)胞技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，包括嵌合共刺激受體(chimeric co-stimulating receptors，CCRs)T 細(xì)胞[34–35]、抗原特異性抑制受體(antigenspecific inhibitory receptors，iCARs)T 細(xì)胞[36]和基于Notch的合成受體(Notch-based receptors，synNotch)T細(xì)胞技術(shù)[37]等．如 Prosser等[35]將 PD-1胞外結(jié)構(gòu)域串聯(lián)CD28跨膜結(jié)構(gòu)域與胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)，得到嵌合共刺激受體(CCR)，將T細(xì)胞中PD-1/PD-L1抑制性信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)為共刺激信號(hào)通路，進(jìn)而加強(qiáng) CCRT細(xì)胞的細(xì)胞毒性．Notch蛋白是一種參與多種有機(jī)體中細(xì)胞間通訊的蛋白質(zhì)，對(duì)正常發(fā)育至關(guān)重要，F(xiàn)edorov等[37]基于Notch蛋白研制出synNotch受體，synNotch受體一端伸出T細(xì)胞外，作為傳感器組件，特異性地識(shí)別多種不同類型的疾病信號(hào)；而另一端在細(xì)胞內(nèi)，作為效應(yīng)器組件，經(jīng)設(shè)計(jì)后能夠讓細(xì)胞執(zhí)行多種多樣的反應(yīng)．這些新技術(shù)可以更精確地調(diào)節(jié) T細(xì)胞的激活，從而降低治療風(fēng)險(xiǎn)．

CAR-T細(xì)胞療法是當(dāng)今最先進(jìn)的腫瘤免疫細(xì)胞治療技術(shù)，在淋巴瘤中已經(jīng)取得了顯著的成果．它的出現(xiàn)使得腫瘤免疫治療進(jìn)入一個(gè)新階段，但是基于CAR的治療方法在技術(shù)和大規(guī)模臨床應(yīng)用方面仍然存在著巨大的挑戰(zhàn)．隨著對(duì)人體免疫系統(tǒng)和腫瘤免疫治療的研究更加深入，相關(guān)臨床數(shù)據(jù)不斷積累．其中：凱特制藥公司(Kite Pharma)的 CAR-T項(xiàng)目Axicabtagene Ciloleucel(KTE-C19)于2016年經(jīng)歐洲藥品管理局(EMA)人用醫(yī)藥產(chǎn)品委員會(huì)(CHMP)和先進(jìn)療法委員會(huì)(CAT)準(zhǔn)許，進(jìn)入新成立的重點(diǎn)藥物(PRIME)審批計(jì)劃．朱諾治療公司(Juno Therapeutics Inc.)CAR-T療法JCAR015在 2016年和 2017年的臨床試驗(yàn)中分別導(dǎo)致 3位和 2位患者死亡，被迫叫停．2017年 8月 30日，美國(guó) FDA批準(zhǔn)諾華(Novartis)旗下 CAR-T療法明星藥物 Tisagenlecleucel(曾用名 CTL019)上市，商品名為 Kymriah，用于治療復(fù)發(fā)/難治 25歲以下 B細(xì)胞急性淋巴性白血病(B-ALL)患者．相信 CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)將日趨完善，并有望成為惡性腫瘤的克星，為醫(yī)學(xué)發(fā)展及人類健康作出貢獻(xiàn)．

2 自然殺傷細(xì)胞療法

自然殺傷(natural killer，NK)細(xì)胞是獨(dú)立于T、B細(xì)胞的第三類淋巴細(xì)胞亞群，屬于固有免疫細(xì)胞，是機(jī)體防御的第一道防線，不僅具有抗感染、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等多重作用，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生．

NK細(xì)胞殺傷的靶細(xì)胞主要包括腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞、較大的病原體(如真菌和寄生蟲)、同種異體移植的器官與組織等．它無(wú)需抗原預(yù)先致敏，即可直接殺傷靶細(xì)胞，故在機(jī)體抗腫瘤、早期抗病毒或胞內(nèi)細(xì)菌感染的免疫應(yīng)答中有重要作用[38]．近幾年，隨著腫瘤分子機(jī)制的深入研究，NK細(xì)胞的抗腫瘤作用備受關(guān)注，已形成多種不同的研究方法，包括同種異體 NK細(xì)胞過(guò)繼免疫治療、清除 NK細(xì)胞的抑制因素、基因修飾NK細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體(CAR)等．

NK 細(xì)胞的表型為 CD3-CD56+，主要分布于骨髓、外周血和脾臟當(dāng)中，占外周血淋巴細(xì)胞的 10%,～20%[39]．NK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制如圖 3所示.

圖3 NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷機(jī)制Fig. 3 Mechanism of NK cell cytotoxicity

由圖 3可知，NK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞機(jī)制包括：①穿孔素和顆粒酶介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用；②死亡受體介導(dǎo)的靶細(xì)胞凋亡；③分泌細(xì)胞因子促進(jìn)殺傷活性；④抗體依賴的細(xì)胞毒性作用(antibody-dependent cellmediated cytotoxicity，ADCC)[40]．NK 細(xì)胞的活性取決于其活化受體和抑制受體間的動(dòng)態(tài)平衡[41–44]，其中活化受體 NKG2D(natural killer group 2,member D)、NKp30、NKp44和 NKp46為 NK 細(xì)胞的活化提供激活信號(hào)，最終引發(fā)細(xì)胞毒性和產(chǎn)生細(xì)胞因子；典型的抑制性受體為 KIR(killer inhibitory receptor，KIR)，KIR識(shí)別“自我”，隨后傳遞負(fù)調(diào)控信號(hào)，最終通過(guò)抑制信號(hào)通路來(lái)抑制 NK 細(xì)胞的活化[45]．此外，細(xì)胞因子對(duì)于 NK細(xì)胞的發(fā)育、存活和功能行駛也具有重要的調(diào)節(jié)作用，如IL-15在NK細(xì)胞發(fā)育和信號(hào)激活中發(fā)揮關(guān)鍵作用[46–47]，IL-12、IL-15和 IL-18促進(jìn) NK細(xì)胞壽命延長(zhǎng)，且二次刺激可增強(qiáng) NK細(xì)胞功能[48]．

在臨床應(yīng)用中，NK細(xì)胞過(guò)繼性治療腫瘤已取得一定的成果，但同時(shí)也存在一些缺陷，如 NK細(xì)胞的靶向性、自體移植 NK 細(xì)胞失活問(wèn)題等[49]．為此，研究者開始嘗試將應(yīng)用于 T細(xì)胞的嵌合抗原受體(CAR)技術(shù)應(yīng)用于NK細(xì)胞，使NK細(xì)胞能夠特異地識(shí)別靶細(xì)胞，提高其殺傷靶細(xì)胞毒性作用，即 CARNK免疫療法．相比于 T細(xì)胞，NK細(xì)胞是一種安全的效應(yīng)細(xì)胞，它的使用能夠避免 CAR-T細(xì)胞治療中帶來(lái)的細(xì)胞因子風(fēng)暴、腫瘤溶解綜合癥等副作用，并且CAR修飾后的NK細(xì)胞與CAR-T細(xì)胞一樣，可以高效地實(shí)現(xiàn)對(duì)靶細(xì)胞的特異殺傷[50]．但研究[51]發(fā)現(xiàn)，CAR-NK細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)及其增殖能力均不及CAR-T細(xì)胞．因此，開發(fā)新一代的 CAR-NK細(xì)胞對(duì)NK細(xì)胞的過(guò)繼性治療具有重要意義．

3 巨噬細(xì)胞療法

巨噬細(xì)胞是機(jī)體固有免疫反應(yīng)的重要組分，是一類具有可塑性、異質(zhì)性的細(xì)胞群體，通過(guò)清除異常細(xì)胞保持正常組織的穩(wěn)態(tài)，在機(jī)體的非特異免疫功能中發(fā)揮重要作用[52]．

巨噬細(xì)胞可通過(guò)多途徑、多步驟發(fā)揮廣譜抗瘤作用．細(xì)菌細(xì)胞壁成分和細(xì)胞因子可以活化巨噬細(xì)胞，活化的巨噬細(xì)胞可以高效、專一地識(shí)別并裂解腫瘤細(xì)胞，包括那些對(duì)細(xì)胞毒性藥物有抗性的腫瘤細(xì)胞，但對(duì)正常細(xì)胞的損傷卻很少．巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞直接接觸 1～3,d后可分泌釋放一些細(xì)胞毒性物質(zhì)(如TNF-α、NO、絲氨酸蛋白酶、溶酶體酶、活性氧等)，可導(dǎo)致所結(jié)合的腫瘤細(xì)胞溶解或調(diào)亡，此過(guò)程緩慢并且需要細(xì)胞之間直接接觸[53]．巨噬細(xì)胞也可以通過(guò)抗體依賴的細(xì)胞毒性作用(antibody-dependent cellmediated cytotoxicity，ADCC)直接殺傷腫瘤細(xì)胞．巨噬細(xì)胞膜表面表達(dá) IgG Fc 受體(FcγRⅠ和 FcγRⅢ)，抗腫瘤抗體 Fab段與腫瘤表面抗原結(jié)合，F(xiàn)c段與巨噬細(xì)胞上IgG Fc受體結(jié)合，在與Fc受體交聯(lián)過(guò)程中巨噬細(xì)胞被活化并分泌 TNF-α、中性蛋白酶、活性氧和 IL-12等細(xì)胞溶解物質(zhì)，將腫瘤細(xì)胞溶解并吞噬[54]．活化的巨噬細(xì)胞可以處理和呈遞腫瘤抗原、激活 T細(xì)胞并刺激機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答．與T細(xì)胞相比，巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的免疫原性、轉(zhuǎn)移潛能和對(duì)藥物的敏感性無(wú)關(guān)．因此，對(duì)于絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞，尤其是那些腫瘤抗原易發(fā)生變異的轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞，在體內(nèi)特異性 T細(xì)胞難以發(fā)揮效應(yīng)時(shí)，其對(duì)活化的巨噬細(xì)胞的殺傷作用卻極少出現(xiàn)抗性[55]．

在腫瘤發(fā)生初期，來(lái)自健康組織的巨噬細(xì)胞活化后可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，但是在腫瘤惡化階段，來(lái)自腫瘤微環(huán)境浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞，即腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor associated macrophages，TAMs)卻促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)．實(shí)體腫瘤不僅包括腫瘤細(xì)胞成分，腫瘤組織當(dāng)中還有相當(dāng)多的其他非腫瘤細(xì)胞成分，這些細(xì)胞成分構(gòu)成了所謂腫瘤微環(huán)境，在腫瘤的浸潤(rùn)、增殖和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用．腫瘤微環(huán)境中包含多樣細(xì)胞成分，有組織本身固有的脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞，也有血源性細(xì)胞成分，包括巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞等炎性細(xì)胞，這些血源性細(xì)胞在腫瘤的進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[56–57]．TAMs是腫瘤微環(huán)境當(dāng)中最豐富的細(xì)胞成分，在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮多項(xiàng)功能，包括分泌金屬基質(zhì)蛋白酶消化細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)遷移、分泌多種生長(zhǎng)因子及血管生成因子促進(jìn)腫瘤增殖、分泌抑制性細(xì)胞因子抑制機(jī)體腫瘤免疫等[58]．與腫瘤細(xì)胞不同的是，TAMs的基因表達(dá)更穩(wěn)定，所以采取針對(duì)巨噬細(xì)胞作為靶點(diǎn)治療腫瘤具有很大的可行性．此外，隨著研究的深入，研究者發(fā)現(xiàn)了 TAMs促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)機(jī)制，多種腫瘤細(xì)胞表面均表達(dá)一種膜糖蛋白 CD47．當(dāng) CD47與巨噬細(xì)胞的 SIRPα 和 TSP1受體分別結(jié)合后，巨噬細(xì)胞便會(huì)停止吞噬腫瘤細(xì)胞，反而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)[59]．因此，目前研究者們正嘗試通過(guò)使用 CD47的特異性抗體激活巨噬細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞，相關(guān)研究已進(jìn)入臨床階段．

4 其他腫瘤免疫細(xì)胞療法

除了以上3種最受關(guān)注的療法外，腫瘤免疫細(xì)胞治療還涉及淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)、樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer，CIK)等．LAK細(xì)胞即淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞，是一類重要的細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞群，平時(shí)處于抑制狀態(tài)，在誘導(dǎo)因子IL-2刺激下激活增殖，對(duì)人體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞具有很強(qiáng)的殺傷作用，具有廣譜高效的殺瘤效應(yīng)[60]．LAK細(xì)胞療法開發(fā)于20世紀(jì)80年代后期，經(jīng)過(guò)多年的臨床研究，目前僅作為腫瘤治療的輔助療法．

TIL細(xì)胞即腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，是從腫瘤組織中分離出的 CD4+、CD8+,T細(xì)胞，在體外經(jīng) IL-2的刺激、活化、擴(kuò)增后可應(yīng)用于臨床腫瘤過(guò)繼性細(xì)胞治療．臨床上進(jìn)行TIL 過(guò)繼性治療之前，需要對(duì)患者進(jìn)行全身放療，使患者體內(nèi)的淋巴細(xì)胞清除，同時(shí)聯(lián)合化療藥治療可提高療效[61]．

DC即樹突狀細(xì)胞，為體內(nèi)專職抗原提呈細(xì)胞，是抗微生物、腫瘤和自身抗原免疫應(yīng)答時(shí)重要的啟動(dòng)子和調(diào)控子[62]．在 DC發(fā)育和發(fā)揮作用的過(guò)程中，未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型 T細(xì)胞，是啟動(dòng)、調(diào)控并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)．DC亞群在體內(nèi)抗腫瘤免疫應(yīng)答的動(dòng)物模型中廣泛研究，DC通常在體外被分離出來(lái)，并負(fù)載腫瘤抗原，注射到同系動(dòng)物中作為腫瘤疫苗[63]．

CIK細(xì)胞即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞，是人體外周血中單個(gè)核細(xì)胞在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子如 IL-2、CD3單抗、干擾素–1、重組人纖維蛋白等共同刺激后獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞，具有識(shí)別、殺傷腫瘤的特性，增殖能力強(qiáng)，細(xì)胞毒作用強(qiáng)，同時(shí)也具有一定的免疫特性[64]．將CIK細(xì)胞與DC細(xì)胞在體外共同培養(yǎng)，在促進(jìn) DC細(xì)胞成熟的同時(shí)，更加強(qiáng)了 CIK細(xì)胞的抗腫瘤活性，即DC-CIK．DC-CIK既能凸顯出特異性的免疫殺傷，又能展現(xiàn)其強(qiáng)大的非特異性抗瘤效應(yīng)，除了殺瘤活性高及殺瘤范圍廣的特點(diǎn)外，還具有降低免疫耐受的特性，可以有效地預(yù)防某些自身免疫性疾病[65]．

5 結(jié) 語(yǔ)

腫瘤免疫細(xì)胞治療除了可直接發(fā)揮抗腫瘤的作用外，還可以通過(guò)糾正機(jī)體免疫功能低下，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤細(xì)胞的免疫功能而兼顧治療與預(yù)防的雙重療效．近年來(lái)，腫瘤免疫療法研究取得了重要進(jìn)展，腫瘤免疫細(xì)胞治療受到越來(lái)越多的關(guān)注，預(yù)示著免疫細(xì)胞治療有望成為繼手術(shù)、化療、放療、靶向治療后惡性腫瘤治療領(lǐng)域的又一場(chǎng)革新．

［1］ Shang Y，Baumricker C R，Green M H. c-Myc is a major mediator of the synergistic growth inhibitory effects of retinoic acid and interferon in breast cancer cells[J].Journal of Biological Chemistry，1998，273(46)：30608-30613.

［2］ Kusnierczyk H，Pajtasz-Piasecka E，Koten J W，et al.Further development of local IL-2 therapy of cancer：Multiple versus single IL-2 treatment of transplanted murine colon carcinoma[J]. Cancer Immunology Immunotherapy，2004，53(5)：445-452.

［3］ Crockford D，Turiman N，Allan C，et al. Thymosin beta4：Structure，function，and biological properties supporting current and future clinical applications[J]. Annals of the New York Academy of Sciences，2010，1194(4)：179-189.

［4］ 曹瑞珍，薛燕，李大力. 抗腫瘤多糖研究進(jìn)展[J]. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然漢文版，2004，19(6)：657-658.

［5］ Lohmueller J，F(xiàn)inn O J. Current modalities in cancer immunotherapy：Immunomodulatory antibodies，CARs and vaccines[J]. Pharmacology & Therapeutics，2017，178：31-47.

［6］ Hassel J C，Heinzerling L，Aberle J，et al. Combined immune checkpoint blockade(anti-PD-1/anti-CTLA-4)：Evaluation and management of adverse drug reactions[J]. Cancer Treatment Reviews，2017，57：36-49.

［7］ Wang Q，Wu X. Blocking the PD-1/PD-L1 pathway in glioma：A potential new treatment strategy[J]. Journal of Hematology & Oncology，2017，10(1)：81.

［8］ Gross G，Waks T，Eshhar Z. Expression of immunoglobulin-T-cell receptor chimeric molecules as functional receptors with antibody-type specificity[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1989，86(24)：10024-10028.

［9］ Pofler D L，Levine B L，Kalos M，et a1. Chimeric antigen receptor modified T cells in chronic lymphoid leukemia[J]. New England Journal of Medicine，2011，365(8)：725-733.

［10］ Savoldo B，Ramos C A，Liu E，et al. CD28 costimulation improves expansion and persistence of chimeric antigen receptor-modified T cells in lymphoma patients[J]. Journal of Clinical Investigation，2011，121(5)：1822-1826.

［11］ Jensen M C，Riddell S R. Design and implementation of adoptive therapy with chimeric antigen receptor-modified T cells[J]. Immunological Reviews，2014，257(1)：127-144.

［12］ Ramos C A，Dotti G. Chimeric antigen receptor(CAR)-engineered lymphocytes for cancer therapy[J]. Expert Opinion on Biological Therapy，2011，11：855-887.

［13］ Kershaw M H，Westwood J A，Parker L L，et a1. A phase I study on adoptive immunotherapy using gene-modified T cells for ovarian cancer[J]. Clinical Cancer Research，2006，12(20)：6106-6115.

［14］ Maher J，Brentjens R J，Gunset G，et al. Human T-lymphocyte cytotoxicity and proliferation directed by a single chimeric TCRzeta/CD28 receptor[J]. Nature Biotechnology，2002，20(1)：70-75.

［15］ Milone M C，F(xiàn)ish J D，Carpenito C，et al. Chimeric receptors containing CD137 signal transduction domains mediate enhanced survival of T cells and increased antileukemic efficacy in vivo[J]. Molecular Therapy，2009，17(8)：1453-1464.

［16］ Kowolik C M，Topp M S，Gonzalez S，et al. CD28 costimulation provided through a CD19-specific chimeric antigen receptor enhances in vivo persistence and antitumor efficacy of adoptively transferred T cells[J]. Cancer Research，2006，66(22)：10995-11004.

［17］ Loskog A，Giandomenico V，Rossig C，et al. Addition of the CD28 signaling domain to chimeric T-cell receptors enhances chimeric T-cell resistance to T regulatory cells[J]. Leukemia，2006，20(10)：1819-1828.

［18］ Carpenito C，Milone M C，Hassan R，et al. Control of large，established tumor xenografts with genetically retargeted human T cells containing CD28 and CD137 domains[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2009，106(9)：3360-3365.

［19］ Cheadle E J，Gornall H，Baldan V，et al. CAR T cells：Driving the road from the laboratory to the clinic[J].Immunological Reviews，2014，257(1)：91-106.

［20］ Hu W S，Pathak V K. Design of retroviral vectors and helper cells for gene therapy[J]. Pharmacological Reviews，2000，52(4)：493-511.

［21］ Montini E，Cesana D，Schmidt M，et al. Hematopoietic stem cell gene transfer in a tumor-prone mouse model uncovers low genotoxicity of lentiviral vector integration[J]. Nature Biotechnology，2006，24(6)：687-696.

［22］ Till B G，Jensen M C，Wang J，et al. Adoptive immunotherapy for indolent non-Hodgkin lymphoma and mantle cell lymphoma using genetically modified autologous CD20-specific T cells[J]. Blood，2008，112(6)：2261-2271.

［23］ Maiti S N，Huls H，Singh H，et al. Sleeping beauty system to redirect T cell specificity for human applications[J]. Journal of Immunotherapy，2013，36(2)：112-123.

［24］ Cartellieri M，Koristka S，Arndt C，et al. A novel ex vivo is isolation and expansion procedure for chimeric antigen receptor engrafted human T cells[J]. PLoS One，2014，9(4)：e93745.

［25］ Sadelain M，Rivière I，Riddell S. Therapeutic T cell engineering[J]. Nature，2017，545(7655)：423-431.

［26］ Davila M L，Riviere I，Wang X，et al. Efficacy and toxicity management of 19-28,z CAR T cell therapy in B cell acute lymphoblastic leukemia[J]. Science Translational Medicine，2014，6(224)：224-225.

［27］ Maude S L，F(xiàn)rey N，Shaw P A，et al. Chimeric antigen receptor T cells for sustained remissions in leukemia[J].The New England Journal of Medicine，2014，371(16)：1507-1517.

［28］ Lee D W，Kochenderfer J N，Stetler-Stevenson M，et al.T cells expressing CD19 chimeric antigen receptors for acute lymphoblastic leukaemia in children and young adults：A phase 1 doseescalation trial[J]. Lancet，2015，385(9967)：517–528.

［29］ Turtle C J，Hanafi L A，Berger C，et al. CD19 CAR-T cells of defined CD4+：CD8+composition in adult B cell ALL patients[J]. Journal of Clinical Investigation，2016，126(6)：2123–2138.

［30］ Qasim W，Zhan H，Samarasinghe S，et al. Molecular remission of infant B-ALL after infusion of universal TALEN gene-edited CAR T cells[J]. Science Translational Medicine，2017，9(374)：eaaj2013.

［31］ Kochenderfer J N，Dudley M E，Kassim S H，et al. Chemotherapy-refractory diffuse large B-cell lymphoma and indolent B-cell malignancies can be effectively treated with autologous T cells expressing an anti-CD19 chimeric antigen receptor[J]. Journal of Clinical Oncology，2015，33(6)：540–549.

［32］ Sabatino M，Hu J，Sommariva M，et al. Generation of clinical-grade CD19-specific CAR-modified CD8+memory stem cells for the treatment of human B-cell malignancies[J]. Blood，2016，128(4)：519-528.

［33］ Turtle C J，Hanafi L A，Berger C，et al. Immunotherapy of non-Hodgkin’s lymphoma with a defined ratio of CD8+and CD4+CD19-specific chimeric antigen receptor-modified T cells[J]. Science Translational Medicine，2016，8(355)：116.

［34］ Kloss C C，Condomines M，Cartellieri M，et al. Combinatorial antigen recognition with balanced signaling promotes selective tumor eradication by engineered T cells[J]. Nature Biotechnology，2013，31(1)：71-75.

［35］ Prosser M E，Brown C E，Shami A F，et al. Tumor PD-L1 co-stimulates primary human CD8+cytotoxic T cells modified to express a PD1：CD28 chimeric receptor[J].Molecular Immunology，2012，51(3/4)：263-272.

［36］ Roybal K T，Rupp L J，Morsut L，et al. Precision tumor recognition by T cells with combinatorial antigen-sensing circuits[J]. Cell，2016，164(4)：770-779.

［37］ Fedorov V D，Themeli M，Sadelain M. PD-1-and CTLA-4-based inhibitory chimeric antigen receptors(iCARs)ivert off-target immunotherapy responses[J]. Science Translational Medicine，2013，5(215)：172.

［38］ Gazit R，Gruda R，Elboim M，et al. Lethal influenza infection in the absence of the natural killer cell receptor gene Ncrl[J]. Nature Immunology，2006，7(5)：517-523.

［39］ Loris Z，Cristina P，Prisco M，et al. NK cells and cancer[J]. Journal of Immunology，2007，27(45)：5932-5943.

［40］ Sutlu T，Alici E. Natural killer cell-based immunotherapy in cancer：Current insights and future prospects[J]. Journal of Internal Medcine，2009，266(2)：154-181.

［41］ Vivier E，Ugolini S，Blaise D，et al. Targeting natural killer cells and natural killer T cells in cancer[J]. Nature Reviews Immunology，2012，12(4)：239-252.

［42］ Vivier E，Ugolini S. Natural killer cells：From basic research to treatments[J]. Frontiers in Immunology，2011，2：18.

［43］ Ljunggren H G，Malmberg K J. Prospects for the use of NK cells in immunotherapy of human cancer[J]. Nature Reviews Immunology，2007，7(5)：329-339.

［44］ Vivier E，Nunès J A，Vély F. Natural killer cell signaling path-ways[J]. Science，2004，306(5701)：1517-1519.

［45］ Romagn E F，Vivier E. Natural killer cell-based therapies[J]. F1000 Report Medcine，2011，3(1)：9.

［46］ Fehniger T A，Caligiuri M A. Interleukin 15：Biology and relevance to human disease[J]. Blood，2001，97(1)：14-32.

［47］ Lucas M，Schaehterle W K，Aichele P，et al. Dendritic cells prime natural killer cells by trans-presenting interleukin 15[J]. Immunity，2007，26(4)：503-517.

［48］ Cooper M A，Elliott J M，Keyel P A，et al. Cytokine induced memory like natural killer cells[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2009，106(6)：1915-1919.

［49］ Boissel L，Betancur M，Wels W S，et al. Transfection with mRNA for CDl9 specific chimeric antigen receptor restores NK cell mediated killing of CLL cells[J]. Leukemia Research，2009，33(9)：1255-1259.

［50］ Cheng M，Chen Y，Xiao W，et al. NK cell-based immunotherapy for malignant diseases[J]. Cellular & Molecular Immunology，2013，10(3)：230-252.

［51］ Koepsell S A，Miller J S，McKenna D H J. Natural killer cells：A review of manufacturing and clinical utility[J].Transfusion，2013，53(2)：404-410.

［52］ Higuchi M，Higashi N，Taki H，et al. Cytolytic mechanisms of activated macrophages. Tumor necrosis factor and L-arginine-dependent mechanisms act synergistically as the major cytolytic mechanisms of activated macrophages[J]. Journal of Immunology，1990，144(4)：1425-1431.

［53］ Kr?ncke K D，F(xiàn)ehsel K，Kolb-Bachofen V. Inducible nitric oxide synthase and its product nitric oxide，a small molecule with complex biological activities[J]. Biological Chemistry Hoppe-Seyler，1995，376(6)：327-343.

［54］ Nathan C，Brukner L，Kaplan G，et al. Role of activated macrophages in antibody-dependent lysis of tumor cells[J]. The Journal of Experimental Medicine，1980，152(1)：183-197.

［55］ 王曉寧，范清宇，郝新保，等. 胞壁酰二肽激活大鼠巨噬細(xì)胞抗腫瘤免疫效應(yīng)的研究[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，1999，15(3)：193-195.

［56］ Balkwill F R，Mantovani A. Cancer-related inflammation：Common themes and therapeutic opportunities[J]. Seminars in Cancer Biology，2012，22(1)：33-40.

［57］ Liu Y，Can X. The origin and function of tumorassociated macrophages[J]. Cellular & Molecular Immunology，2015，12(1)：1-4.

［58］ Gordon S，Taylor P R. Monocyte and macrophage heterogeneity[J]. Nature Reviews Immunology，2005，5(12)：953-964.

［59］ Weiskopf K，Weissman I L. Macrophages are critical effectors of antibody therapies for cancer[J]. Mabs，2015，7(2)：303-310.

［60］ Kirby J A，F(xiàn)orsythe J L，Proud G，et al. Renal allograft rejection：Possible involvement of lymphokine-activated killer cells[J]. Immunology，1989，67：62-67.

［61］ Rosenberg S A，Spiess P，Lafreniere R. A new approach to the adoptive immunotherapy of cancer with tumorinfiltrating lymphocytes[J]. Science，1986，233(4770)：1318-1319.

［62］ Yang M，Galina V S，Dmitriy W G，et al. Tumor associated regulatory dendritic cells[J]. Seminars in Cancer Biology，2012，22(4)：298-306.

［63］ Xiao L，Joo K I，Lim M，et al. Dendritic cell-directed vaccination with a lentivector encoding PSCA for prostate cancer in mice[J]. PLoS One，2012，7(11)：e48866.

［64］ Rong X，Wei F，Li A，et al. Effective activity of cytokine induced killer cells against hepatocellular carcinoma including tmor-initiating cells[J]. Med Hypotheses，2015，84(3)：159-161.

［65］ Shi S B，Ma T H，Li C H，et al. Effact of maintenance therapy with dendritic cell：Cytokine-induced killer cells in patients with advanced non-small cell lung cancer[J].Tumori，2012，98(3)：314-319.