路軍秀 程 珊 王淑明 潘國聘 朱茉莉 趙繁榮 楊明濤 陳 蘇 宋宇濤 萬光瑞 李 鵬

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

動脈粥樣硬化(AS)是中老年人心腦血管疾病發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)，心脈佳(專利號：ZL 2010 1 0536001.x)，主要由葛根、山楂、紅曲、丹參等多種中藥科學(xué)組方，經(jīng)現(xiàn)代工藝精制而成，經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)有良好的抗AS作用〔1～5〕。為了更好地讓此藥應(yīng)用于臨床，根據(jù)中藥新藥長期毒性試驗(yàn)方法和技術(shù)指導(dǎo)原則〔6〕，進(jìn)行了大鼠長期毒性試驗(yàn)，本文觀察心脈佳連續(xù)灌胃12 w及停藥恢復(fù)4 w大鼠的毒性反應(yīng)情況。

1 材料與方法

1.1藥物、動物及儀器 心脈佳煎劑，每毫升煎劑含1.675 g生藥。SD大鼠(SPF級)，體重160～180 g，雌雄各半，由河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK(豫)2010-0002。希森美康XS-500i全血分析儀，西門子ADVIA2400全自動生化分析儀，日本Nickon Eclipse E200光學(xué)顯微鏡等。

1.2動物分組與給藥 取SD大鼠120只，常規(guī)大鼠飼料及凈化自來水適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，按性別體重隨機(jī)分為4組，即心脈佳高(33.500 g·kg-1·d-1)、中(11.167 g·kg-1·d-1)、低(3.350 g·kg-1·d-1)劑量組和空白對照組，每組雌雄各15只，給藥組日給藥劑量分別為臨床成人(70 kg)日給藥量的111.67、37.22、11.17倍，各劑量組每日上午7～8時(shí)按20 ml/kg灌胃給藥1次，空白對照組給予等體積的生理鹽水。每周給藥6 d，連續(xù)給藥12 w。每周最后1 d稱量體重，并根據(jù)體重變化調(diào)整給藥量。實(shí)驗(yàn)期內(nèi)觀察動物的皮毛、行為、精神、進(jìn)食及分泌物等一般情況。實(shí)驗(yàn)第12周末，每組雌雄大鼠各取10只心臟取血，進(jìn)行血液學(xué)及血液生化檢查；處死大鼠進(jìn)行尸體解剖行肉眼及組織病理學(xué)檢查，取主要臟器(心、肝、脾、肺、腎、大腦)稱重并計(jì)算臟器系數(shù)(臟器系數(shù)=臟器重×100/禁食后體重)，各組大鼠主要臟器取合適大小用10%的甲醛溶液固定后，石蠟包埋，作常規(guī)組織切片，HE染色后觀察。其他動物停藥恢復(fù)4 w后，行上述同樣檢查。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 軟件行方差分析。

2 結(jié) 果

2.1心脈佳對大鼠一般情況的影響 各組大鼠行為活動正常、攝食飲水正常，皮毛光澤，眼、耳、口、生殖器無異常分泌物，除高劑量組部分雌雄大鼠出現(xiàn)軟便外，其他組糞便顏色形狀與空白對照組相比均無明顯異常，無大鼠死亡。停藥恢復(fù)期間，各項(xiàng)觀察指標(biāo)均未見異常改變。

2.2心脈佳對大鼠體重變化的影響 心脈佳低、中及高劑量組雌、雄大鼠體重和同期空白對照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，恢復(fù)期各組大鼠體重和同期對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1和圖2。

2.3對大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響 給藥12 w及停藥恢復(fù)4 w后，與空白對照組相比，各給藥組大鼠血常規(guī)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1、表2。

2.4心脈佳對大鼠血生化指標(biāo)的影響 給藥12 w及停藥恢復(fù)4 w后，與空白對照組相比，各給藥組大鼠血生化指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3、表4。

2.5各組胚器肉眼觀察及臟器系數(shù)比較 給藥12 w及停藥恢復(fù)4 w后，處死并解剖各組大鼠，肉眼觀察可見大鼠胸腔、腹膜腔漿膜光滑，主要臟器未見明顯病變。與空白對照組相比，各給藥組大鼠臟器系數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，未見遲緩毒性。見表5、表6。

2.6心脈佳對各組組織病理學(xué)影響 光鏡下觀察給藥12 w及停藥恢復(fù)4 w各組大鼠臟器的組織切片，未見細(xì)胞水變性、脂肪變，未見細(xì)胞壞死，未見炎癥細(xì)胞浸潤等，各給藥組主要臟器未見明顯病理學(xué)改變。見圖3，圖4。

給藥1～12 w(n=15)，停藥恢復(fù)期(n=5)圖1 心脈佳對雌性大鼠體重的影響

給藥1～12 w(n=15)，停藥恢復(fù)期(n=5)圖2 心脈佳對雄性大鼠體重的影響

組別白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC,×109/L)雌性雄性淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)(LY,×109/L)雌性雄性中性粒細(xì)胞百分比(NEUT,%)雌性雄性空白對照組6.6±3.69.73±3.545.31±2.937.58±2.8913.79±5.5516.58±5.36心脈佳低劑量組7.1±3.78.99±3.715.80±2.947.16±2.8512.46±3.9213.99±3.5心脈佳中劑量組7.1±3.58.33±2.585.86±2.646.53±1.7312.20±3.6714.66±4.42心脈佳高劑量組8.0±1.56.91±3.276.37±1.255.59±2.6315.02±4.1813.80±3.28組別淋巴細(xì)胞百分比(LY,%)雌性雄性單核細(xì)胞百分比(MO,%)雌性雄性嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EOS,%)雌性雄性空白對照組79.61±7.4277.85±6.343.90±1.244.07±0.722.34±2.201.36±1.54心臟佳低劑量組82.46±4.9279.99±3.823.42±0.754.17±0.531.83±1.641.69±1.17心臟佳中劑量組82.85±3.8979.49±5.003.46±0.673.88±0.921.35±1.311.73±1.27心臟佳高劑量組79.71±4.5880.64±3.333.61±0.803.90±0.691.44±1.051.44±1.39組別嗜堿性粒細(xì)胞百分比(BASO,%)雌性雄性紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC,×1012/L)雌性雄性血紅蛋白(HGB,g/L)雌性雄性空白對照組0.36±0.840.14±0.158.79±0.349.23±0.41160.20±5.55159.5±6.90心脈佳低劑量組0.13±0.170.25±0.338.38±0.748.92±0.47151.20±7.52157.5±9.28心脈佳中劑量組0.13±0.160.24±0.318.52±0.629.3±0.49147.90±8.27157.8±7.18心脈佳高劑量組0.23±0.290.23±0.368.88±0.449.02±0.80155.60±7.11157.00±11.73血細(xì)胞比容(HCT,%)雌性雄性平均紅細(xì)胞體積(MCV/fl)雌性雄性平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH,pg)雌性雄性空白對照組46.16±1.6545.67±1.9852.55±2.4849.5±1.1718.24±0.617.29±0.49心脈佳低劑量組43.29±1.9345.04±2.1851.87±3.3050.65±2.9018.10±0.917.69±0.61心脈佳中劑量組44.69±1.9245.35±3.3851.99±1.7748.52±1.9917.65±0.5817.00±0.77心脈佳高劑量組44.42±2.2545.04±1.5050.39±1.4250.41±3.2117.54±0.5317.46±0.93組別平均血紅蛋白濃度(MCHC,g/L)雌性雄性血小板計(jì)數(shù)(PLT,×109/L)雌性雄性空白對照組347.10±8.72349.30±7.45970.10±73.90948.50±165.14心脈佳低劑量組349.40±8.72349.90±11.26822.00±135.86964.90±172.41心脈佳中劑量組339.60±6.06350.20±8.28869.80±95.61933.10±150.64心脈佳高劑量組348.10±5.53346.70±6.07975.60±173.22880.70±94.73

表2 心脈佳停藥恢復(fù)4 w后對大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

表3 心脈佳給藥12 w后對大鼠血生化指標(biāo)的影響

表4 心脈佳停藥恢復(fù)4 w后對大鼠血生化指標(biāo)的影響

表5 心脈佳給藥12 w后對大鼠臟器系數(shù)的影響

表6 心脈佳停藥恢復(fù)4 w后對大鼠臟器系數(shù)的影響

圖3 各組心臟、肝臟組織病理學(xué)觀察(HE，×400)

圖4 各組脾臟、肺臟、大腦、腎臟病理學(xué)觀察(HE，×400)

3 討 論

毒理學(xué)研究是新藥的安全性評價(jià)的必要手段，由于前期急性毒性實(shí)驗(yàn)未測出半數(shù)致死量(LD50)，因此以最大給藥量作為高劑量，以高劑量的1/3和1/10作為中、低劑量。齊云等〔7〕研究發(fā)現(xiàn)，SD雌雄大鼠部分血液學(xué)和血生化指標(biāo)存在差異，故本文統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)時(shí)此部分指標(biāo)按性別分別統(tǒng)計(jì)。心脈佳組方中葛根含的葛根黃酮〔8〕、丹參含的丹參酮ⅡA〔9〕等，文獻(xiàn)報(bào)道有明確的抗AS的作用。本研究表明，心脈佳毒性低，臨床治療劑量可長期服用。

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2Yin YL，Wan J，Li P,etal.Protective effect of Xin Mai Jia ultrafiltration extract on human umbilical vein endothelial cell injury induced by hydrogen peroxide and the effect on the NO-cGMP signaling pathway〔J〕.Exp Ther Med，2014；8(1)：38-48.

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7齊 云，蔡潤蘭，劉 彬，等.新藥長毒試驗(yàn)動物血液生化測定規(guī)范化研究系列之五——SPF級SD大鼠血液生化參考值的建立〔J〕.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2006；16(4)：193-6.

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9沈曉君，高愛社，關(guān)懷敏，等.丹參酮ⅡA對兔動脈粥樣硬化病灶凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2013；33(1)：90-2.