何 鵬 陳 玲 王戩萌 徐文浩

(孝感市中心醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，湖北 孝感 432100)

腦出血是臨床神經(jīng)內(nèi)外科的常見病和多發(fā)病，是受環(huán)境因素和遺傳因素共同影響的多因素疾病，發(fā)病率、致死率、致殘率均很高，嚴(yán)重影響人類的生活質(zhì)量〔1〕。近年來有研究〔2～4〕報(bào)道高血壓、吸煙是腦出血的高危因素，吸煙與高血壓有確切的劑量-效應(yīng)關(guān)系，而原發(fā)性高血壓又與腦卒中事件發(fā)生率及致死率密切相關(guān)；炎性因子參與腦出血這一復(fù)雜的病理生理過程。本研究通過監(jiān)測(cè)不同病情吸煙女性血清中白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-6和腫瘤壞死因子(TNF)-α蛋白含量及mRNA水平，為女性原發(fā)性高血壓腦出血的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)防、治療、轉(zhuǎn)歸及預(yù)后提供重要的臨床指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1臨床資料及實(shí)驗(yàn)分組 隨機(jī)選擇孝感市中心醫(yī)院2015年11月至2017年2月體檢、就診及住院女性180例，分為正常不吸煙女性為對(duì)照組〔平均年齡(55.6±3.9)歲，n=25〕、正常吸煙女性為實(shí)驗(yàn)1組〔平均年齡(56.3±5.4)歲，n=25〕、不吸煙原發(fā)性高血壓女性為實(shí)驗(yàn)2組〔平均(57.8±4.2)歲，n=40〕、吸煙原發(fā)性高血壓女性為實(shí)驗(yàn)3組〔平均年齡(56.8±6.1)歲，n=40〕、吸煙原發(fā)性高血壓腦出血女性為實(shí)驗(yàn)4組〔平均年齡(52.9±4.5)歲，n=50〕。

所有患者均為首次出血，符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)第四屆腦血管病會(huì)議確定的腦出血的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕，排除其他重要器官功能障礙、繼發(fā)性高血壓、惡性腫瘤、內(nèi)分泌及自身免疫性疾病，一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α的酶聯(lián)免疫試劑盒購于南京建成生物有限公司；Trizol、引物、RT-PCR試劑盒購于塔克拉生物有限公司。Biotek Epoch酶標(biāo)儀(美國)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(型號(hào)ABI7300，美國)；Biometra PCR擴(kuò)增儀(美國)。

1.3標(biāo)本采集 5組受試者均在清晨空腹抽取靜脈血5 ml，離心1 500 r/min，10 min，分離血清待測(cè)。

1.4檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1血清炎性因子IL-2、IL-6、TNF-α蛋白含量檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)IL-2、IL-6、TNF-α的蛋白含量，首先酶標(biāo)板封閉40 min，洗滌3次，3 min/次；加入待測(cè)樣本80 μl/孔，37℃60 min，洗滌3次，3 min/次；加入酶標(biāo)抗體80 μl/孔，底物顯色3～5 min，加入終止液終止反應(yīng)，20 min內(nèi)上Epoch酶標(biāo)儀檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒方法操作。

1.4.2IL-2、IL-6、TNF-α mRNA水平的檢測(cè) 采用熒光定量法檢測(cè)，引物序列由北京鼎國生物有限公司合成。IL-2：正義:5′-GACGCTG-TAAGTCACGAAGGAT-3′，反義：5′-CGTAGCTTCTAGCCTGCAGG-3′，產(chǎn)物212 bp；IL-6：正義：5′-ACAGATGTAGCGCATGCTAT-3′，反義：5′-TAGCTGTAGCTGGTACGTG-3′，產(chǎn)物239 bp；TNF-α：正義:5′-GGTGATCGGTGCCAACAAGGA-3′，反義：5′-CACGCTGGCTCAGCCACTG-3′,產(chǎn)物173 bp。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1各組血清IL-2、IL-6、TNF-α蛋白含量比較 實(shí)驗(yàn)1、2、3、4組血清中IL-2蛋白含量依次降低，明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；血清IL-6和TNF-α蛋白含量依次升高，明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

2.2各組血清IL-2、IL-6、TNF-α mRNA水平比較 實(shí)驗(yàn)1、2、3、4組血清IL-2 mRNA水平依次降低，明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)1、2、3、4組血清IL-6和TNF-α mRNA水平依次升高，明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

表1 各組血清IL-2、IL-6和TNF-α蛋白含量比較

與對(duì)照組比較：1)P<0.01；與實(shí)驗(yàn)1組比較：2)P<0.01；與實(shí)驗(yàn)2組比較：3)P<0.01；與實(shí)驗(yàn)3組比較：4)P<0.01；下表同

表2 各組血清IL-2、IL-6和TNF-α mRNA水平比較值)

3 討 論

在腦出血的眾多發(fā)病因素中高血壓是最重要的高危因素，原發(fā)性高血壓能加重機(jī)體血管內(nèi)皮功能障礙，二者相互作用導(dǎo)致惡性循環(huán)，與腦血管事件發(fā)生率、致死率密切相關(guān)〔6，7〕。高血壓腦出血的患者存在免疫功能紊亂和免疫反應(yīng)炎癥，其中細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)(IL-2、IL-2R、IL-6和TNF-α等)發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，是腦組織損傷的一種急性應(yīng)激反應(yīng)，細(xì)胞因子參與腦出血這一復(fù)雜的病理生理過程〔8～10〕。

目前研究〔2〕已經(jīng)證實(shí)，煙草中的有害物質(zhì)能夠損傷血管的結(jié)構(gòu)和功能，吸煙人群高血壓的患病率明顯高于不吸煙人群，且吸煙與高血壓有確切的劑量-效應(yīng)關(guān)系。吸煙和高血壓對(duì)心腦血管疾病影響的嚴(yán)重性日趨明確，但其作用機(jī)制不明。本研究結(jié)果顯示：吸煙能降低機(jī)體免疫力，導(dǎo)致IL-2水平下調(diào)、IL-6和TNF-α水平上調(diào)，炎性因子IL-2、IL-6和TNF-α參與原發(fā)性高血壓的發(fā)病機(jī)制，臨床監(jiān)測(cè)原發(fā)性高血壓吸煙女性血清中IL-2、IL-6和TNF-α的含量，可為女性原發(fā)性高血壓腦出血的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)防、治療、轉(zhuǎn)歸及預(yù)后提供重要的臨床指導(dǎo)。

1段淑霞,劉 濤,王戩萌.尼莫地平對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)高血壓腦出血患者血清炎性因子影響的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2015;19(7):1065-7.

2向全永,潘曉群,呂淑榮,等.吸煙與高血壓相關(guān)關(guān)系研究〔J〕.中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2010;11(11):1129-31.

3郭宗強(qiáng),孫同文.高血壓病患者并發(fā)腦卒中的危險(xiǎn)因素研究〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)生,2010;48(15):77-8.

4藍(lán)少勇,吳傳喜,林 東.老年急性腦出血患者血清炎性因子水平變化及其臨床意義〔J〕.實(shí)用心腦肺血管病雜志,2017;25(5):124-5.

5王文志.《中國腦血管病防治指南》節(jié)選〔J〕.中國慢性病預(yù)防與控制,2006;14(2):143-5.

6張 玲,張 蕾.阿托伐他汀對(duì)高血壓患者血清炎性因子、血管內(nèi)皮功能及血脂水平的影響〔J〕.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015；21(7):905-8.

7黃 俊,黃江燕,吳鈞芳,等.貝那普利對(duì)高血壓患者外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2013;33(20):4965-7.

8秋 楠,黨小軍,張?jiān)搅?等.高血壓腦出血患者IL-2、sIL-2R表達(dá)意義的研究〔J〕.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005;20(4):21-2.

9張?jiān)搅?劉 瑄,師 蔚.高血壓腦出血患者細(xì)胞免疫及IL-2、sIL-2R表達(dá)的意義〔J〕.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2002;23(6):555-7.

10張明偉,彭 俊,劉 陽,等.高血壓腦出血患者血清和顱內(nèi)血腫液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量研究〔J〕.中華神經(jīng)外科疾病研究雜志,2010;9(2):138-40.