張婷，張旭，汪昕，郝蘇怡，姚應水，沈沖

·論著·

RABEp1基因與精神分裂癥患者藥物治療所致體質量變化的關聯(lián)分析

張婷，張旭，汪昕，郝蘇怡，姚應水，沈沖

目的探討RABEp1基因多態(tài)性與精神分裂癥(schizophrenia，SZ)患者抗精神病藥治療所致體質量變化的關聯(lián)。方法調查并隨訪1 701例首發(fā)SZ患者使用抗精神病藥治療2～7周后的體質量變化。使用TaqMan基因分型技術檢測RABEp1基因rs1058398和rs1065482位點多態(tài)性，COX比例風險模型分析RABEp1基因變異與SZ患者藥物治療所致體質量增加之間的關系。結果使用阿立哌唑治療的SZ患者中，rs1058398位點AG+GG基因攜帶者相比AA基因攜帶者體質量增加的風險顯著升高；調整年齡、性別后，風險比(HR)為1.842(95%CI：1.066～3.184，p=0.029)；使用氯氮平患者中，rs1058398位點GG基因攜帶者相比AA+AG基因攜帶者體質量增加的風險顯著降低，調整后HR為0.135(95%CI：0.018～0.992，p=0.049)；使用奧氮平患者中，rs1058398位點相加模型與體質量增加相關聯(lián)，調整后HR為1.740(95%CI：1.031～2.936，p=0.038)。此外，使用奧氮平患者中，rs1058398位點GG基因攜帶者相比AA+AG基因攜帶者體質量增加的風險顯著升高，HR為3.534(95%CI：1.406～8.883，p=0.007)。使用阿立哌唑患者中，rs1065482位點CT+TT基因攜帶者相比CC基因攜帶者體質量增加的風險顯著升高，HR為1.786(95%CI：1.034～3.083，p=0.037)。結論RABEp1基因rs1058398和rs1065482位點與抗精神病藥所致體質量增加的發(fā)生風險顯著關聯(lián)；RABEp1基因多態(tài)性與阿立哌唑、奧氮平、氯氮平所致體質量增加有關。

精神分裂癥； RABEp1基因； 抗精神病藥； 體質量

精神分裂癥(SZ)患者發(fā)生超重和肥胖的概率高于正常健康人群，抗精神病藥治療是導致體質量增加的重要原因之一[1]。抗精神病藥可破壞人體能量平衡，導致代謝紊亂，致使患者體質量增加或肥胖。SZ患者的超重或肥胖可增加罹患糖尿病和心血管疾病的風險?？咕癫∷幣cSZ患者體質量增加及代謝紊亂的關系值得關注與研究[2]。

藥物遺傳學認為，抗精神病藥所致體質量變化存在內源性差異，即個體間在遺傳易感性方面存在差異。藥物反應的個體差異主要受遺傳因素的影響。全基因組關聯(lián)研究(genome-wide association study，GWAS)是發(fā)現(xiàn)復雜疾病易感基因的重要途徑之一。SZ是一種復雜的多基因遺傳性疾病，其遺傳度為80%[3]。目前，GWAS研究已發(fā)現(xiàn)超過100個與SZ相關的遺傳基因位點，其中，部分GWAS研究發(fā)現(xiàn)的遺傳基因位點在不同種族、不同地區(qū)人群中得到重復驗證[4]。Liu等[5]研究發(fā)現(xiàn)，RABEp1基因rs1058398和 rs1065482是miRNA結合位點，rs1058398和rs1065482位點的多態(tài)性可能與SZ的發(fā)病存在關聯(lián)。RABEp1又稱rabaptin-5，是參與胞內囊泡循環(huán)的重要效應分子和連接分子，它在細胞內吞、囊泡的形態(tài)調節(jié)和囊泡轉運效率方面起調控作用，而內吞通路是聚合多種蛋白質參與各種神經(jīng)障礙性疾病的一個關鍵點，包括阿爾茨海默癥[6]。RABEp1基因參與疾病過程的具體機制還有待深入地研究。本研究通過臨床隨訪研究，對SZ患者藥物治療后體質量的變化進行臨床觀察，并探討抗精神病藥所致體質量變化與RABEp1基因多態(tài)性的關系，為臨床合理選用抗精神病藥、減少體質量增加的發(fā)生提供理論依據(jù)。

1 對象和方法

1.1 對象

為2010年1月至2013年7月在江蘇省淮安市第三人民醫(yī)院首診住院的精神分裂癥患者。納入標準：符合《疾病和有關健康問題的國際統(tǒng)計分類》第10版(ICD-10)精神分裂癥診斷標準；住院前未接受抗精神病藥治療。排除標準：腦器質性和軀體疾病所致精神障礙、精神活性物質所致精神障礙。病前無肥胖、糖尿病、高血壓及內分泌疾病史,無相關遺傳病史。

對住院7 d以上的1 900例精神分裂癥患者的體質量變化進行隨訪觀察，納入觀察期在2～7周內的調查對象1 771例。進一步排除觀察期2周后體質量變化記錄異常(體質量變化超過20%)者70例，最終納入分析對象1 701例。本研究獲得所有患者及家屬知情同意。

1.2 方法

1.2.1 研究流程 采用前瞻性隨訪研究，收集符合入組條件的研究對象一般人口學資料，包括年齡、性別、臨床診斷、用藥情況等。對首次入院的患者進行基線體質量的測量，在接受抗精神病藥治療2周后進行隨訪測量。測量前調查員經(jīng)過統(tǒng)一、認真地培訓，嚴格遵循操作指南完成。測量時保持環(huán)境安靜、寬敞、地面水平；體質量計調零；被測者脫去鞋、帽子及外套，取出口袋攜帶的物品；平靜直立于體質量計盤中央；待體質量秤讀數(shù)穩(wěn)定后，調查員記錄讀數(shù)，測量期間被測者身體保持直立狀態(tài)。重復測量2次，精確度為0.5 kg，并隨機抽取5%的個體進行重復測量，要求符合率達到100%。

1.2.2 治療后體質量變化分組 隨訪期間根據(jù)患者藥物治療前后體質量變化差值的2.5%為切點，將體質量變化分為3組：體質量正常組(正常組，體質量變化±2.5%)；體質量降低組(降低組，體質量降低2.6%～20%)；體質量增加組(增加組，體質量增加2.6%～20%)。

1.2.3 SNp位點的選擇 本研究在查閱國內外相關研究文獻的基礎上，結合生物信息學分析功能預測網(wǎng)站 (http://www.snpinfo.niehs.nih.gov/cgi-bin/snpinfo/snpfunc.cgi; http://www.microma.org/microma/home.do)，在GWAS研究基礎上，進一步篩選重復驗證可能與SZ相關聯(lián)的遺傳位點進行研究，最終選擇RABEp1基因rs1058398和rs1065482位點。

1.2.4 DNA的提取 采集SZ患者清晨空腹靜脈血5 ml，EDTA抗凝。在24 h內對血樣本進行4 000轉離心10 min，分離血漿于1.5 ml Ep管。剩余血樣本留存放置于-20 ℃凍存。DNA提取采用酚氯仿法。

1.2.5 基因分型 TaqMan探針法針對染色體上的不同SNp位點分別設計聚合酶鏈式反應(pCR)引物和TaqMan探針，進行實時熒光pCR擴增。pCR擴增在ABI 9700 pCR儀上完成，結果在ABI 7900熒光定量pCR儀上讀取，實驗結果通過分析軟件SDS 2.3獲得。

1.2.6 統(tǒng)計學方法 采用Epidata 3.0雙軌錄入數(shù)據(jù)。采用SpSS 15.0軟件包進行統(tǒng)計分析。服從正態(tài)分布的連續(xù)性變量采用均數(shù)±標準差，非正態(tài)分布的連續(xù)性變量采用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)表示。分類資料用構成比表示，采用χ2檢驗比較；正態(tài)分布資料組間比較分析采用方差分析或t檢驗，非正態(tài)分布組間比較采用非參數(shù)K-S檢驗。

COX比例風險模型分析不同基因型與抗精神病藥所致體質量變化的風險比(Hazard ratio，HR)。進一步對抗精神病藥以及單一聯(lián)合用藥進行分層分析，評價不同亞組中基因位點和SZ患者藥物治療后體質量變化之間的關系。雙側檢驗以p<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 分組及基本情況變化比較

1 701例患者中男822例，女879例；平均年齡34.33歲；體質量變化分組:正常組948例，降低組175例，增加組578例；平均住院時間中位數(shù)為14 d；正常組、降低組與增加組的平均年齡分別為35.03歲、34.56歲和33.13歲；各組比較，增加組年齡低于正常組(t=3.063，p=0.002)；單一用藥或聯(lián)合用藥及不同種類的藥物治療的患者體質量變化差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。見表1。

2.2 RABEp1基因變異與體質量變化的關聯(lián)分析

COX回歸分析顯示，在調整年齡、性別后，RABEp1基因的rs1058398和rs1065482位點變異與體質量正常、體質量降低以及體質量增加的發(fā)生風險均無統(tǒng)計學關聯(lián)(p>0.05)。見表2。

表1 各組基本情況比較(例數(shù)

表2 RABEp1基因多態(tài)性與體質量變化發(fā)生風險的關聯(lián)分析

注：WT(野生型),HT(雜合型),MT(突變型);a:調整年齡和性別

2.3 RABEp1基因變異與體質量變化發(fā)生風險的分層分析

本研究根據(jù)抗精神病藥治療、單一、聯(lián)合用藥分組變量對研究對象分層，并調整協(xié)變量(年齡和性別)。結果顯示，使用阿立哌唑治療患者中，rs1058398位點AG+GG基因攜帶者相比AA基因攜帶者體質量增加的風險顯著升高[HR為1.842(95%CI：1.066～3.184，p=0.029)]；使用氯氮平治療患者中，rs1058398位點GG基因攜帶者相比AA+AG基因攜帶者體質量增加的風險顯著降低[HR為0.135(95%CI：0.018～0.992，p=0.049)]；在使用奧氮平治療患者中，rs1058398位點相加模型與體質量增加相關聯(lián)[HR為1.740(95%CI：1.031～2.936，p=0.038)]。 此外，rs1058398位點GG基因攜帶者相比AA+AG基因攜帶者在使用奧氮平治療患者中體質量增加的風險升高[HR為3.534(95%CI：1.406～8.883，p=0.007)]。rs1065482位點CT+TT基因攜帶者相比CC基因攜帶者在使用阿立哌唑治療患者中體質量增加的風險升高[HR為1.786(95%CI：1.034～3.083，p=0.037)]。在利培酮、喹硫平以及奮乃靜治療患者中，未發(fā)現(xiàn)rs1058398和rs1065482不同基因分型(相加模型、顯性模型和隱性模型)與體質量增加或降低的發(fā)生風險存在統(tǒng)計學關聯(lián)(p>0.05)。見表3。

在單一用藥組以及聯(lián)合用藥分組中，均未見rs1058398和rs1065482不同基因分型(相加模型、顯性模型和隱性模型)與體質量增加或降低的發(fā)生風險存在統(tǒng)計學關聯(lián)(p均>0.05)。見表4。

表3 不同抗精神病藥分層分析rs1058398及rs1065482位點與體質量變化的發(fā)生風險

注：WT(野生型)，HT(雜合型)，MT(突變型)；a：調整年齡和性別；*p<0.05,**p<0.01

表4 藥物分層分析兩位點與體質量變化的發(fā)生風險

注：WT(野生型)，HT(雜合型)，MT(突變型)；a：調整年齡和性別

3 討論

抗精神病藥可有效改善SZ患者癥狀，然而藥物使用會出現(xiàn)體質量增加或肥胖等不良反應。本研究以首發(fā)SZ患者為對象，經(jīng)過2～7周的抗精神病藥治療后，55.7%的患者體質量變化正常，34.0%的患者體質量增高，10.3%的患者體質量降低，體質量增高的比率高于體質量降低的比率。

不同個體接受同樣的抗精神病藥治療后體質量的變化情況不同，遺傳因素是個體差異非常重要的一個組成部分。越來越多的基因被發(fā)現(xiàn)與抗精神病藥引起的體質量增加有關[7]。抗精神病藥治療所致體質量增加是基于其可作用于體質量調控通路靶蛋白的假說，該假說認為外周瘦素通路和中樞單胺類如多巴胺、組織胺(H)、5-羥色胺(5-HT)神經(jīng)遞質通路(包括這類遞質及其代謝產(chǎn)物、遞質前體及轉運體、有關代謝酶活性等多個環(huán)節(jié))等的基因變異可能是SZ患者體質量變化的基礎[4]。

RABEp1，又稱為Rabaptin-5或Neurocrescin，屬于蛋白編碼基因，位于染色體17p13.2，RABEp1蛋白主要分布在胞漿、細胞膜和內體上[8]，作為Rab的功能蛋白，可通過連接γ-adaptin、RAB4A及RAB5A蛋白，促進膜融合而介導囊泡轉運、早期內體融合及膜內吞作用[9]。當機體細胞受體外內環(huán)境因素刺激，調控Rabaptin-5表達水平的機制失去平衡，則可導致疾病的發(fā)生與發(fā)展。GWAS研究[5]報道，RABEp1基因rs1058398和rs1065482位點的多態(tài)性可能與SZ有關聯(lián)。提示其可能影響腦組織的功能，尤其是下丘腦，下丘腦在影響食欲和食物攝入中扮演潛在角色，從而推測RABEp1基因可能參與體質量增加發(fā)生的機制。因此，進一步研究RABEp1基因與抗精神病藥所導致的體質量變化有重要的意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，RABEp1基因多態(tài)性與阿立哌唑、氯氮平以及奧氮平所致SZ患者體質量增加的發(fā)生風險存在關聯(lián)。阿立哌唑、氯氮平以及奧氮平均屬于非典型抗精神病藥，能夠有效穩(wěn)定人體的多巴胺D2受體和5-HT受體系統(tǒng)，其主要通過激發(fā)這兩個系統(tǒng)的活性，對SZ患者有較好的治療效果[10]。D2受體是抗精神病藥的重要作用靶點，研究[11]顯示D2受體與基因功能位點聯(lián)鎖不平衡，D2受體通過提高其在紋狀體內的表達水平以及食物攝入和能量代謝調控的增加，從而增加肥胖的易感性。5-HT受體中，5-HT2C受體基因是目前認為與SZ患者體質量相關的高危險因素[12]。

抗精神病藥治療所導致的體質量增加及代謝障礙等不良反應，是影響患者藥物治療依從性和生活質量的重要因素，是精神病治療亟待解決的重要問題之一。本研究根據(jù)藥物治療前后患者體質量變化進行分組，體質量分組反映的是個體自身前后對比以及體質量變化的幅度和傾向，研究結果較客觀。但本研究也存在不足，沒有進行藥物劑量上的比較，隨訪觀察時間短，不足之處有待于進一步探討。

綜上所述，本研究隨訪觀察了SZ患者入院后藥物治療2～7周后RABEp1基因變異與藥物治療所致體質量增加的關聯(lián)，為探索藥源性體質量增加的發(fā)生機制提供了一定的依據(jù)。

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AssociationanalysesbetweenRABEp1polymorphismandweightchangeamongpatientswithantipsychoticdrugstreatment

ZHANGTing,ZHANGXu,WANGXin,HAOSu-yi,YAOYing-shui,SHENChong.

SchoolofpublicHealth,WannanMedicalCollege,Wuhu241001,China

ObjectiveTo explore the association between RABEp1 gene polymorphism and body weight changes among schizophrenic (SZ) patients with antipsychotic drugs treatment.MethodTo investigate and follow-up of 1701 first-episode patients with SZ who developed weight changes for 2 to 7 weeks after antipsychotic treatment.rs1058398 and rs1065482 of RABEp1 gene polymorphism was detected by TaqMan genotyping technology.COX proportional hazard model was used to analyze the hazard ratio of RABEp1 gene about weight change induced by antipsychotic treatment.ResultsAfter adjustment for age and gender,patients with aripiprazole treatment and carrying AG or GG genotypes of rs1058398 had an increased risk of weight gain,and adjusted HR was 1.842(95%CI：1.066-3.184,p=0.029);patients with clozapine treatment and carrying GG genotype of rs1058398 had a decreased risk of weight gain,and adjusted HR was 0.135(95%CI：0.018-0.992,p=0.049);patients with olanzapine treatment,carrying the additive model of rs1058398 was significantly associated with the risk of weight gain,and adjusted HR was 1.740 (95%CI：1.031-2.936,p=0.038).In addition,patients carrying GG genotype of rs1058398 had an increased risk of weight gain,HR was 3.534 (95%CI：1.406-8.883,p=0.007).patients treated with aripiprazole and carrying CT or TT genotypes of rs1065482 had an increased risk of weight gain,and HR was 1.786 (95%CI：1.034-3.083,p=0.037).Conclusionrs1058398 and rs1065482 of RABEp1 are associated with the risk of weight gain among SZ patients due to antipsychotic treatment.Significant association of RABEp1 polymorphism with weight gain is observed in SZ patients with aripiprazole,clozapine and olanzapine treatment.

schizophrenia; RABEp1 gene; antipsychotic drugs; weight gain

R749.3

A

1005-3220(2017)06-0377-05

江蘇省淮安市科技局社會發(fā)展項目(HAS2011023)；安徽省教育廳高校省級自然科學研究項目資助課題(KJ2012A272)

241001 安徽蕪湖，皖南醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院(張婷,姚應水)；南京醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院(張婷,沈沖)；江蘇省淮安市第三人民醫(yī)院(張旭，汪昕，郝蘇怡)

沈沖，E-Mail:sc100@126.com

2017-03-29

2017-07-30)