李敏，郭毅飛，李雪鋒，鄭雪娜

(1.十堰市太和醫(yī)院/湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌風(fēng)濕病科，湖北 十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院血液內(nèi)科，湖北 十堰 442000)

Th17/Treg細(xì)胞平衡在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)性肺間質(zhì)疾病發(fā)病機(jī)制中的作用

李敏1，郭毅飛1，李雪鋒1，鄭雪娜2

(1.十堰市太和醫(yī)院/湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌風(fēng)濕病科，湖北 十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院血液內(nèi)科，湖北 十堰 442000)

目的探討輔助性T細(xì)胞17(Th17細(xì)胞)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)平衡在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)及其相關(guān)性肺間質(zhì)疾病(ILD)發(fā)病機(jī)制中可能的作用。方法納入2015年10月至2016年10月在十堰市太和醫(yī)院收治的42例RA患者(RA組)，38例合并肺間質(zhì)疾病的RA患者(RA-ILD組)和40例健康者(對(duì)照組)作為研究對(duì)象；監(jiān)測(cè)并記錄所有患者RA 28關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)評(píng)分(DAS28)、類風(fēng)濕因子(RF)、血沉(ESR)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)及肺功能等臨床資料。采用流式細(xì)胞儀技術(shù)測(cè)定所有受試者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMc)中Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的比例，熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤核受體(ROR-γt)和叉頭螺旋翼狀轉(zhuǎn)錄因子3(Foxp3)mRNA表達(dá)水平，并分析Th17/Treg細(xì)胞平衡與肺間質(zhì)疾病的關(guān)系。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t檢驗(yàn)和方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson直線相關(guān)分析和Logistic回歸分析。結(jié)果①在外周血中，RA-ILD組Th17細(xì)胞比例為(3.11±1.32)%，同RA組[(2.34±0.72)%]及對(duì)照組[(1.12±0.33)%]比較均有明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；RA-ILD組外周血Treg細(xì)胞比例為(3.53±0.84)%，RA組為(3.73±0.64)%，均較對(duì)照組[(5.83±1.55)%]明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但RA-ILD組與RA組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；RA-ILD組Th17/Treg細(xì)胞比例為(0.88±0.31)，較RA組(0.54±0.16)和對(duì)照組(0.38±0.11)顯著增高，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；② RA-ILD組患者的ROR-γt mRNA表達(dá)水平為(13.12±3.73)，較RA組的(8.31±3.72)及對(duì)照組(4.12±1.22)顯著升高，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而RA-ILD組患者的Foxp3 mRNA表達(dá)水平為(1.24±0.55)，明顯低于RA組的(2.53±1.14)和對(duì)照組的(3.74±1.25)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；③Pearson直線相關(guān)分析顯示，RA-ILD組患者的Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)(r=-0.342，P=0.013)，ROR-γt mRNA與Foxp3 mRNA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.413，P＜0.01)；④ Logistic回歸分析顯示，Th17細(xì)胞、Th17/Treg細(xì)胞比值、DAS28評(píng)分及病程對(duì)RA-ILD患者一氧化碳彌散量(DLCO)有顯著影響(P＜0.05)。結(jié)論RA患者體內(nèi)Th17細(xì)胞明顯增多且伴隨Treg細(xì)胞減少，Th17/Treg細(xì)胞比例失衡可能參與RA-ILD的發(fā)生及發(fā)展，并導(dǎo)致患者肺功能的惡化。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；肺間質(zhì)病變；輔助性T細(xì)胞17；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種病因未明的，以對(duì)稱性、侵襲性小關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主要特征的慢性、炎癥性結(jié)締組織病，患者除關(guān)節(jié)表現(xiàn)外，常伴有臟器損害，可引起較高病死率。有研究報(bào)道肺間質(zhì)病變(interstitial lung disease，ILD)是RA患者最常見(jiàn)的關(guān)節(jié)外并發(fā)癥，也是判斷預(yù)后的重要因素及引起患者遠(yuǎn)期死亡的主要原因[1]。輔助性T細(xì)胞17(T help cell，Th17)是CD4+效應(yīng)性T細(xì)胞亞群的重要組成成分，因其主要分泌IL-17而命名，它同時(shí)可分泌IL-6、IL-22等炎癥細(xì)胞因子，介導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)、自身免疫及移植排斥反應(yīng)，維甲酸相關(guān)孤核受體(retinoid-related orphan receptor-γt，ROR-γt)是初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化非常重要的核轉(zhuǎn)錄因子[2]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T regulation cell，Treg)細(xì)胞也歸屬于CD4+效應(yīng)性T細(xì)胞亞群，除高表達(dá)CD4外，細(xì)胞表面持續(xù)表達(dá)CD25分子，胞內(nèi)高特異性表達(dá)叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子P3(forkhead box P3，F(xiàn)oxp3)，Treg也在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。Th17/Treg細(xì)胞的平衡越來(lái)越受到研究界的關(guān)注和認(rèn)可，這種平衡對(duì)維持正常免疫應(yīng)答、防止自身免疫性疾病具有重要意義[3]。國(guó)內(nèi)外已有較多研究表明RA活動(dòng)期患者體內(nèi)常伴隨Th17細(xì)胞及Treg細(xì)胞數(shù)量及功能的改變，并與RA患者關(guān)節(jié)損害密切相關(guān)，但關(guān)于Th17/Treg細(xì)胞在RA-ILD中的作用罕有報(bào)道[4]。本研究通過(guò)檢測(cè)RA-ILD患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的百分率及Th17/Treg細(xì)胞比值的變化，同時(shí)測(cè)定患者ROR-γt和Foxp3 mRNA表達(dá)水平，分析其與疾病活動(dòng)度及肺功能的關(guān)系，探討Th17/Treg細(xì)胞在RA-ILD發(fā)病過(guò)程中可能的病理生理學(xué)機(jī)制作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年10月至2016年10月在十堰市太和醫(yī)院內(nèi)分泌風(fēng)濕病科門診及住院的RA患者共80例，參照美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)2010年制定的RA分類標(biāo)準(zhǔn)納入[5]。其中RA組42例，男性10例，女性32例；年齡22～58歲，平均(43.1±13.7)歲，平均病程(5.1±2.4)年。RA-ILD組38例，男性10例，女性28例；年齡20～57歲，平均(44.2±14.5)歲，平均病程(6.8±2.5)年。RA-ILD組患者均經(jīng)肺部高分辨率CT(HRCT)確診合并肺間質(zhì)疾病，具體參照2002年美國(guó)胸科協(xié)會(huì)/歐洲呼吸協(xié)會(huì)(ATS/ERS)達(dá)成共識(shí)的RA并發(fā)肺間質(zhì)病變的分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行。所納入病例均排除吸煙、高塵作業(yè)職業(yè)史、嚴(yán)重肺動(dòng)脈高壓、藥物因素(使用金制劑及甲氨蝶呤者)、肥胖、合并嚴(yán)重肺部感染、腫瘤及嚴(yán)重心臟疾病患者。選擇同期在十堰市太和醫(yī)院健康體檢中心經(jīng)篩查的健康體檢者共40例，其中男性10例，女性30例，年齡21～57歲，平均(41.8±15.2)歲。對(duì)照組均排除慢性心臟病、腎功能不全、慢性支氣管炎、吸煙以及合并結(jié)締組織病者，且血常規(guī)、血糖、肝腎功能、心電圖、心臟彩超均正常。

1.2 臨床及實(shí)驗(yàn)室檢查及RA患者肺功能的測(cè)定 清晨采集肘靜脈血，通過(guò)免疫比濁法測(cè)定類風(fēng)濕因子(RF)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)濃度；血沉(ESR)采用魏氏法測(cè)定。記錄RA患者關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)，根據(jù)RA患者28關(guān)節(jié)活動(dòng)評(píng)分(DAS28)評(píng)分計(jì)算公式算出RA患者的DAS28評(píng)分值，評(píng)估疾病活動(dòng)度。采用比利時(shí)Medisoft公司提供的肺功能儀評(píng)估，檢測(cè)指標(biāo)包括肺活量占預(yù)計(jì)值百分比(VC%)、用力肺活量占預(yù)計(jì)值百分比(FVC%)及一氧化碳彌散量(DLCO)。所有研究對(duì)象肺功能指標(biāo)均由同1名經(jīng)驗(yàn)豐富的呼吸內(nèi)科醫(yī)師進(jìn)行檢測(cè)，該醫(yī)師對(duì)于所研究對(duì)象的臨床資料不知情。

1.3 Th17和Treg細(xì)胞的流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè) 空腹抽取外周血3 mL，采用肝素鈉抗凝。經(jīng)Ficoll密度梯度離心法分離提取PBMCs，以磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗2次，用含10%胎牛血清的RPM1640培養(yǎng)基重懸單個(gè)核細(xì)胞稀釋，調(diào)整細(xì)胞密度為2×106個(gè)/mL左右。將樣本的PBMCs分成兩管，分別檢測(cè)Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。其中一管PBMc加入PMA2.5 μL(終濃度50 ng/mL)和離子霉素2 μL(終濃度1 μg/mL)，放置于5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)孵育3 h。孵育完成后，加入BFA 2 μL(終濃度10 μg/mL)進(jìn)行阻斷。2 h后收集細(xì)胞，各加入5 μL IFITC-CD3、FITC-CD4和藻紅蛋白Cy5-CD8單克隆熒光抗體，4℃避光孵育30 min。加入PE標(biāo)記的IL-17A單克隆抗體(FITC anti-IL-17A)，4℃避光20 min，PBS洗滌后，加入固定液100 μL，重懸細(xì)胞，規(guī)定時(shí)間內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，CD3+CD4+IL-17A+表示為Th17細(xì)胞。取另一管樣本100 μ L，PBS液洗滌后加入CD4-FITC 5 μL，CD25-藻紅蛋白5 μL，CD127-多甲藻葉綠素蛋白-Cy5 5 μL。避光孵育30 min，PBS洗滌后加入固定液100 μL，重懸細(xì)胞，規(guī)定時(shí)間內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，每份標(biāo)本測(cè)定10 000個(gè)細(xì)胞，采用CD4+CD25+CD127low細(xì)胞表示Treg細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)所用流式細(xì)胞儀為美國(guó)BD公司的Calibur型；抗人CD4單克隆抗體(APC anti-CD4)、抗人CD25單克隆抗體(APC anti-CD25)、抗人CD3單克隆抗體(APC anti-CD3)、抗人IL-17A單克隆抗體(FITC anti-IL-17A)、抗人CD127單克隆抗體(PE anti-CD127)均購(gòu)自美國(guó)Biolegend公司。用Flowjo 7.6軟件系統(tǒng)分析結(jié)果。

1.4 ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA的檢測(cè) 采用RT-PCR法檢測(cè)ROR-γt mRNA和Foxp3mRNA在PBMCs中的表達(dá)。空腹抽取靜脈血3 mL置于EDTA抗凝管中，離心分離外周血，分離提取PBMCs，以PBS液洗滌后，取2×106細(xì)胞懸浮液置于1 mL Trizol的離心管中，采用Trizol法取外周血提取RNA后，采用吸光度吸光度(A)260/A280：為1.8～2.0用，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以β-肌動(dòng)蛋白基因β-actin作為內(nèi)參照，相關(guān)基因引物由Primer Premier 5.0程序設(shè)計(jì)，如表1所示，引物的合成交由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成。反應(yīng)條件為：95℃10 s，95℃15 s，60℃1 min，共40個(gè)循環(huán)。

表1 ROR-γt、Foxp3和內(nèi)參β肌動(dòng)蛋白基因引物序列

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，兩組間均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，三組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析。變量的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析及Logistic回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 RA-ILD組與RA組患者的臨床資料比較RA-ILD組與RA組患者的年齡、RF、hs-CRP及ESR水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；RA-ILD組患者平均病程及疾病活動(dòng)指標(biāo)DAS28較RA組明顯增高，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；RA-ILD組患者肺功能指標(biāo)VC%，F(xiàn)VC%和DLCO%均較RA組顯著下降，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

2.2 三組受檢者外周血Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞/Th17/Treg細(xì)胞比例及ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA在PBMCs中的表達(dá)比較 RA-ILD組患者Th17細(xì)胞比例明顯增高，與RA組及對(duì)照組比較差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。RA-ILD組和RA組患者外周血Treg細(xì)胞比例均較對(duì)照組顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但RA-ILD組與RA組比較，Treg細(xì)胞比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。RA-ILD組Th17/Treg細(xì)胞比例較RA組和對(duì)照組明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與RA組及對(duì)照組比較，RA-ILD組患者ROR-γt mRNA表達(dá)水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。RA-ILD組患者Foxp3 mRNA表達(dá)水平較RA組與對(duì)照組均明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

2.3 RA-ILD患者外周血Th17、Treg細(xì)胞、ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA水平的相關(guān)性 對(duì)RA-ILD患者外周血Th17細(xì)胞比例、Treg細(xì)胞比例、ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA水平進(jìn)行Pearson直線相關(guān)分析，結(jié)果表明Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)(r=-0.342，P=0.013)，ROR-γt mRNA 與Foxp3 mRNA水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.413，P＜0.01)。

2.4 RA-ILD患者肺功能與相應(yīng)指標(biāo)Logistic回歸分析 分別以RA-ILD患者DLCO%作為模型因變量，以年齡、病程、ESR、hs-CRP、RF、Th17、Treg細(xì)胞比例、Th17/Treg細(xì)胞比值、ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA水平為多因素的Logistic回歸分析。結(jié)果表明，Th17細(xì)胞、Th17/Treg細(xì)胞比值、DAS28評(píng)分及病程是影響RA-ILD患者肺功能DLCO%的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表4。

表2 RA-ILD組與RA組患者的臨床資料比較(-x±s)

表3 三組受檢者外周血Th17、Treg細(xì)胞、Th17/Treg細(xì)胞比例、ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA比較(x-±s)

表4 影響RA-ILD患者DLCO的多因素Logsistic回歸分析結(jié)果

3 討 論

肺組織具有氣體交換、免疫調(diào)節(jié)和內(nèi)分泌功能，含豐富的血管、上皮細(xì)胞和膠原成分，常成為RA、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和原發(fā)性干燥綜合征(pSS)及其他許多結(jié)締組織疾病累及的靶器官[6]。ILD即發(fā)生在肺間質(zhì)(包括支氣管、血管周圍、小葉間隔及肺泡間隔)的彌漫性病變，RA-ILD早期臨床癥狀并不典型，多數(shù)患者晚期治療效果較差，常容易合并肺部感染，并導(dǎo)致呼吸衰竭等并發(fā)癥。RA-ILD發(fā)病機(jī)制尚未明確，多數(shù)研究認(rèn)為ILD是免疫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)等因素通過(guò)多種生物學(xué)途徑介導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞異常分泌及增殖，引起肺組織免疫損傷的結(jié)果，其最終的病理結(jié)局常表現(xiàn)為不可逆性肺間質(zhì)纖維化，細(xì)胞免疫可能在RA-ILD發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用，但相關(guān)研究卻方興未艾[7]。

人類CD4+的T淋巴細(xì)胞被劃分成Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞兩個(gè)亞群，各有其特定的細(xì)胞因子分泌，Th1/Th2免疫失衡在結(jié)締組織病相關(guān)性ILD中的作用已得到了廣泛研究。目前研究普遍認(rèn)為Th1型細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答在結(jié)締組織病相關(guān)性ILD炎癥起始和激化階段起關(guān)鍵作用作用，而Th2型細(xì)胞主要介導(dǎo)體液免疫，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、膠原沉積和慢性纖維化，但Th1/Th2免疫失衡并不能解釋RA-ILD的發(fā)病機(jī)制的全貌[8]。RA患者常存在Th1細(xì)胞功能和數(shù)量的改變，國(guó)外的研究發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞功能缺陷與RA的發(fā)生及關(guān)節(jié)滑膜炎癥損害的嚴(yán)重程度關(guān)系密切[9]。Th17細(xì)胞作為CD4+T細(xì)胞的一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的亞群，因其在核轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt的調(diào)控下，特異的高分泌炎癥細(xì)胞因子，故它在RA發(fā)病中的作用要高于傳統(tǒng)的Th1細(xì)胞，體內(nèi)研究也證實(shí)Th1細(xì)胞在幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病、干燥綜合征等多種結(jié)締組織疾病發(fā)病中的重要作用[2]。Treg細(xì)胞可控制前炎性CD4+T細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)增殖，增加TGF-β、IL-4、IL-10等細(xì)胞因子分泌，對(duì)自身反應(yīng)T細(xì)胞活化和增殖起負(fù)調(diào)控作用，Treg細(xì)胞數(shù)量或功能的改變對(duì)RA的發(fā)生及發(fā)展起關(guān)鍵作用[10]。Th17與Treg細(xì)胞在TGF-β、IL-6等多種細(xì)胞因子的誘導(dǎo)作用下相互遏制及轉(zhuǎn)化，共同維持免疫平衡，Th17/Treg細(xì)胞比例失衡參與肺ILD的發(fā)生[11]。

本研究結(jié)果顯示納入的RA-ILD組患者炎癥活動(dòng)指標(biāo)ESR，hs-CRP和RF水平與RA組患者類似，但患者平均病程較RA組長(zhǎng)，DAS28積分較RA組患者增高，提示長(zhǎng)病程和疾病活動(dòng)參與RA患者ILD的發(fā)生。本研究提示RA-ILD組患者Th17細(xì)胞比例及其關(guān)鍵性核轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt mRNA水平較RA組和健康對(duì)照組明顯升高，而Treg細(xì)胞標(biāo)志性核蛋白成分Foxp3 mRNA水平較RA組和健康對(duì)照組顯著降低，RA患者體內(nèi)Th17與Treg水平的變化與姚壽林等[12]的研究結(jié)果基本一致。此外，本研究提示RA-ILD組患者Th17/Treg細(xì)胞比例較RA組和對(duì)照組顯著增高，相關(guān)性研究表明RA-ILD組中Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)，ROR-γt mRNA與Foxp3 mRNA呈負(fù)相關(guān)，故推測(cè)RA-ILD患者Treg細(xì)胞數(shù)量和功能的降低無(wú)法抑制Th17等效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的增殖及分化，促進(jìn)患者炎癥活動(dòng)及ILD的發(fā)生。但本研究中RA-ILD組和RA組患者兩組間外周血Treg細(xì)胞比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，此結(jié)果提示Treg細(xì)胞亞群失衡可能貫穿RA-ILD發(fā)病的全過(guò)程，本研究作為一個(gè)橫斷面的現(xiàn)況研究，尚不能完全反應(yīng)Treg細(xì)胞比例及功能在RA-ILD發(fā)病機(jī)制中的所有作用，后續(xù)可能需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。

目前并無(wú)診斷RA-ILD特異性的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，早期主要依賴于高分辨率螺旋CT(HRCT)進(jìn)行確診，肺功能檢查也是臨床診斷和病情評(píng)估的重要檢測(cè)手段。ILD患者肺功能主要表現(xiàn)肺泡彌散功能下降、限制性通氣障礙，疾病早期首先表現(xiàn)為VC%和FVC%降低，后期可合并、進(jìn)展為阻塞性通氣障礙，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)低氧血癥，誘發(fā)呼吸衰竭，甚至危及患者生命。宋良月等[13]研究表明，高齡、長(zhǎng)病程、關(guān)節(jié)炎性明顯的RA患者易合并ILD，而且纖維蛋白原、C-胱抑素肽、血清白蛋白、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、α1-球蛋白、α2-球蛋白等臨床指標(biāo)的異?？赡芘cRA患者ILD發(fā)生發(fā)展有關(guān)，可作為RA伴發(fā)ILD的預(yù)測(cè)因素。本研究結(jié)果提示RA-ILD組患者VC%、FVC%和DLCO%均較RA組明顯下降，DLCO%的下降更為明顯。DLCO占預(yù)計(jì)值%是評(píng)價(jià)ILD敏感的指標(biāo)，能準(zhǔn)確地反映ILD患者肺彌散功能的變化，常作為評(píng)估患者肺功能的良好指標(biāo)[14]。本研究通過(guò)以DLCO%作為模型因變量的多元逐步回歸分析提示，Th17細(xì)胞比例、Th17/Treg細(xì)胞比值、DAS28評(píng)分及病程均是影響RA-ILD患者肺功能惡化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示除吸煙、職業(yè)和藥物等常見(jiàn)的危險(xiǎn)因素外，患者病程、疾病活動(dòng)度、Th17細(xì)胞及Th17/Treg細(xì)胞比例的變化均在RA-ILD發(fā)生、發(fā)展中起促進(jìn)作用。Logstic回歸模型中疾病活動(dòng)指數(shù)DAS28是影響DLCO%的危險(xiǎn)因素，但常見(jiàn)臨床炎癥指標(biāo)如RSR、hs-CRP和RF等并未最終進(jìn)入回歸方程，分析原因可能與納入病例多數(shù)處于活動(dòng)期，單個(gè)炎癥指標(biāo)并不能完全反映出RA機(jī)體長(zhǎng)期、慢性的炎癥狀態(tài)對(duì)肺功能影響的全貌[15]。

總之，RA-ILD的發(fā)生是一個(gè)原因復(fù)雜、多因素共同作用的結(jié)果，Th17細(xì)胞分化增多，Treg細(xì)胞功能缺陷以及Th17細(xì)胞/Treg細(xì)胞亞群比例失衡均可能參與RA-ILD的發(fā)病，并且與患者肺功能的惡化關(guān)系密切，后續(xù)需通過(guò)前瞻性的更大樣本的臨床研究提供更具說(shuō)服力的判斷。通過(guò)深入了解Th17/Treg細(xì)胞平衡在RA-ILD中的作用及作用機(jī)制可能對(duì)RA-ILD的早期發(fā)現(xiàn)及治療具有重要意義。

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Role of Th17/Treg cell balance in the pathogenesis of rheumatoid arthritis-associated interstitial lung disease.

LI Min1,GUO Yi-fei1,LI Xue-feng1,ZHENG Xue-na2.1.Department of Endocrinology and Rheumatology,Taihe Hospital of Shiyan City,the Affiliated Hospital of Hubei Medical College,Shiyan 442000,Hubei,CHINA;2.Department of Hematology Renmin Hospital Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,Hubei,CHINA

ObjectiveTo investigate the possible role of T help cell 17(Th17 cell)and T regulation cell(Treg cell)balance in the pathogenesis of rheumatoid arthritis(RA)and rheumatoid arthritis-associated interstitial lung disease(RA-ILD).MethodsFrom October 2015 to October 2016,42 patients with RA(RA group)and 38 patients with RA-ILD from Taihe Hospital of Shiyan City were enrolled,as well as 40 healthy controls(Control group).RA disease activity score in 28 joints(DAS28),rheumatoid factor(RF),blood Sedimentation(ESR),high sensitive-C reactive protein(hs-CRP),lung function and other clinical parameters were examined and recorded for patients with RA.Flow cytometry(FCM)was used for all subjects to analyze the ratio of Th17 cells and Treg cells in peripheral blood mononuclear cell(PBMc),Real time quantitative polymerasechain reaction(RT-PCR)was used to analyze the expression of forkhead-winged-helix family transcription factor p3(Foxp3)and retinoid-related orphan nuclearγt(ROR)-γt mRNA in PBMc,and the relationship about Th17/Treg cell balance between ILD was also analyzed.T-test and Chi-square test were used for inter-group comparison.Pearson's linear analysis and logistic regression were used for correlation analysis.Results① The ratio of Th17 cells in peripheral blood of RA-ILD group was(3.11±1.32)%,which was significantly increased compared with(2.34±0.72)%in the RA group and(1.12±0.33)%in the control group(both P＜0.05);the ratio of Treg cells in the RA group was(3.73±0.64)%,and in the RA-ILD group was(3.53±0.84)%,both significantly decreased compared with(5.83±1.55)%in the control group.However,there was no significant difference between the RA-ILD group and the RA group(P＞0.05).The proportion of Th17/Treg cells in the RA-ILD group was(0.88±0.31),which was significantly increased compared with(0.54±0.16)in the RA group and(0.38±0.11)in the control group(both P＜0.05).② The expression of ROR-γt mRNA in the RA-ILD group was(13.12±3.73),which was significantly increased compared with(8.31±3.72)in the RA group and(4.12±1.22)in the control group(both P＜0.01),along with a decrease of Foxp3 mRNA expression in RA-ILD group(1.24±0.55)compared with the RA group(2.53±1.14)and the control group(3.74±1.25)(both P＜0.05).③ Pearson correlation analysis indicated that Th17 cells was negatively correlated with Treg cells(r=-0.342,P=0.013),and ROR-γt mRNA was negatively correlated with Foxp3 in RA-ILD group(r=-0.413,P＜0.01).④According to logistic regression analysis,the risk factors of carbon monoxide diffusing capacity(DLCO)in RA-ILD patients were the level of Th17 cells,the ratio of Th17/Treg,DAS28 and disease duration(all P＜0.01).ConclusionTh17 cell is increased while Treg cell is decreased in RA-ILD patients.The change of Th17/Treg cells ratio are important for the pathogenesis of RA-ILD and could aggravate the damage of lung function.

Rheumatoid arthritis(RA);Interstitial lung disease;T help cell 17(Th17);T regulation cell(Treg)

R593.22

A

1003—6350（2017）22—3630—05

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.22.005

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（編號(hào)：81372998）

李雪鋒。E-mail：ymclixf@163.com；鄭雪娜。E-mail：zhengxuena1984@163.com

2017-05-22)

doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2017.22.006