應(yīng)倩倩 沈夢嬌 李蘊(yùn)言 吳菱 狄亞珍 王佳佩 傅詩薇

過敏性紫癜患兒尿液脂氧素A4、NF-κB的變化及其臨床意義

應(yīng)倩倩 沈夢嬌 李蘊(yùn)言 吳菱 狄亞珍 王佳佩 傅詩薇

目的探討脂氧素A4（LXA4）、NF-κB在過敏性紫癜（HSP）患兒尿液中的變化及在HSP發(fā)病機(jī)制中的作用。方法選取50例HSP患兒為病例組，其中紫癜性腎炎（HSPN）患兒20例；同期25例腹股溝疝術(shù)前患兒為對照組。留取晨尿，采用ELISA法檢測尿液LXA4、NF-κB水平，比較病例組急性期、恢復(fù)早期與對照組LXA4、NF-κB水平，并比較HSPN患兒與非HSPN患兒急性期LXA4、NF-κB水平，分析病例組急性期LXA4和NF-κB的相關(guān)性。同時收集各組臨床資料及病例組24h尿蛋白定量等實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，分析HSPN患兒急性期LXA4、NF-κB水平與24h尿蛋白定量的相關(guān)性。結(jié)果 病例組急性期、恢復(fù)早期尿液LXA4水平均顯著高于對照組（均P＜0.01），且急性期顯著低于恢復(fù)早期（P＜0.01）；病例組急性期、恢復(fù)早期尿液NF-κB水平亦均顯著高于對照組（均P＜0.05），且急性期顯著高于恢復(fù)早期（P＜0.01）。HSPN患兒急性期尿液LXA4水平顯著低于非HSPN患兒，NF-κB水平顯著高于非HSPN患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。病例組急性期尿液LXA4水平與NF-κB水平呈負(fù)相關(guān)（r=0.347，P＜0.05）。HSPN患兒急性期24h尿蛋白定量與LXA4水平呈負(fù)相關(guān)（r=0.562，P＜0.05），與NF-κB無相關(guān)性（r=0.370，P＞0.05）。 結(jié)論NF-κB可能參與HSP發(fā)病，并與病情嚴(yán)重程度相關(guān)，而LXA4可能為腎臟保護(hù)因子，且可能通過抑制NF-κB發(fā)揮抗炎作用。

過敏性紫癜 兒童 脂氧素A4NF-κB 24h尿蛋白

1 對象和方法

1.1 對象 選取2016年5至11月初次在寧波市婦女兒童醫(yī)院住院的HSP患兒50例為病例組，均符合2006年歐洲風(fēng)濕病防治委員會、歐洲兒童腎臟病防治委員會及美國風(fēng)濕協(xié)會共同制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，男29例，女21例；年齡 2.5～15（7.0±3.0）歲。其中 20 例為 HPSN，男 9例，女 11 例，年齡 2.5～13（6.8±2.8）歲，均符合 2009 年中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會腎臟病學(xué)組制定的《紫癜性腎炎診治循證指南(試行)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]?；純壕鶠槭状伟l(fā)病，1周內(nèi)未用過抗組胺藥物、腎上腺皮質(zhì)激素及免疫抑制劑治療，既往無過敏性疾病史，也無自身免疫性疾病史。選取同期寧波市婦女兒童醫(yī)院外科住院的腹股溝疝術(shù)前患兒25例為正常對照組，男14例，女11例；年齡3～11（6.4±2.0）歲。病例組與對照組患兒性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)和患兒監(jiān)護(hù)人知情同意。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集 病例組分別于急性期、恢復(fù)早期，對照組于體檢當(dāng)日留取晨尿8ml，以3 000r/min離心20min，分離上清液置-80℃冰箱凍存待檢。患兒起病2周內(nèi)為急性期，以非血小板減少性紫癜、關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)腫痛、腹痛或胃腸道出血為主要臨床表現(xiàn)，治療后，上述癥狀消失3d為恢復(fù)早期[12-13]。

1.2.2 尿液LXA4、NF-κB測定 采用ELISA法檢測各樣本LXA4、NF-κB水平，所有操作均按照試劑盒說明書嚴(yán)格執(zhí)行。比較病例組急性期、恢復(fù)早期與對照組LXA4、NF-κB水平，并比較HSPN患兒與非HSPN患兒急性期LXA4、NF-κB水平，分析病例組急性期LXA4和NF-κB的相關(guān)性。

1.2.3 收集及整理臨床資料 收集并整理病例組與對照組性別、年齡、現(xiàn)病史、既往史等臨床資料及病例組24h尿蛋白定量等實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果,分析HSPN患兒急性期LXA4、NF-κB水平與24h尿蛋白定量的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；兩變量間相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒尿液LXA4、NF-κB水平比較 病例組急性期、恢復(fù)早期尿液LXA4水平均顯著高于對照組（均P＜0.01），且急性期顯著低于恢復(fù)早期（P＜0.01）；病例組急性期、恢復(fù)早期尿液NF-κB水平亦均顯著高于對照組（均P＜0.05），且急性期顯著高于恢復(fù)早期（P＜0.01），見表 1。

表1 兩組患兒尿液LXA4、NF-κB水平比較

2.2 HSPN患兒與非HSPN患兒急性期尿液中LXA4、NF-κB水平比較 HSPN患兒急性期尿液LXA4水平顯著低于非HSPN患兒，NF-κB水平顯著高于非HSPN患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

2.3 尿液LXA4、NF-κB與24h尿蛋白定量的相關(guān)性分析 病例組急性期尿液LXA4水平與NF-κB水平呈負(fù)相關(guān)（r=0.347，P＜0.05）。HSPN患兒急性期24h尿蛋白量為 0.02～0.86（0.318±0.294）g/24h，LXA4水平為293.851～608.039（446.453±98.260）pg/ml，NF-κB 水平為 317.740～743.973（547.097±99.692）ng/L，HSPN 患兒急性期 24h尿蛋白定量與LXA4水平呈負(fù)相關(guān)（r=0.562，P＜0.05），與 NF-κB 無相關(guān)性（r=0.370，P＞0.05）。

表2 HSPN患兒與非HSPN患兒急性期尿液中LXA4、NF-κB 水平比較

3 討論

HSP是以小血管為主要病變的系統(tǒng)性血管炎，具有發(fā)病率高、病程長、反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)。然其發(fā)病機(jī)制不明，目前研究認(rèn)為的發(fā)病模式是各種刺激因子，包括感染原和過敏原作用于具有遺傳背景的個體，激發(fā)輔助性T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞擴(kuò)增并增強(qiáng)其活性，產(chǎn)生大量以免疫球蛋白A為主的免疫復(fù)合物，沉積在全身小血管壁而致血管炎性免疫反應(yīng)。

LXs產(chǎn)生于機(jī)體發(fā)生炎癥、過敏和血管病變時，是一類重要的內(nèi)源性抗炎介質(zhì)。LXA4是家族中的一員，有明確抗炎、促進(jìn)炎癥消退的作用，可通過不同方式調(diào)控多種炎癥信號通路發(fā)揮抗炎活性，其中包括NF-κB信號通路[14]。NF-κB為p50/p65形成的異源二聚體，當(dāng)細(xì)胞未受到外界刺激時，NF-κB/p65與其抑制蛋白IκB結(jié)合，以未活化的狀態(tài)存在胞質(zhì)中；而當(dāng)受到刺激后，NF-κB/p65與IκB解離，隨即NF-κB/p65被激活而進(jìn)入胞核，調(diào)控TNF-α、IL-8等細(xì)胞因子相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄并促進(jìn)細(xì)胞因子釋放，導(dǎo)致炎癥級聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生，而這些因子增多又可以激活NF-κB，進(jìn)一步加重細(xì)胞損傷。NF-κB信號通路與免疫密切相關(guān)，既參與機(jī)體防御病原體的入侵，又是炎癥反應(yīng)的啟動閘門，其異常激活在多種自身免疫性疾病如炎癥性腸病、川崎病發(fā)病中起重要作用[15-16]。既往研究表明LXA4與腎臟疾病相關(guān)，在腎臟纖維化、腎臟缺陷-再灌注損傷及多種腎臟炎性疾病中均有腎保護(hù)作用[17]。動物實(shí)驗(yàn)表明LXA4在急性腎損傷中起保護(hù)作用的部分機(jī)制是通過抑制NF-κB的激活，從而降低炎性因子表達(dá)及炎性細(xì)胞浸潤[18]。

郎艷美[19]報道HSP患兒急性期血清中LXA4水平增高，恢復(fù)期進(jìn)一步增高，且HSPN患兒水平低于僅有皮膚紫癜的HSP患兒，提示LXA4有抗炎作用，并具有保護(hù)腎臟作用。Wu等[6]研究表明在HSP患兒急性期尿液中也能檢測到LXA4的升高。華冉等[20]研究發(fā)現(xiàn)HSP患兒急性期血清中NF-κB水平升高，恢復(fù)期下降，表明NF-κB參與HSP的發(fā)病。本研究發(fā)現(xiàn)HSP患兒急性期尿液中LXA4顯著高于對照組，經(jīng)治療后，患兒恢復(fù)早期的尿液中LXA4水平進(jìn)一步升高，與文獻(xiàn)報道一致[21]，推測LXA4可能通過合成增多來促進(jìn)炎癥消退。HSP患兒急性期及恢復(fù)早期NF-κB水平均顯著高于對照組，恢復(fù)早期顯著低于急性期，提示NF-κB參與HSP發(fā)病，隨著病情好轉(zhuǎn)而下降。HSPN患兒尿液LXA4水平顯著低于非HSPN患兒，NF-κB水平顯著高于非HSPN患兒，且HSPN患兒24h尿蛋白定量與尿液LXA4水平呈負(fù)相關(guān)，而與NF-κB水平無相關(guān)性，提示LXA4、NF-κB水平能反映炎癥嚴(yán)重程度，且LXA4水平可反映腎損害程度，LXA4不足可能加重腎損害。LXA4有望成為HSP患兒腎損害的預(yù)測指標(biāo)，且監(jiān)測尿液較監(jiān)測血液更便捷，因其無創(chuàng)，患者的痛苦較少。HSP患兒急性期LXA4水平與NF-κB水平呈負(fù)相關(guān)，猜測LXA4生成增多可能有利于NF-κB水平下降，進(jìn)一步猜測LXA4可能通過拮抗NF-κB發(fā)揮抗炎作用，調(diào)控NF-κB信號通路可能成為HSP等血管炎癥病變的治療新靶點(diǎn)，在HSP患兒中LXA4是否通過抑制NF-κB信號通路來發(fā)揮抗炎作用還需要進(jìn)一步研究。

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（本文由浙江省醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會推薦）

Urinary lipoxin A4and NF-κB levels in children with Henoch-Schnlein purpura and their clinical significance

YING Qianqian,SHEN Mengjiao,LI Yunyan,et al.
Medicine School,Ningbo University,Ningbo 315000,China

Objective To investigate the changes of lipoxin A4(LXA4)and nuclear factor-κB(NF-κB)levels in the urine of children with Henoch-Schnlein purpura(HSP),and their clinical significance. Methods Fifty children with HSP,including 20 with HSP nephritis(HSPN),and 25 age-matched children with inguinal hernia(control group)were enrolled in the study.The morning urine specimens were collected and ELISA was used to determine the levels of LXA4and NF-κB.LXA4and NF-κB levels were compared between case and control groups,and among different subgroups,and the correlation between LXA4and NF-κB was analyzed. Results The urinary LXA4levels in acute phase and early recovery phase ofHSP patients were significantly higher than those in controlgroup(both P＜0.01),and the urinary LXA4levels in acute phase patients were significantly lower than those in early recovery phase (P＜0.01).The urinary NF-κB levels in acute phase and early recovery phase of HSP patients were also significantly higher than those in control group(both P＜0.05),while the urinary levels of NF-κB in acute phase was significantly higher than those in early recovery phase(P＜0.01).The urinary levels of LXA4in acute phase of HSP patients without kidney damage were significantly higher than those in HSPN,and the urinary levels of NF-κB were significantly lower(P＜0.05).There was a significantly negative correlation between the urinary levels of LXA4and NF-κB(r=0.347,P＜0.05)in acute phase HSP patients.Meanwhile,there was a significantly negative correlation between LXA4 and 24-h urinary protein(r=0.562,P＜0.05),while there was no correlation between NF-κB and 24-h urinary protein(r=0.370,P＞0.05)in acute phase of HSPN. Conclusion NF-κB may be involved in the pathogenesis of HSP,and associated with disease severity.LXA4 may protect kidney against inflammation by inhibiting NF-κB.

Henoch-Schnlein purpura Children Lipoxin A4Nuclear factor-κB 24-hour urinary protein

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.21.2017-1597

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生平臺研究計(jì)劃（2015ZDA027）；寧波市醫(yī)學(xué)科技項(xiàng)目（2015C50014）；寧波市自然基金項(xiàng)目（2014A610280）

315000 寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院（應(yīng)倩倩、沈夢嬌、傅詩薇）；寧波市婦女兒童醫(yī)院小兒風(fēng)濕免疫科（李蘊(yùn)言、吳菱、狄亞珍、王佳佩）

狄亞珍，E-mail：dyz028sci@163.com

2017-07-07）

陳麗）