陳慧玲，任戰(zhàn)軍，葉翔楊，趙紀(jì)萍，張成東

(西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西楊陵 712100)

家養(yǎng)雙峰駝SRY基因的序列分析與拷貝數(shù)研究

陳慧玲，任戰(zhàn)軍，葉翔楊，趙紀(jì)萍，張成東

(西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西楊陵 712100)

為探究中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因的序列以及群體間拷貝數(shù)變異，對(duì)7個(gè)中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝群體共94個(gè)個(gè)體的SRY基因部分序列進(jìn)行測(cè)序，分析SRY基因序列與其他物種的相似性；并且以 CYP2A基因?yàn)閮?nèi)參基因，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)SRY基因的拷貝數(shù)。結(jié)果表明，中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝與人、馬、豬、羊及普通牛的SRY基因相似度分別為67.7%～68.1%、68.5%～69.4%、73.8%～74.4%、73.8%～74.8%、74.1%～74.8%。在家養(yǎng)雙峰駝SRY基因的多個(gè)拷貝中，除1個(gè)拷貝外，其余拷貝的HMG序列與羊駝、人、馬、豬、綿羊及普通牛的HMG序列相比，相似度分別為97.3%、84.2%、85.6%、86.3%、87.0%、85.6%。SRY基因在中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝Y染色體上以多拷貝形式存在，變幅為 1～9 個(gè)拷貝。表明中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因的HMG序列是高度保守的，而且該基因?qū)儆诙嗫截惢颉?/p>

家養(yǎng)雙峰駝；SRY基因；拷貝數(shù)

性別決定基因(Sex-determining-region on Y chromosome,SRY)存在于哺乳動(dòng)物Y染色體的雄性特異區(qū)，具有性別決定功能，參與睪丸組織的發(fā)育過(guò)程。該基因編碼的蛋白包含C端、N端和高泳動(dòng)類非組蛋白(High-mobility group, HMG)區(qū)域，C端與N端在物種間保守性較弱，而HMG區(qū)域在物種間具有高度保守性[1-2]。早期對(duì)SRY基因的研究發(fā)現(xiàn)，SRY保守區(qū)的突變會(huì)破壞其雄性性別決定功能，引起性別反轉(zhuǎn)[3-4]，SRY基因也能夠誘導(dǎo)基因型為XX的雌性小鼠向雄性發(fā)育[5]。SRY蛋白能夠識(shí)別并結(jié)合 SOX9(Sry-related HMG box-9)基因上游的增強(qiáng)子[6]，使睪丸支持細(xì)胞的前體細(xì)胞中 SOX9基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)下游基因的轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞的分化。隨后，分化后的睪丸支持細(xì)胞組裝成睪丸索，并且刺激生殖細(xì)胞、睪丸間質(zhì)細(xì)胞、睪丸血管細(xì)胞以及其他間質(zhì)細(xì)胞的分化，最終形成睪丸組織。

在多數(shù)哺乳動(dòng)物中，SRY基因是以單拷貝的形式存在[7]，但是少數(shù)物種中該基因存在多拷貝現(xiàn)象。貓、小鼠、家兔和水牛中SRY為多拷貝基因[8-12]。接觸輻射或性染色體異常的人類SRY基因會(huì)出現(xiàn)拷貝數(shù)變異現(xiàn)象[13]。迄今為止，未見(jiàn)中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因研究的報(bào)道。本試驗(yàn)以中國(guó)4個(gè)地區(qū)7個(gè)家養(yǎng)雙峰駝群體為研究對(duì)象，對(duì)其SRY基因部分序列進(jìn)行測(cè)序，并且運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)其拷貝數(shù)，以期對(duì)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因有初步了解。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

按照隨機(jī)整群抽樣的方法，采集內(nèi)蒙古(阿拉善、蘇尼特)、甘肅(河西)、青海(海西州)、新疆(南疆、北疆和東疆)4個(gè)地區(qū)94峰雄性家養(yǎng)雙峰駝的血樣(表1)。另外，采集5峰雌性家養(yǎng)雙峰駝血樣作為陰性對(duì)照。頸靜脈采集血液于已滅菌的離心管中，加入ACD抗凝劑后在-80 ℃保存，備用。

表1 家養(yǎng)雙峰駝樣本來(lái)源與樣本量Table 1 Source and number of domestic bactrian camel

1.2 SRY引物設(shè)計(jì)與合成

依據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中雄性野生雙峰駝的相應(yīng)序列(GenBank登錄號(hào):NW_006220067)，運(yùn)用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)預(yù)期擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為708 bp 的引物用于SRY基因的測(cè)序。其中上游引物：5′-ATGCTTCTGCTATGTTTGCG-3′，下游引物：5′-ACCAAAAGTAACGGTGAGAATG-3′。引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.3 PCR擴(kuò)增與測(cè)序

利用酚—氯仿法提取基因組DNA[14]，采用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳和Nanodrop 2000檢測(cè)其純度和質(zhì)量濃度。將提取效果良好的基因組DNA樣品統(tǒng)一稀釋至20 ng/μL，置于-20 ℃保存，備用。

挑選6～10個(gè)雄性個(gè)體的基因組DNA混合成DNA池，共構(gòu)建13個(gè)DNA池，-4 ℃保存。DNA池中每個(gè)樣品的質(zhì)量濃度盡可能保持一致。

首先用SRY引物對(duì)雄性DNA池進(jìn)行PCR擴(kuò)增(以雌性雙峰駝DNA為陰性對(duì)照)，采用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)引物的雄性特異性，并且確定其最適退火溫度為65.3 ℃。反應(yīng)體系為10 μL：EsTaqMaster Mix 5 μL，上下游引物各0.2 μL，DNA模板0.5 μL，ddH2O 4.1 μL(北京康為世紀(jì)有限公司)。 PCR反應(yīng)程序：95 ℃變性5 min；94 ℃ 30 s，65 ℃ 40 s， 72 ℃ 50 s，34個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。雄性特異的擴(kuò)增產(chǎn)物由上海生工生物工程股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。

如果測(cè)序結(jié)果出現(xiàn)雙峰，則對(duì)該DNA池中的每個(gè)個(gè)體分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增測(cè)序，以再次確定SNP位點(diǎn)。如果單個(gè)個(gè)體的序列峰圖仍在相同位點(diǎn)處出現(xiàn)雙峰，則需要進(jìn)行TA克隆測(cè)序予以驗(yàn)證。在每個(gè)群體中分別挑選1個(gè)個(gè)體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒(Takara公司)純化回收PCR產(chǎn)物，產(chǎn)物經(jīng)過(guò)純化與回收之后，與pGEM-T載體連接，然后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，在37 ℃平板培養(yǎng)。每個(gè)個(gè)體隨機(jī)挑選10個(gè)陽(yáng)性菌落在具有Amp+的LB培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)過(guò)夜，吸取部分菌液送至上海生工生物工程股份有限公司進(jìn)行克隆測(cè)序。

1.4 SRY序列相似性分析

用DNASTAR軟件對(duì)所有個(gè)體的序列進(jìn)行比對(duì)，分析個(gè)體間序列的差異。運(yùn)用MegAlign軟件分析人(GenBank登錄號(hào):JQ811934.1)、馬(GenBank登錄號(hào):NM_001081810.1)、豬(GenBank登錄號(hào):U49860.3)、綿羊(GenBank登錄號(hào):Z30265.1)及普通牛(GenBank登錄號(hào):Z30327.1)的SRY基因序列與測(cè)序所得的SRY基因部分序列的相似度以及物種間HMG區(qū)DNA序列的相似度。

1.5 熒光定量引物的設(shè)計(jì)與合成

TA克隆測(cè)序完成后，運(yùn)用MegAlign軟件比對(duì)所有序列，選擇在SRY基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)SRYa引物用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增。選擇常染色體上的單拷貝基因細(xì)胞色素P4502A( CYP2A)為內(nèi)參基因[14]，計(jì)算SRY基因的拷貝數(shù)。引物信息見(jiàn)表2。

1.6 熒光定量PCR擴(kuò)增

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)基因的拷貝數(shù)。首先挑選質(zhì)量較好的DNA模板用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作，質(zhì)量濃度梯度依次為40、20、10、5和2.5 ng/μL，每個(gè)質(zhì)量濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。熒光定量PCR程序完成之后，獲得各質(zhì)量濃度相對(duì)應(yīng)的Ct值，分別制作CYP2A和SRYa的標(biāo)準(zhǔn)曲線。將待測(cè)樣本均稀釋至5 ng/μL，每個(gè)樣本在同一板中同時(shí)進(jìn)行2對(duì)引物的擴(kuò)增，而且每對(duì)引物對(duì)應(yīng)的每個(gè)DNA樣本均設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每板都設(shè)有相同的校正樣本以減小板間的系統(tǒng)誤差。

表2 SRYa和CYP2A引物信息Table 2 Information of SRYa and CYP2A

反應(yīng)體系：DNA模板0.8 μL，SYBR Premix EXTaqⅡ(2×)(Takara) 5 μL，上下游引物(10 μmol/L)各0.4 μL，RNase-Free Water 3.4 μL。熒光定量反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，退火30 s，35個(gè)循環(huán)；95 ℃ 10 s，65 ℃ 5 s，65 ℃～95 ℃(0.5 ℃/s)。

1.7 基因拷貝數(shù)的計(jì)算

參照HAMILTON等[15]的方法計(jì)算SRY基因的拷貝數(shù)。計(jì)算公式如下：

依據(jù)獲取的各質(zhì)量濃度梯度所對(duì)應(yīng)的Ct值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率k，進(jìn)而計(jì)算出引物的擴(kuò)增效率：E=10-1/k。

依據(jù)所有96孔板中校正樣本的Ct值，計(jì)算校正樣本Ct值的平均值。再根據(jù)平均值計(jì)算校正樣本的拷貝數(shù)：CN校正樣本=(Er)Ct r/(Et)Ct t。

每個(gè)96孔板中校正樣本都設(shè)置3個(gè)重復(fù)，分別計(jì)算不同板中校正樣本3個(gè)Ct值的平均值，再將不同板的待測(cè)樣本校正到同一水平，待測(cè)樣本與校正樣本之間校正系數(shù)的計(jì)算：

R=(Et)△Ct t/(Er)△Ct r。

待測(cè)樣本拷貝數(shù)計(jì)算：CN=(CN校正樣本) ×R。

k代表標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，t代表目的基因SRY，r代表內(nèi)參基因 CYP2A，E代表擴(kuò)增效應(yīng)，Et代表SRYa引物的擴(kuò)增效率，Er代表CYP2A 引物的擴(kuò)增效率，Ctr代表CYP2A引物的Ct值，Ctt代表SRYa引物的Ct值，△Ctt=校正樣本SRYa的Ct值-待測(cè)樣本SRYa 的Ct值，△Ctr=校正樣本CYP2A 的Ct值-待測(cè)樣本CYP2A 的Ct值。

運(yùn)用SPSS 18.0軟件Kolmogorov-Smirnov標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所研究個(gè)體的基因拷貝數(shù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 SRY基因的PCR擴(kuò)增

Touchdown PCR擴(kuò)增后，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)10 g/L的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖1所示，陰性對(duì)照與空白對(duì)照無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物，而所有雄性個(gè)體的條帶明亮清晰，片段長(zhǎng)度與預(yù)期長(zhǎng)度一致，并且無(wú)非特異性擴(kuò)增，表明SRY引物具有雄性特異性。

圖1 SRY引物的雄性特異性檢測(cè)Fig.1 Detection of SRY specificity in male camel

2.2 SRY基因序列分析

運(yùn)用DNASTAR軟件對(duì)SRY引物擴(kuò)增所得序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果如圖2所示，13個(gè)DNA池中SRY基因擴(kuò)增片段的測(cè)序峰圖均出現(xiàn)雙峰，本圖只展示其中3個(gè)DNA池的比對(duì)結(jié)果，其余DNA池測(cè)序結(jié)果與該圖一致，因此初步推斷SRY基因存在SNP位點(diǎn)以及堿基的插入。

以DNA池中各單樣為模板分別對(duì)SRY引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，經(jīng)過(guò)序列比對(duì)，對(duì)應(yīng)DNA池中SNP位點(diǎn)處尋找各個(gè)單樣之間堿基的差異。結(jié)果如圖2所示，每個(gè)個(gè)體的測(cè)序峰圖在與池DNA序列的相同位點(diǎn)處存在雙峰，而且也具有堿基插入位點(diǎn)，其他個(gè)體測(cè)序結(jié)果也與該結(jié)果一致，由此推測(cè)在家養(yǎng)雙峰駝中SRY基因可能是多拷貝基因。

TA克隆測(cè)序結(jié)果如圖3所示，同一個(gè)體10個(gè)克隆之間的序列存在變異位點(diǎn)和1個(gè)AT二堿基插入，本圖只展示3個(gè)克隆序列的比對(duì)結(jié)果，其他群體的測(cè)序結(jié)果與青海駝一致。由于Y染色體MSY區(qū)不與X染色體重組，因而證明在家養(yǎng)雙峰駝中單個(gè)個(gè)體出現(xiàn)SNP位點(diǎn)的SRY基因是多拷貝基因。

圖2 3個(gè)DNA池的SRY基因測(cè)序Fig.2 Sequencing result of the SRY gene of three gene pools

圖3 1峰青海駝的SRY基因克隆測(cè)序Fig.3 SRY gene of a Qinghai sample by PCR cloning and sequencing

2.3 不同物種間序列相似性分析

對(duì)中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝的SRY基因部分序列進(jìn)行克隆測(cè)序，共獲得708 bp的序列。運(yùn)用MegAlign軟件對(duì)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因不同拷貝的序列與人、馬、豬及普通牛的SRY基因序列進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因與人、馬、豬、綿羊及普通牛的SRY基因相似度約為67.7%～68.1%、68.5%～69.4%、73.8%～74.4%、73.8%～74.8%、74.1%～74.8%。

不同物種的SRY蛋白都含有保守的HMG結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域是SRY蛋白重要的功能區(qū)。因此本試驗(yàn)比對(duì)羊駝HMG序列和家養(yǎng)雙峰駝708 bp 的序列，結(jié)果顯示在家養(yǎng)雙峰駝SRY基因的多個(gè)拷貝中，除1個(gè)拷貝外，其余拷貝中有146 bp的序列與羊駝HMG序列相似度高達(dá)97.3%，與人、馬、豬、綿羊及普通牛的HMG序列相比，相似度分別為84.2%、85.6%、86.3%、87.0%、85.6%。因此，可以初步確定中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因的HMG區(qū)域。由于拷貝之間的HMG序列有5個(gè)突變位點(diǎn)，因而認(rèn)為家養(yǎng)雙峰駝的HMG序列為：

TCATTGTATGGGCTCGTGATCAAAGGCGAAAGGTGGCTCTASAGAATMCCAAA- ATGCAGAACKCAGAGATCAGCAAGCGGC-TGGGATACCAGTGGAAATTACTTACAGA-AGSTGAAAAGCGGCCGTTCTTCGAGGAG-GCRCAGAGA。

結(jié)合野生雙峰駝SRY基因的預(yù)測(cè)序列、氨基酸序列(GenBank登錄號(hào):XP_006195462)以及羊駝HMG的氨基酸序列(GenBank登錄號(hào):ABI31754.1)，推測(cè)家養(yǎng)雙峰駝HMG的氨基酸序列為：

IVWARDQRRKVAL(E/Q)N(T/P)KMQN(A/S)EISKRLGYQWKLLTE(A/G)EKRPFFEE AQR。其與野生雙峰駝和羊駝序列相似度約為95.8%。

2.4 SRYa和CYP2A引物的PCR擴(kuò)增

Touchdown PCR擴(kuò)增后，用10 g/L的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)(圖4)，結(jié)果顯示SRYa引物只在雄性個(gè)體中有目的條帶，雌性個(gè)體無(wú)條帶。CYP2A引物的擴(kuò)增產(chǎn)物為單一條帶，且無(wú)引物二聚體。

圖4 SRYa(a)和CYP2A(b)引物的特異性檢測(cè)Fig.4 Detection of SRYa(a) and CYP2A(b) specificity

2.5 溶解曲線

引物的熒光定量溶解曲線如圖5所示，2對(duì)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物單一，無(wú)引物二聚體及非特異性條帶擴(kuò)增。由此可見(jiàn)，該引物均可用于后續(xù)的熒光定量PCR擴(kuò)增。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線

CYP2A和SRYa引物的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖6所示，CYP2A和SRYa引物的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率分別為-3.207 1和-3.223 3。由此計(jì)算出CYP2A和SRYa引物的擴(kuò)增效率分別為2.05和2.04，R2均大于0.99，表明2對(duì)引物的擴(kuò)增效率較好，可用于后續(xù)的試驗(yàn)。

2.7 拷貝數(shù)計(jì)算

根據(jù)公式計(jì)算出校正樣本SRY基因的拷貝數(shù)是2，隨后計(jì)算94個(gè)樣本的拷貝數(shù)。結(jié)果顯示，在94個(gè)個(gè)體中，SRY基因拷貝數(shù)中值數(shù)為4，變幅為1～9。各群體拷貝數(shù)見(jiàn)表3。

圖5 CYP2A和SRYa的 qPCR 溶解曲線Fig.5 Dissociation curves of CYP2A and SRYa

圖6 CYP2A 和SRY擴(kuò)增引物的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.6 Standard curves of CYP2A and SRY primers

表3 7個(gè)家養(yǎng)雙峰駝群體SRY基因的拷貝數(shù)中值Table 3 Copy median number (CN) of SRY in seven populations

94個(gè)個(gè)體基因拷貝數(shù)的正態(tài)分布分析結(jié)果顯示所有個(gè)體的拷貝數(shù)均不服從正態(tài)分布(圖7-a)。箱線圖結(jié)果發(fā)現(xiàn)少數(shù)雙峰駝個(gè)體的SRY基因拷貝數(shù)偏高或偏低，大約占群體的1.06%。其中，蘇尼特駱駝?dòng)?個(gè)個(gè)體與其他個(gè)體離散，拷貝數(shù)為9(圖7-b)。

3 討 論

平均值=4.11，標(biāo)準(zhǔn)差 = 1.44 Mean = 4.11,standard deviation = 1.44

SRY基因是哺乳動(dòng)物性別決定的開(kāi)關(guān)基因，它的表達(dá)能夠啟動(dòng)雄性發(fā)育的級(jí)聯(lián)信號(hào)通路，誘導(dǎo)性別特異的性腺發(fā)育，因而在物種的性別分化過(guò)程中具有至關(guān)重要的作用。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝的SRY基因部分序列進(jìn)行測(cè)序，而后將所得序列與其他物種SRY基因序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示其與牛和豬的相似度很高。Jirimutu等[14]通過(guò)對(duì)動(dòng)物基因組中的 2 345 個(gè)單拷貝直系同源構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)駱駝與牛和豬的關(guān)系最近。雖然本試驗(yàn)所研究的SRY基因是多拷貝基因，但是物種間的序列相似度也能在一定程度上反映駱駝與牛、豬的進(jìn)化關(guān)系，進(jìn)化關(guān)系越近，序列變異程度越小。因此，該結(jié)果與Jirimutu等[14]的研究結(jié)果一致。

本試驗(yàn)運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因的拷貝數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)拷貝數(shù)變幅為1～9。和其他物種相比，拷貝數(shù)也有差異。目前研究發(fā)現(xiàn)，SRY基因在人類、馬、牛、黑猩猩、豬中均為單拷貝基因[7,15-17]，而在家貓和水牛中則為多拷貝基因[10,12]。大鼠的SRY基因有11個(gè)拷貝，拷貝序列之間有一定的差異[11]，11個(gè)拷貝中至少有6個(gè)拷貝能夠正常表達(dá)[18]。不同物種拷貝數(shù)的差異進(jìn)一步表明Y染色體在不同的物種間表現(xiàn)出異質(zhì)性。

HMG區(qū)域在物種間相對(duì)保守，是SRY基因發(fā)揮性別決定功能的區(qū)域。因此，本試驗(yàn)對(duì)中國(guó)家養(yǎng)雙峰駝SRY基因的HMG區(qū)域進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果顯示，HMG的堿基序列位于本試驗(yàn)所擴(kuò)增片段的193～338 bp，而二堿基插入在該區(qū)域的下游，因而不會(huì)引起該區(qū)域序列的移碼突變。由于不同拷貝的序列之間有變異位點(diǎn)存在，部分氨基酸會(huì)發(fā)生改變，氨基酸的改變是否會(huì)影響SRY基因的功能還是未知數(shù)。目前，對(duì)于大鼠SRY基因序列的分析結(jié)果顯示，11個(gè)拷貝的SRY序列之間的突變位點(diǎn)導(dǎo)致氨基酸序列改變，進(jìn)而引起核定位以及轉(zhuǎn)錄活性改變[11]。前人[19-20]研究發(fā)現(xiàn)SRY蛋白的功能并不局限于性別決定，其在成年雄性大腦、腎臟和腎上腺中也有表達(dá)。本試驗(yàn)所得708 bp的序列在拷貝序列間也存在多個(gè)突變位點(diǎn)及1個(gè)二堿基的插入位點(diǎn)，推測(cè)這些位點(diǎn)的改變可能會(huì)影響睪丸組織的發(fā)育。這些變異也可能與SRY基因的其他功能相關(guān)聯(lián)，然而這些問(wèn)題還有待于進(jìn)一步探討。

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CorrespondingauthorREN Zhanjun, male, associate professor. Research area:economic zoology research.E-mail:renzhanjun@nwsuaf.edu.cn

(責(zé)任編輯：顧玉蘭Responsibleeditor:GUYulan)

CopyNumberandSequenceAnalysisofSRYGeneinChineseDomesticBactrianCamel

CHEN Huiling, REN Zhanjun, YE Xiangyang, ZHAO Jiping and ZHANG Chengdong

(College of Animal Science and Technology, Northwest Aamp;F University, Yangling Shaanxi 712100,China)

The study aims to exploreSRYgene sequence of Chinese domestic bactrian camel and the copy number variation of SRY among populations. Partial sequence ofSRYgene of 94 samples from seven populations were sequenced to analyze the similarity among species. Additionally, CYP2A gene as a reference gene,SRYgene copy number was detected by real-time PCR. The similarity ofSRYgene between Chinese bactrian camel and human, horse, pig, sheep as well as bovine was 67.7%-68.1%, 68.5%-69.4%, 73.8%-74.4%, 73.8%-74.8% and 74.1%-74.8%, respectively. Except for one copy, the similarity between HMG of the rest copy of Chinese bactrian camel and HMG of alpaca, human, horse, pig, sheep as well as bovine was 97.3%, 84.2%, 85.6%, 86.3%, 87.0% and 85.6%, respectively. TheSRYgene was a multicopy gene in Chinese domestic bactrian camel and copy number variation ranged from 1 to 9. HMG sequences of Chinese domestic bactrian camel were highly conserved. TheSRYgene was a multicopy gene in Chinese domestic bactrian camel.

Domestic bactrian camel;SRYgene; Copy number

2016-09-20

2016-10-25

The National Natural Science Foundation of China (No. 31172178).

CHEN Huiling, female, master student. Research area:evaluation, protection and utilization of animal genetic resources. E-mail:chlachj@nwsuaf.edu.cn

日期：2017-11-17

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20171117.1101.004.html

2016-09-20

2016-10-25

國(guó)家自然科學(xué)基金(31172178)。

陳慧玲，女，碩士研究生，從事動(dòng)物遺傳資源評(píng)價(jià)、保護(hù)和利用研究。E-mail:chlachj@nwsuaf.edu.cn

任戰(zhàn)軍，男，副教授，主要從事經(jīng)濟(jì)動(dòng)物研究。E-mail:renzhanjun@nwsuaf.edu.cn

Q951

A

1004-1389(2017)11-1569-08