張鵬，劉海瑛，林慧，黃煜

(青島大學(xué)附屬青島婦女兒童醫(yī)院婦科，山東 青島 266010)

子宮內(nèi)膜癌中孕激素與雌激素受體、Ki-67與C-erbB-2的表達及與病理的相關(guān)性分析

張鵬，劉海瑛，林慧，黃煜

(青島大學(xué)附屬青島婦女兒童醫(yī)院婦科，山東 青島 266010)

目的探討子宮內(nèi)膜癌中孕激素受體(progesterone receptor,PR)、雌激素受體(estrogen receptor,ER)、增殖細胞核抗原67(proliferating cell nuclear antigen 67,Ki-67)與表皮生長因子受體2(epidermal growth factor receptor 2,C-erbB-2)的表達及與病理的相關(guān)性。方法選擇77例子宮內(nèi)膜癌患者的病灶組織蠟塊，檢測其中PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達。結(jié)果本組Ⅲ～Ⅳ期病灶PR、ER陽性率低于Ⅰ期與Ⅱ期(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期與Ⅱ期病灶Ki-67與C-erbB-2陽性率高于Ⅰ期(P<0.05)。本組G3類型病灶PR、ER低于G1類型(P<0.05)，Ki-67與C-erbB-2的陽性率高于G1類型(P<0.05)；G2類型病灶Ki-67陽性率高于G1類型(P<0.05)。本組浸潤程度≤1/2的病灶PR、ER陽性率高于浸潤程度>1/2病灶(P<0.05)，Ki-67陽性率低于浸潤程度>1/2病灶(P<0.05)；浸潤程度≤1/2病灶與>1/2病灶的C-erbB-2陽性率對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本組有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病灶PR、ER陽性率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病灶(P<0.05)，Ki-67陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病灶(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者C-erbB-2陽性率對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本組77例子宮內(nèi)膜癌患者的Ki-67與C-erbB-2表達呈正相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論PR與ER陽性，Ki-67與C-erbB-2陰性的子宮內(nèi)膜癌患者惡性程度相對較低，分化較佳，4項指標(biāo)聯(lián)合檢測對評價子宮內(nèi)膜癌的治療、診斷及預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義。

子宮內(nèi)膜癌；孕激素受體；雌激素受體；增殖細胞核抗原67(Ki-67)；表皮生長因子受體(C-erbB-2)；病理

子宮內(nèi)膜癌是指子宮內(nèi)膜上所發(fā)生的一組上皮性惡性腫瘤，多見于絕經(jīng)后與圍絕經(jīng)期女性，且隨著近年來人們生活水平的提高及醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)的完善，該病的發(fā)病率也呈顯著上升的趨勢，給女性的生殖健康、生活質(zhì)量及生命安全帶來了巨大的影響。有研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌的形成、發(fā)展與預(yù)后不僅與女性體內(nèi)孕激素與雌激素水平相關(guān)，同時也與細胞異常增殖、原癌基因異常激活有關(guān)[1]。為了進一步完善子宮內(nèi)膜癌患者的診療與預(yù)評估方案，本研究采用免疫組織化學(xué)法測定77例子宮內(nèi)膜癌患者組織內(nèi)孕激素受體(progesterone receptor,PR)、增殖細胞核抗原67(proliferating cell nuclear antigen 67,Ki-67)與表皮生長因子受體2(epidermal growth factor receptor 2,C-erbB-2)的表達，以及分析與病理的相關(guān)性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇2015年1月至2016年12月本院77例子宮內(nèi)膜癌患者的病灶組織蠟塊，患者年齡：36～75歲，平均(50.6±5.6)歲；分化類型：低分化(G3)30例，中分化(G2)22例，高分化(G1)25例；FIGO臨床病理分期：Ⅲ～Ⅳ期34例，Ⅱ期18例,Ⅰ期25例；浸潤深度：≥1/2者34例，<1/2者43例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：有33例，無44例；絕經(jīng)情況：絕經(jīng)50例，絕經(jīng)年限1～22年(5.8±2.3)年；產(chǎn)次：0～5次(3.0±0.5)次；合并癥：冠心病11例，糖尿病12例，高血壓10例，高血脂5例。入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理檢查證實；(2)本次研究內(nèi)容均告知患者，并已取得其知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)3個月內(nèi)有孕激素與雌激素治療史；(2)放化療治療史；(3)病理資料不完整。

1.2方法

1.2.1 治療方法 本組77例子宮內(nèi)膜癌患者均根據(jù)中華婦科學(xué)會婦科腫瘤學(xué)組[2]制定的規(guī)范實施全子宮切除術(shù)+盆腔淋巴結(jié)切除術(shù)或廣泛子宮切除術(shù)治療。

1.2.2 標(biāo)本采集與處理 采用4%甲醛常規(guī)固定77例患者的組織標(biāo)本，并以石蠟包埋。試劑：Ki-67試劑盒、C-erbB-2試劑盒、單克隆抗體PR、ER試劑均由上海超研生物科技有限公司提供，且為即用型。

1.2.3 免疫組織化學(xué)檢測 子宮內(nèi)膜癌組織切除后先經(jīng)甲醛固定再由石蠟包埋。選擇4 μm石蠟標(biāo)本連續(xù)切片后，先確認(rèn)病理情況再行脫蠟到水。采用3%雙氧水進行10 min溫孵育、水洗，熱修復(fù)(pH 7.4，乙二胺四乙酸，0.01 mol/L)后恢復(fù)室溫水洗，將其浸泡在磷酸鹽緩沖液(0.05 mol/L)內(nèi)5 min，以血清A封閉。通過免疫組織化學(xué)S-P法檢測，滴加一抗1∶50的PR、ER、Ki-67與C-erbB-2工作液，放置在4 ℃冰箱內(nèi)存儲過夜，之后升至室溫。采用磷酸鹽緩沖液(0.05 mol/L)3次，5 min/次，滴加二抗并在37 ℃條件下孵育35 min，磷酸鹽緩沖液(0.05 mol/L)3次，5 min/次，二氨基聯(lián)苯胺顯色5 min，之后充分水洗，給予10 min的蘇木素對比染色，30 min水洗反藍，脫水后封片。

1.3觀察指標(biāo)

對比不同病理分期、分化類型、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況下PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達，以及Ki-67與C-erbB-2相關(guān)性。研究結(jié)果均由2名具有豐富臨床工作經(jīng)驗的病理醫(yī)師評定，在意見不同的情況下由第3名病理醫(yī)師評定，以2名相同意見為準(zhǔn)。陽性信號呈棕褐色或棕黃色顆粒。Ki-67、PR與ER陽性表達呈棕黃色，位于細胞核，C-erbB-2定位在細胞膜，陽性呈棕黃色顆粒狀；Ki-67定位在細胞核，陽性呈棕黃色顆粒狀。陽性百分比為平均陽性細胞比例值。半定量分級[3]：陽性細胞在50%以上為強陽性，陽性細胞在26%～50%之間為陽性，陽性細胞在10%～25%之間為弱陽性，陽性細胞低于10%為陰性。陽性=(強陽性+陽性)。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1本組病灶不同病理分期下PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達

本組Ⅲ～Ⅳ期病灶PR、ER陽性率低于Ⅰ期與Ⅱ期(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期與Ⅱ期病灶Ki-67與C-erbB-2陽性率高于Ⅰ期(P<0.05)。見表1。

表1本組病灶不同病理分期下PR、ER、Ki-67與C-erb B-2的表達[n(%)]

病理分期nPR陽性ER陽性Ki-67陽性C-erbB-2陽性Ⅲ～Ⅳ期346(17.65)*#6(17.65)*#25(73.53)*20(58.82)*Ⅱ期1814(77.78)16(88.89)12(66.67)*14(77.78)*Ⅰ期2514(56.00)19(76.00)9(36.00) 6(24.00) χ2值11.85615.1607.65211.325P值<0.05<0.05<0.05<0.05

*P<0.05，與Ⅰ期比較；#P<0.05，與Ⅱ期比較。

2.2本組病灶不同分化類型下PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達

本組病灶G3類型PR、ER低于G1類型(P<0.05)，Ki-67與C-erbB-2的陽性率高于G1類型(P<0.05)；G2類型Ki-67陽性率高于G1類型(P<0.05)。見表2。子宮內(nèi)膜分化越差，PR、ER表達越低。見圖1及圖2。

表2本組病灶不同分化類型下PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達[n(%)]

分化類型nPR陽性ER陽性Ki-67陽性C-erbB-2陽性G3306(20.00)*6(20.00)*24(80.00)*24(80.00)*G22210(45.45)15(68.18)16(72.73)*10(45.45) G12518(72.00)20(80.00)6(24.00) 6(24.00) χ2值12.52314.52310.5967.526P值<0.05<0.05<0.05<0.05

*P<0.05，與G1類型比較。

2.3本組病灶不同浸潤程度下PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達

本組病灶浸潤程度≤1/2的PR、ER陽性率高于浸潤程度>1/2的病灶(P<0.05)，Ki-67陽性率低于浸潤程度>1/2的病灶(P<0.05)；浸潤程度≤1/2與>1/2的的病灶C-erbB-2陽性率對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3本組病灶不同浸潤程度下PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達[n(%)]

浸潤程度nPR陽性ER陽性Ki-67陽性C-erbB-2陽性>1/2438(18.60)11(25.58)27(62.79)21(48.84)≤1/23426(76.47)*30(88.24)*19(55.88)*19(55.88)χ2值8.82613.5666.5232.563P值<0.05<0.05<0.05<0.05

*P<0.05，與浸潤程度>1/2的病灶比較。

2.4本組病灶不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況下PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達

本組有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病灶PR、ER陽性率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)，Ki-67陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者C-erbB-2陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4本組病灶不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況下PR、ER、Ki-67與C-erbB-2的表達[n(%)]

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移nPR陽性 ER陽性 Ki-67陽性 C-erbB-2陽性有336(18.18)*5(15.15)*30(90.91)*12(36.36)無4428(63.64)36(81.82)16(36.36)28(63.64)χ2值14.5237.8964.8561.640P值<0.05<0.05<0.05<0.05

*P<0.05，與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病灶比較。

2.5本組病灶Ki-67與C-erbB-2的相關(guān)性分析

本組77例子宮內(nèi)膜癌患者的Ki-67與C-erbB-2表達呈正相關(guān)性(P<0.05)。見表5。

表5 本組病灶Ki-67與C-erbB-2的相關(guān)性分析

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)最為常見的腫瘤之一，每年新發(fā)病例約20萬例，現(xiàn)已成為僅次于宮頸癌與卵巢癌的第三大婦科惡性腫瘤[4]。據(jù)相關(guān)調(diào)查顯示，子宮內(nèi)膜癌在女性全身惡性腫瘤中的發(fā)病率為7%，在生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中為20%～30%，且發(fā)病率呈逐漸上升的趨勢[5]。

研究發(fā)現(xiàn)，至1968年學(xué)者Tenson等在陰道、子宮與垂體組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量激素受體后，近年來對孕激素與雌激素的研究也越發(fā)明確[6]。雌激素與孕激素主要存在于女性生殖系統(tǒng)內(nèi)，是一種重要的調(diào)節(jié)物質(zhì)。然而，細胞癌變后損傷了雌激素與孕激素的受體產(chǎn)生與作用，若癌變程度超過一定指標(biāo)，則生殖系統(tǒng)內(nèi)性激素受體即會降低，甚至消失。有學(xué)者認(rèn)為，子宮內(nèi)膜癌屬于激素依賴性疾病，其臨床病理特點與患者體內(nèi)孕激素與雌激素水平密切相關(guān)[7]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本組Ⅲ～Ⅳ期病灶PR、ER陽性率低于Ⅰ期與Ⅱ期(P<0.05)，G3類型病灶PR、ER低于G1類型(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病灶PR、ER陽性率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，本組浸潤程度≤1/2的病灶PR、ER陽性率高于浸潤程度>1/2者(P<0.05)。結(jié)果可見，PR與ER缺失與子宮內(nèi)膜癌細胞惡性程度、分化程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移及浸潤程度密切相關(guān)，PR與ER水平越低，其惡性程度越高，這與部分學(xué)者的研究結(jié)果相符[8-9]。此外，PR與ER的存在說明腫瘤細胞對激素具有一定的反應(yīng)，是抗雌激素治療方案的理論依據(jù)，同時激素失表達亦是評估腫瘤激素治療效果的重要標(biāo)志，所以檢測PR與ER則對子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后綜合治療具有重要的指導(dǎo)意義。

Ki-67主要存在于組織增殖核基內(nèi)的核蛋白，它是由分子質(zhì)量為395 000與345 000的兩條多肽鏈構(gòu)成，在10號染色體上定位基因，普遍存在于除G0期外細胞周期內(nèi)的任何階段[10]。Ki-67的半衰期較短，當(dāng)與細胞周期脫離后能夠快速降解，所以現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于腫瘤細胞增殖活性的檢測中。本研究結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ期與Ⅱ期病灶Ki-67陽性率高于Ⅰ期(P<0.05)，G3、G2類型病灶Ki-67陽性率高于G1類型(P<0.05)，浸潤程度≤1/2的病灶Ki-67陽性率低于浸潤程度>1/2者(P<0.05)，Ki-67陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。結(jié)果可見，Ki-67高表達可能提示著細胞增生活躍，易發(fā)生轉(zhuǎn)移，侵襲性強，預(yù)后不良。Ki-67抗原可作為評估子宮內(nèi)膜癌分化狀態(tài)、增殖狀態(tài)的重要指標(biāo)，利于識別腫瘤侵襲力，且對子宮內(nèi)膜癌惡化、復(fù)發(fā)及治療效果評估具有重要的預(yù)測價值[11]。

C-erbB-2是在17號染色體長臂上的蛋白基因，其表皮因子受體與結(jié)構(gòu)相似。有研究指出，C-erbB-2蛋白基因物質(zhì)的降低可以有效阻斷腫瘤細胞的分化與增殖。本研究結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ期與Ⅱ期病灶C-erbB-2陽性率高于Ⅰ期(P<0.05)，G3類型C-erbB-2的陽性率高于G1類型(P<0.05)。C-erb

B-2是高表達說明腫瘤侵襲作用更強，這可能與腫瘤的形成、演變及預(yù)后有關(guān)。然而，浸潤程度≤1/2與>1/2的病灶、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者C-erbB-2陽性率對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，此結(jié)果與部分研究有所差異，有待擴大研究樣本進一步驗證[12-13]。同時，子宮內(nèi)膜癌是一個多步驟、多基因的發(fā)展過程，主要包括癌基因被激活，細胞凋亡或受阻、細胞增殖活躍及異型變化等，繼而形成腫瘤[14]。本組77例子宮內(nèi)膜癌患者的Ki-67與C-erbB-2表達呈正相關(guān)性(P<0.05)?？梢?，Ki-67表達與C-erbB-2表達相關(guān)，二者均有可能參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病、進展過程，并可影響疾病預(yù)后[15]。

總之，PR與ER陽性，Ki-67與C-erbB-2陰性的子宮內(nèi)膜癌患者惡性程度相對較低，分化較佳，反之則惡性程度高、分化差，術(shù)后需要密切隨訪并行輔助治療。同時，PR、ER、Ki-67與C-erbB-2聯(lián)合檢測對評價子宮內(nèi)膜癌的治療、診斷及預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義。

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Expressionofprogesteronereceptor,estrogenreceptor,Ki-67andC-erbB-2inendometrialcarcinomaandcorrelationwithpathology

ZHANG Peng,LIU Hai-ying,LIN Hui,HUANG Yu

(DepartmentofGynecology,AffiliatedQingdaoWomenandChildren’sHospitalofQingdaoUniversity,Qingdao266010,Shandong,China)

Objective：To investigate the expression of progesterone receptor (PR),estrogen receptor (ER),proliferating cell nuclear antigen 67(Ki-67) and epidermal growth factor receptor 2(C-erbB-2) in endometrial carcinoma and correlation with pathology.MethodsThe expression of PR,ER,Ki-67 and C-erbB-2 were detected in 77 patients with endometrial carcinoma.ResultsGroup Ⅲ～Ⅳ stage PR,ER positive rate were lower than Ⅰ with Ⅱ period (P<0.05),the positive rate of Ki-67 and C-erbB-2 in the stage Ⅲ～Ⅳ and Ⅱwere higher than that inⅠperiod (P<0.05).In this group,PR and ER of G3 type were lower than that of G1 (P<0.05),and the positive rate of Ki-67 and C-erbB-2 were higher than that of G1 (P<0.05).Ki-67 positive rate of G2 type was higher than that of G1 type (P<0.05).In this group,the PR and ER positive rate of degree of invasion≤1/2 were higher than that of degree of invasion>1/2,and the positive rate of Ki-67 was lower than that of degree of invasion>1/2 (P<0.05).There was no statistically significant difference between degree of invasion≤1/2 and>1/2 in the positive rate of C-erbB-2 (P>0.05).In this group,PR and ER positive rate with lymph node metastasis was lower than that without lymph node metastasis (P<0.05),and Ki-67 positive rate was higher than that with no lymph node metastasis (P<0.05).There was no statistically significant difference between lymph node metastasis and without lymph node metastatic C-erbB-2 positive rate (P>0.05).The expression of Ki-67 was positively correlated with the expression of C-erbB-2 (P<0.05) in the patients with intrauterine carcinoma.ConclusionThe malignancy of PR and ER positive,Ki-67 and C-erbB-2 negative endometrial carcinoma is relatively low,and the differentiation is better.The combination of four indicators for diagnosis and prognosis of endometrial carcinoma has a certain guiding significance.

Endometrial carcinoma;Progesterone receptor;Estrogen receptor;Ki-67;C-erbB-2;Pathology

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.05.005

2017-04-14

張鵬(1978-)，男，碩士，主治醫(yī)師。E-mail:dafutong@126.com

黃煜，E-mail:huangyuqd@126.com

時間： 2017-10-10 02∶27

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171010.0227.012.html

1005-3697(2017)05-0666-04

R737.33

A

(學(xué)術(shù)編輯張科榮)

本刊網(wǎng)址：http：//www.nsmc.edu.cn作者投稿系統(tǒng)http：//noth.cbpt.cnki.net郵箱xuebao@nsmc.edu.cn