魏彩平

(廣西科技大學(xué)附屬柳州市人民醫(yī)院婦科,廣西 柳州 545006)

人乳頭瘤病毒E6/E7蛋白在宮頸病變篩查中的應(yīng)用

魏彩平

(廣西科技大學(xué)附屬柳州市人民醫(yī)院婦科,廣西 柳州 545006)

目的探討人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7蛋白在宮頸癌篩查中的作用。方法選取宮頸疾病患者70例，行宮頸病理學(xué)檢查及新柏氏液基細(xì)胞學(xué)(TCT)檢測，比較高危型HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA分型檢測宮頸癌病變及非典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)患者高級別宮頸癌病變的敏感度、特異度。結(jié)果高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測宮頸病變總檢出率分別為60.0% (42/70)、67.1%(47/70)；兩種方法檢測慢性宮頸炎及CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宮頸癌檢出率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；宮頸病變的敏感度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，高危型HPV E6/E7 mRNA檢測的特異度明顯高于HPV DNA分型檢測(P<0.05)；ASC-US患者高危型HPV E6/E7 mRNA檢測的特異度明顯高于HPV DNA分型檢測(P<0.05)。結(jié)論與HPV DNA分型檢測方法相比，高危型HPV E6/E7 mRNA檢測對預(yù)測宮頸病變特異度更強，特別是對TCT檢測為ASC-US患者的分流意義更為明確。

人乳頭瘤病毒;宮頸病變;非典型鱗狀細(xì)胞;新柏氏液基細(xì)胞學(xué)

宮頸癌發(fā)病率僅次于乳腺癌，1/3宮頸癌患者最終死亡。人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是誘發(fā)宮頸癌的關(guān)鍵因子，高危型HPV DNA存在于近90%的宮頸癌組織中，其中高危型HPVE6/E7蛋白與高危型HVP的轉(zhuǎn)化密切相關(guān)[1]。目前，宮頸癌、乳腺癌的篩查是國家重大公共衛(wèi)生項目，宮頸癌的預(yù)防關(guān)鍵在于篩查出更多的癌前病變，以便于早期治療。本研究旨在探討高危型HPV E6/E7 mRNA在宮頸癌疾病篩查中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2012年9月至2014年10月在柳州市人民醫(yī)院婦科就診的初步篩查疑存在宮頸疾病患者70例為研究對象，多以接觸性出血、陰道異常出血、白帶異常及下腹隱痛就診。排除具有子宮或?qū)m頸切除術(shù)史、盆腔放射治療史及妊娠患者。納入研究患者年齡20～70歲，平均(38.0±7.2)歲，取標(biāo)本前禁性生活>3 d，且陰道無沖洗、放藥。

1.2方法

對患者行宮頸TCT、陰道鏡下活檢組織病理學(xué)檢查及HPV E6/E7 mRNA檢測。(1)宮頸樣本采集：分別采集每例患者宮頸細(xì)胞標(biāo)本各2份，細(xì)胞采集器的中央刷毛部位插入宮頸管內(nèi)，順時針方向轉(zhuǎn)動采樣器，將收集的細(xì)胞保存于細(xì)胞保存液中，室溫放置待測。(2)宮頸TCT檢查：TCT專門采樣器收集宮頸細(xì)胞樣本，獲得的脫落細(xì)胞浸入細(xì)胞處理試劑中，獲得的有效細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，再制成細(xì)胞薄片，黏液對制片會造成干擾，可經(jīng)過濾離心解決，采用巴氏染色或其他免疫組織化學(xué)染色細(xì)胞薄片，顯微鏡下觀察分析宮頸細(xì)胞形態(tài)。(3)活檢組織病理學(xué)檢查：對于TCT檢查結(jié)果顯示異常的患者行陰道鏡下檢查取活檢，送至病理科行組織病理學(xué)檢查。(4)HPV E6、E7 mRNA bDNA檢測：嚴(yán)格按照試劑盒操作，檢測結(jié)果以光子數(shù)表示，檢測儀器為QuantiVirus TM 冷光儀。(5)HPV DNA分型檢測：嚴(yán)格按照試劑盒操作。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料及不同方法檢測靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值的比較均采用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1活檢組織病理學(xué)檢查結(jié)果

結(jié)果顯示：慢性宮頸炎20例；宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)患者40例，其中CINⅠ 10例，CINⅡ 10例，CIN Ⅲ 20例；宮頸癌10例。合并為慢性宮頸炎及CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宮頸癌3類。

2.2宮頸病變檢出率比較

高危型HPVE6/E7 mRNA與HPV DNA分型檢測宮頸病變總檢出率分別為60.0%(42/70)、67.1%(47/70)，差異無統(tǒng)計學(xué)義(P>0.05)；應(yīng)用于慢性宮頸炎及CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宮頸癌的檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.3宮頸病變診斷分析

以病理學(xué)檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測宮頸病變的敏感度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，高危型HPV E6/E7 mRNA檢測的特異度明顯高于HPV DNA分型檢測(P<0.05)。見表2、表3。

表1 宮頸病變的檢出率比較[n(%)]

表2高危型HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA分型檢測與病理學(xué)方法檢測宮頸病變的比例(n)

項目病理學(xué)檢查陽性陰性合計高危型HPVE6/E7mRNA檢測陽性40242陰性52330HPVDNA分型陽性389陰性1013

表3高危型HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA分型檢測宮頸病變的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值的比較(%)

項目敏感度特異度陽性陰性高危型HPVE6/E7mRNA檢測88.992.095.282.1HPVDNA分型79.259.180.956.5χ2值0.6195.3530.0790.287P值0.4310.0200.7790.591

2.4 ASC-US患者高級別宮頸病變診斷分析

25例患者的宮頸TCT結(jié)果為非典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)，高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測ASC-US患者高級別宮頸病變的敏感度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；兩組特異度比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4、表5。

表4高危型HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA分型檢測與病理學(xué)方法檢測ASC-US高級別宮頸病變比較(n)

項目病理學(xué)檢查陽性陰性合計高危型HPVE6/E7mRNA檢測陽性11213陰性21012高危型HPVE6/E7mRNA檢測陽性10717陰性358

表5高危型HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA分型檢測ASC-US高級別宮頸病變的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值的比較(%)

項目 敏感度 特異度 陽性 陰性高危型HPVE6/E7mRNA檢測84.683.384.683.3HPVDNA分型76.941.758.862.5χ2值0.37705.04203.13711.0461P值0.53920.02510.07720.3060

3 討論

宮頸癌是全球女性最常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，通過HPV DNA分型檢測判定感染的病毒類型[2]，但HPV DNA檢測方法不能判定宮頸HPV感染后是否發(fā)生病變[3]。高危型HPV是宮頸癌的首要致病因素已得到世界范圍內(nèi)的公認(rèn)，HPV 16、18型的感染是最常見的，其中E6/E7起關(guān)鍵作用[4]。許多研究者[5-7]認(rèn)為HPV E6/E7蛋白表達(dá)過程中反映其轉(zhuǎn)錄活性的E6/E7 mRNA能預(yù)測病情的發(fā)展。E6/E7蛋白協(xié)同導(dǎo)致人類細(xì)胞發(fā)生永生化，使中心體復(fù)制與細(xì)胞周期解偶聯(lián)，紡錘體功能受損，基因組缺失，促進(jìn)細(xì)胞惡變[8-9]。E6蛋白與細(xì)胞內(nèi)的E6相關(guān)蛋白形成復(fù)合物降解抑癌基因產(chǎn)物，E7蛋白則通過與過磷酸化的抑癌基因pRb結(jié)合，使pRb失活，影響G1期至S期的監(jiān)控點[10]。國外研究[11-13]發(fā)現(xiàn)，高危型HPV E6/E7的細(xì)胞存在異常中心體，而低危型HPV E6/E7的細(xì)胞中則無，可見高危型HPV E6/E7蛋白共同作用誘導(dǎo)中心體異常，導(dǎo)致多倍體細(xì)胞發(fā)生，促進(jìn)細(xì)胞惡變向腫瘤發(fā)展。

本研究旨在探討HPV E6/E7蛋白在宮頸病變篩查中的應(yīng)用，結(jié)果顯示高危型HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA分型檢測慢性宮頸炎及CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ及宮頸癌的檢測率無明顯差異，總檢出率分別為60.0%、61.7%。且這兩種方法檢測宮頸病變的靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但高危型HPV E6/E7 mRNA檢測特異度為83.3%，明顯高于HPV DNA分型檢測的41.7%。對于宮頸TCT顯示為ASC-US的患者，臨床多對其進(jìn)行HPV DNA分型檢測。既往研究[14]顯示HPV DNA分型檢測ASC-US患者亦會導(dǎo)致多數(shù)患者進(jìn)行不必要的陰道鏡下宮頸活組織檢查。本研究將高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測分別應(yīng)用于25例ASC-US患者，結(jié)果顯示高危型HPV E6/E7 mRNA檢測的特異度為83.3%，明顯高于HPV DNA分型檢測的41.7，與Matah等[15]研究結(jié)果一致?？梢姼呶Ｐ虷PV E6/E7 mRNA檢測具有更強的排除可疑或低度病變的能力，避免過度治療給患者帶來生理痛苦及精神負(fù)擔(dān)。而高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA在靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值方面的比較無差異，保證了對ASC-US高級病變的高識別能力，降低漏診率。

綜上所述，高危型HPV E6/E7 mRNA檢測有助臨床指導(dǎo)陰道鏡的合理使用，尤其對于ASC-US高級病變患者。但本選取的樣本量偏小，選取的樣本均為宮頸疾病患者，會導(dǎo)致高危型HPV E6/E7 mRNA檢出率較健康人群高，需要進(jìn)一步大樣本健康對照研究。

[1] 阿比丹·吐爾汗江,楊潤峰,王恬,等.人乳頭瘤病毒16型E6/E7基因shRNA真核表達(dá)載體構(gòu)建及其對人宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖及遷移能力的影響[J].腫瘤防治究,2014,41(5):392-396.

[2] Johansson C,Schwartz S.Regulation of human papillomavirus gene expression by splicing and polyadenylation[J].Nat Rev Microbiol,2013,11(4):239-251.

[3] Andersson E,Krrberg C,Rdberg T,etal.Type-dependent E6/E7 mRNA expression of single and multiple high-risk human papillomavirus infections in cervical neoplasia[J].J Clin Virol,2012,54(1):61.

[4] Kim TE,Kim HW,Lee KE.Distribution of HumanPapillomavirus 52 and 58 Genotypes,and Their Expressionof p16 and p53 in Cervical Neoplasia[J].Korean J Pathol,2014,48(1):24-29.

[5] Tjalma WA,Depuydt CE.Cervical cancer screening:which HPV test should be usedL1 or E6/E7[J].Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,2013,170(1):45-46.

[6] Argyri E,Tsimplaki E,Daskalopoulou D,etal.E6/E7 mRNA expression of high-risk HPV types in 849 Greek women[J].Anticancer Res,2013,33(9):4007-4011.

[7] Broccolo F,Fusetti L,Rosini S,etal.Comparison of oncogenic HPV type-specific viral DNA load and E6/E7 mRNA detection in cervical samples:results from a multicenter study[J].J Med Virol,2013,85 (3):472-482.

[8] Jaisamrarn U,Castellsagué X,Garland SM,etal.Natural history ofprogression of HPV infection to cervical lesion or clearance:analysis of the control arm of the large,randomised PATRICIA study[J].PLoS ONE,2013,8(11):e79260.

[9] Cubie HA,Canham M,Moore C,etal.Evaluation of commercial HPV assays in the context of post-treatment follow-up:Scottish Test of Cure Study (STOCS-H)[J].J Clin Pathol,2014,67(6):458-463.

[10] Johansson H,Bjelkenkrantz K,Darlin L,etal.Presence of High-Risk HPV mRNA in Relation to Future High-Grade Lesions among High-Risk HPV DNA Positive Women with Minor Cytological Abnormalities[J].PLoS ONE,2015,10(4):e0124460.

[11] 張敏鴿.高危HPV與宮頸癌發(fā)生的相關(guān)性[J].實用癌癥雜志,2012,27(6):670-672.

[12] Munson E,Schroeder ER,Ross KC,etal.Effect of preanalytical processing of ThinPrep specimens on detection ofhigh-riskhuman papillomavirus by the Aptima HPV assay[J].J Clin Microbiol,2014,52(5):1448-1452.

[13] 莫凌昭,趙紅珂,李菲.高危型HPV E6、E7和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄在宮頸癌中的作用機制研究進(jìn)展[J].實用臨床醫(yī)藥雜志,2015,19(7):167-169.

[14] Nyg?rd M,R?ysland K,Campbell S,etal.Comparative effectiveness study on human papillomavirus detection methods used in the cervical cancer screening programme[J].BMJ Open,2014,4(1):e003460.

[15] Matah M,Sareen S.Detection of HPV by PCR-ANovelStepin the Prevention of Cancer Cervix[J].J Obstet Gynaecol India,2012,62(2):188-191.

ApplicationofhumanpapillomavirusE6/E7proteininscreeningcervicallesions

WEI Cai-ping

(DepartmentofGynecology,LiuzhouGeneralHospital,Liuzhou545006,Guangxi,China)

Objective：To explore the effect of human papilloma virus (HPV) E6/E7 protein in screening cervical lesions.MethodsA total of 70 patients with cervical lesions were selected and given cervical pathological examinations and ThinPrep liquid-based cytology (TCT) detection.The sensitivity and specificity of high-risk HPV E6/E7 mRNA detection and HPV DNA subtype detection were compared in detecting cervical cancer lesions and the high-degree cervical cancer lesions in patients with atypical squamous cells (ASC-US).ResultsThe total detection rates of high-risk HPV E6/E7 mRNA detection and HPV DNA subtype detection in detecting cervical lesions were 60.0%(42/70) and 67.1%(47/70),respectively.There was no significant difference between two methods in the detection rates of chronic cervicitis,cervical intraepithelial neoplasm (CIN) Ⅰ,CINⅡ～Ⅲ and cervical cancer (P>0.05).There was no significant difference in sensitivity,positive predictive value and negative predictive value between two methods in detecting cervical lesions (P>0.05),but high-risk HPV E6/E7 mRNA detection was notably higher than HPV DNA subtype detection in the specificity (P<0.05).In patients with ASC-US,high-risk HPV E6/E7 mRNA detection was notably higher than HPV DNA subtype detection in the specificity (P<0.05).ConclusionCompared with HPV DNA subtype detection,high-risk HPV E6/E7 mRNA detection is stronger in specificity in predicting cervical lesions,which is especially more definite in the distribution management of patients diagnosed as ASC-US by TCT.

Human papilloma virus;Cervical lesion;Atypical squamous cell;ThinPrep liquid-based cytology

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.05.006

2017-01-05

魏彩平(1981-)，女，主治醫(yī)師。E-mail：alym41@sina.com

時間： 2017-10-10 02∶27

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171010.0227.014.html

1005-3697(2017)05-0670-03

R373.9

A

(學(xué)術(shù)編輯李均)

本刊網(wǎng)址：http：//www.nsmc.edu.cn作者投稿系統(tǒng)http：//noth.cbpt.cnki.net郵箱xuebao@nsmc.edu.cn