施學(xué)麗，郭超峰，夏猛

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)科技處，南寧530020；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院國(guó)家藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)辦公室，南寧 530023；3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南寧 530020）

·實(shí)驗(yàn)研究·

基于反向分子對(duì)接技術(shù)研究桂枝湯調(diào)和營(yíng)衛(wèi)的潛在作用靶點(diǎn)

施學(xué)麗1＊，郭超峰2#，夏猛3

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)科技處，南寧530020；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院國(guó)家藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)辦公室，南寧 530023；3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南寧 530020）

目的：基于經(jīng)方的“方證相應(yīng)”關(guān)系和反向分子對(duì)接技術(shù)研究桂枝湯調(diào)和營(yíng)衛(wèi)的潛在作用靶點(diǎn)。方法：通過(guò)文獻(xiàn)檢索獲得桂枝湯相關(guān)的活性成分，采用PharmMapper Server對(duì)活性成分進(jìn)行反向分子對(duì)接，依據(jù)對(duì)接分?jǐn)?shù)排序發(fā)現(xiàn)桂枝湯的潛在受體，通過(guò)AutoDock Vina進(jìn)行正向分子對(duì)接試驗(yàn)考察配體與受體分子之間的親和力。然后選取75只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和桂枝湯高、中、低劑量組（12、8、4 g/kg），每組15只，除正常組外的其余各組大鼠均復(fù)制營(yíng)衛(wèi)不和模型；成模后，各組大鼠每天ig給藥1次，連續(xù)5 d；結(jié)束給藥后檢測(cè)大鼠脂肪組織和肌肉組織中11β-羥類(lèi)固醇脫氫酶1型（11β-HSD1）表達(dá)水平。結(jié)果：對(duì)桂枝湯的活性成分進(jìn)行反向分子對(duì)接發(fā)現(xiàn)11β-HSD1為頻繁出現(xiàn)的受體，正向?qū)釉囼?yàn)證實(shí)烏拉爾甘草皂苷b、甘草次酸、生胃酮等活性成分與11β-HSD1有較高的親和力。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠脂肪組織和肌肉組織中11β-HSD1的表達(dá)水平較正常組大鼠升高（P＜0.05）；桂枝湯高劑量組大鼠脂肪組織和肌肉組織中11β-HSD1的表達(dá)水平較模型組降低（P＜0.05）。結(jié)論：桂枝湯調(diào)和營(yíng)衛(wèi)的機(jī)制與11β-HSD1有一定的相關(guān)性；應(yīng)用反向分子對(duì)接技術(shù)可以為“方證相應(yīng)”關(guān)系的研究提供一條可行的技術(shù)途徑。

桂枝湯；反向分子對(duì)接；11β-羥類(lèi)固醇脫氫酶1型；方證關(guān)系

ABSTRACTOBJECTIVE：To study the potential targets of Guizhi decoction regulating Ying and Wei based on“correspondence between formulation and syndrome”relationship and reverse molecular docking technology.METHODS：Active ingredients related to Guizhi decoction were obtained by literature retrievals，and PharmMapper Server was used for reverse molecular docking for active ingredients.The potential receptors of Guizhi decoction were found on the basis of docking scores，then AutoDock Vina was conducted for positive molecular docking test to observe the affinity between the ligand and the receptor molecule.75 rats were randomly divided into normal group，model group，Guizhi decoction high-dose，medium-dose，low-dose groups（12，8，4 g/kg），15 in each group.Except for normal group，rats in other groups were induced for models with disharmony between Ying and Wei.After modeling，rats were intragastrically administrated once a day，for 5 d.After administration，11β-HSD1 expression levels in adipose tissue and muscle tissue of rats were detected.RESULTS：Reverse molecular docking for active ingredients of Guizhi decoction found that 11β-HSD1 was the frequent receptor，and positive docking test confirmed that uralsaponin b，glycyrrhetnic acid and carbenoxolone and so on had higher affinity with 11β-HSD1.Results of animal test showed，compared with normal group，11β-HSD1 expression levels in adipose tissue and muscle tissue in model group were increased（P＜0.05）；and compared with model group，11β-HSD1 expression levels in adipose tissue and muscle tissue in Guizhi decoction high-dose group were decreased（P＜0.05）.CONCLUSIONS：Guizhi decoction regulating Ying and Wei has certain correlation with 11β-HSD1，while the reverse molecular docking technology can provide a feasible technical way to study“correspondence between formulation and syndrome”relationship.

KEYWORDSGuizhi decoction；Reverse molecular docking；11 β-HSD1；Relationship between formulation and syndrome

中醫(yī)臨床實(shí)踐證實(shí)，經(jīng)方的方與證之間具有比較確定的對(duì)應(yīng)關(guān)系，對(duì)“方證相應(yīng)”關(guān)系的研究可以從兩方面進(jìn)行：一方面是從“證”切入，以證為研究對(duì)象，從證的實(shí)質(zhì)、客觀化、標(biāo)準(zhǔn)化以及動(dòng)物模型等方向進(jìn)行；另一方面是從“方”的角度切入，以“方”（藥物）測(cè)“證”的研究思路進(jìn)行。

分子對(duì)接是依據(jù)配體與受體作用的“鎖-鑰原理”，模擬小分子配體與受體生物大分子相互識(shí)別的過(guò)程，主要包括靜電作用、氫鍵作用、疏水作用、范德華作用等。經(jīng)計(jì)算，可以預(yù)測(cè)兩者間的結(jié)合模式和親和力。通過(guò)分子對(duì)接為已知的疾病靶點(diǎn)篩選有效的化合物為正向分子對(duì)接技術(shù)，常在疾病機(jī)制和靶點(diǎn)明確的情況下應(yīng)用，如通過(guò)分子對(duì)接研究淫羊藿中所含的雌激素樣作用成分[1]、葛根中所含有的改善胰島素抵抗的物質(zhì)成分[2]等。反過(guò)來(lái)，通過(guò)分子對(duì)接技術(shù)為已知的有效成分篩選作用靶點(diǎn)為反向分子對(duì)接技術(shù)，即以小分子化合物（天然產(chǎn)物等化合物）為探針，在已知結(jié)構(gòu)的靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)搜尋可能與之結(jié)合的生物大分子，通過(guò)空間和能量匹配相互識(shí)別形成分子復(fù)合物，進(jìn)而預(yù)測(cè)藥物潛在的作用靶點(diǎn)[3]。反向分子對(duì)接技術(shù)在中醫(yī)藥領(lǐng)域中常用來(lái)預(yù)測(cè)中藥有效成分的潛在靶點(diǎn)，如對(duì)丹參醇A、丹參酮ⅡB、異鼠李素等潛在作用靶點(diǎn)的研究[4-6]。

應(yīng)用反向分子對(duì)接技術(shù)研究經(jīng)方的方證關(guān)系的文獻(xiàn)尚少。鑒于經(jīng)方的“證”研究困難度較大，筆者認(rèn)為可以依據(jù)經(jīng)方的方證之間相對(duì)確定的對(duì)應(yīng)關(guān)系，從“方”（藥物）的研究角度出發(fā)，運(yùn)用反向分子對(duì)接技術(shù)篩選經(jīng)方所含活性成分的作用靶點(diǎn)，然后通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)考察這些靶點(diǎn)與“證”的相關(guān)性，以之反推“證”的內(nèi)部發(fā)生機(jī)制，這不失為一條較好的研究途徑。在本研究中，筆者應(yīng)用反向分子對(duì)接技術(shù)篩選桂枝湯活性成分的作用靶點(diǎn)，又考慮到在臨床應(yīng)用中桂枝湯為治療營(yíng)衛(wèi)不和的專(zhuān)方，所以通過(guò)復(fù)制營(yíng)衛(wèi)不和大鼠模型來(lái)考察篩選出的靶點(diǎn)與桂枝湯的相關(guān)性，為進(jìn)一步研究桂枝湯調(diào)和營(yíng)衛(wèi)的藥效機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Multiskan MK3型酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Labsystems公司）；MIKRO 22R型低溫冷凍離心機(jī)（德國(guó)Hettich公司）；VE-180型電泳儀、VE-186型轉(zhuǎn)膜儀（上海天能公司）；610C型凝膠成像儀（北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司）。

1.2 藥材與試劑

桂枝湯組方中的藥材均購(gòu)自廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院；兔源11β-羥類(lèi)固醇脫氫酶1型（11β-HSD1）抗體試劑盒（英國(guó)Abcam公司，批號(hào)：GR121826-9）；磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）、HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體（北京中山金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：16AF-0408、127760、124227）；Super ECL Plus升級(jí)版超敏發(fā)光液（北京普利萊基因技術(shù)公司）；Western及IP細(xì)胞裂解液（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠75只，♂，8周齡，體質(zhì)量240～250 g，購(gòu)于北京華阜康生物科技股份有限公司（動(dòng)物合格證號(hào)：11401300036171）。

2 方法

2.1 藥物制備

取桂枝、白芍、甘草、生姜（切片）、大棗（剖開(kāi)）按原方比例（9∶9∶6∶9∶9）混合，加入5倍蒸餾水浸泡60 min，快速加熱至沸騰，然后保持微沸狀態(tài)15 min，趁熱抽濾，收集濾液；剩余藥渣加入3倍蒸餾水，浸泡30 min，快速加熱至沸，微沸10 min，趁熱抽濾。合并2次濾液，水浴濃縮至含生藥量為1 g/mL的藥液，4℃儲(chǔ)存，備用。

2.2 桂枝湯相關(guān)活性成分的文獻(xiàn)檢索

桂枝湯活性成分相關(guān)文獻(xiàn)檢索截止到2016年。以“桂枝湯”和（或）“有效成分”“活性成分”“活性物質(zhì)”“藥效物質(zhì)”等術(shù)語(yǔ)組合為檢索主題詞，在中國(guó)知網(wǎng)上進(jìn)行中文文獻(xiàn)檢索，共檢索得108篇文獻(xiàn)，其中有效文獻(xiàn)50篇；以“Guizhi Decoction”“Guizhi Tang”等為檢索詞，在PubMed上進(jìn)行外文文獻(xiàn)檢索，共檢索得107篇文獻(xiàn)，剔除與中國(guó)知網(wǎng)重復(fù)的18篇有效文獻(xiàn)，得到有效文獻(xiàn)8篇。在此檢索基礎(chǔ)上參考《中藥大詞典》等資料，綜合篩選桂枝湯的活性成分。

2.3 活性成分的反向分子對(duì)接與正向分子對(duì)接驗(yàn)證試驗(yàn)

PharmMapper Server是反向分子對(duì)接的免費(fèi)網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器，該服務(wù)器采用了藥效團(tuán)匹配法，通過(guò)對(duì)Targetbank、Drugbank、Binding DB和PDTD四大數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行快速檢索而獲得藥物靶點(diǎn)信息，內(nèi)含7 302個(gè)藥效團(tuán)模型，涵蓋了110種臨床適應(yīng)證[7]。從PubChem上下載桂枝湯相關(guān)活性成分的標(biāo)準(zhǔn)延時(shí)格式文件（.sdf），然后將.sdf格式文件上傳到PharmMapper Server上進(jìn)行反向分子對(duì)接。對(duì)PharmMapper Server篩選出的潛在靶點(diǎn)根據(jù)對(duì)接分?jǐn)?shù)進(jìn)行排序。從蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)（PBD）中下載潛在靶點(diǎn)的蛋白結(jié)構(gòu)，去除自帶配體，加氫及修正處理，然后應(yīng)用PyRx 0.8軟件的AutoDock Vina模塊，參數(shù)采用默認(rèn)值，以已知的潛在靶點(diǎn)抑制劑為參照進(jìn)行驗(yàn)證性的正向分子對(duì)接試驗(yàn)。分子對(duì)接的配體蛋白質(zhì)復(fù)合體的三維結(jié)構(gòu)采用Pymol軟件進(jìn)行分析。

2.4 動(dòng)物模型驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

2.4.1 分組、造模與給藥 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組，分別為正常組、模型組和桂枝湯高、中、低劑量組，每組15只。除正常組外，其余各組大鼠均采用改進(jìn)的寒熱交替刺激法復(fù)制營(yíng)衛(wèi)不和大鼠模型[8-9]：先將各組大鼠分次放入特制鐵絲籠中，每籠5只，將籠子放入－（20±1）℃冰柜中20 min，中間每隔10 min觀察1次。取出大鼠后，放常規(guī)飼養(yǎng)室[（25±1）℃]飼養(yǎng)。4 h后進(jìn)行溫?zé)岽碳?，即將各組大鼠分次放入鐵絲籠中，每籠5只，將籠子放入（40±1）℃恒溫箱中15 min，中間每隔5 min觀察1次。取出大鼠后繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng)。如此每天寒、熱交替刺激1次，連續(xù)6 d。以大鼠出現(xiàn)蜷縮、扎堆、發(fā)抖、背毛凌亂、汗出明顯等癥狀為造模成功標(biāo)志。造模后，桂枝湯高、中、低劑量組大鼠ig桂枝湯煎劑（中藥劑量按成人與大鼠折算系數(shù)為6.25，大鼠高、中、低劑量按成人劑量的3、2、1倍來(lái)計(jì)算，相當(dāng)于桂枝湯生藥量12、8、4 g/kg），正常組和模型組大鼠ig等體積蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)5 d。

2.4.2 脂肪組織和肌肉組織中11β-HSD1蛋白表達(dá)測(cè)定 采用Western blot法測(cè)定脂肪組織和肌肉組織中11β-HSD1蛋白表達(dá)。提取脂肪組織和肌肉組織中的總蛋白，采用二喹啉甲酸（BCA）法測(cè)蛋白濃度，取蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后轉(zhuǎn)聚偏氟乙烯（PVDF）膜上；TBST洗膜后，加入封閉液，室溫封閉1 h；去掉封閉液，用TBST洗3次，每次8 min；加入用3%胎牛血清（BSA）溶液稀釋的一抗溶液，4℃孵育過(guò)夜；去掉一抗溶液，用TBST洗3次，每次8 min；加入用3%BSA溶液稀釋的辣根酶標(biāo)記的二抗稀釋液，室溫孵育1 h；去掉二抗溶液，用TBST洗3次，每次8 min；化學(xué)發(fā)光、檢測(cè)。采用Image J軟件分析條帶灰度值，以目的條帶灰度值與內(nèi)參GAPDH條帶灰度值的比值表示目的蛋白的表達(dá)水平。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用單因素方差分析，同時(shí)進(jìn)行Levene方差齊性檢驗(yàn)，當(dāng)方差齊時(shí)采用LSD檢驗(yàn)或SNK檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較；方差不齊時(shí)采用近似F檢驗(yàn)Welch或Brown-Forsythe法進(jìn)行分析，采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)或Dunnett’s C檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 桂枝湯有效成分反向分子對(duì)接的作用靶點(diǎn)篩選與正向分子對(duì)接試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

采用反向分子對(duì)接技術(shù)對(duì)文獻(xiàn)檢索后得到的與桂枝湯相關(guān)的104個(gè)活性成分進(jìn)行潛在的作用靶點(diǎn)篩選，結(jié)果提示11β-HSD1是桂枝湯重要的潛在作用靶點(diǎn)。

通過(guò)反向分子對(duì)接程序發(fā)現(xiàn)桂枝湯中74個(gè)活性成分（配體）與11β-HSD1（受體）具有親和性；依據(jù)對(duì)接分?jǐn)?shù)排序選擇排前6位的活性成分（以已知的11β-HSD1抑制劑生胃酮為參照）與11β-HSD1進(jìn)行正向分子對(duì)接試驗(yàn)，結(jié)果配體與受體分子間的親和力在－12.2～－9.8 kcal/mol之間（1 kcal＝4.186 8 kJ）。親和力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1，配體與受體對(duì)接后復(fù)合體的三維結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

圖1中活性成分與11β-HSD1氨基酸殘基間的作用鍵主要為氫健。通過(guò)桂枝湯活性成分與11β-HSD1的相互作用分析發(fā)現(xiàn)，烏拉爾甘草皂苷b與11β-HSD1作用的氨基酸殘基主要為 ILE46、GLY47、ASN119、SER170、LYS187、LEU215、THR220和 THR222；甘草次酸與 11 β-HSD1作用的氨基酸殘基主要為MET179；沒(méi)食子酰芍藥苷與11β-HSD1作用的氨基酸殘基主要為L(zhǎng)YS44、ILE46、ASN119、SER170 和 LYS187；白樺脂酸與 11 β-HSD1作用的氨基酸殘基主要為T(mén)HR220；麥珠子酸與11β-HSD1作用的氨基酸殘基主要為T(mén)HR220；苯甲酰芍藥苷與11β-HSD1作用的氨基酸殘基主要為T(mén)HR124、SER170、ALA172、TYR183、THR220和THR222。

表1 桂枝湯活性成分與11β-HSD1的親和力測(cè)定結(jié)果Tab 1 Determination results of the affinity of active ingredients in Guizhi decoction and 11β-HSD1

圖1 活性成分與11β-HSD1的配體對(duì)接后的復(fù)合體三維結(jié)構(gòu)圖Fig 1 Complex three-dimensional structure after the active ingredients docked with 11β-HSD1

3.2 大鼠脂肪組織和肌肉組織中11β-HSD1蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠脂肪組織和肌肉組織中11β-HSD1蛋白水平均顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，桂枝湯各劑量組大鼠脂肪組織中11β-HSD1蛋白水平均不同程度地降低，其中桂枝湯高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；桂枝湯高、中劑量組大鼠肌肉組織中11β-HSD1蛋白水平均不同程度地降低，其中桂枝湯高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。蛋白表達(dá)電泳圖見(jiàn)圖2，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

4 討論

圖2 各組大鼠脂肪組織、肌肉組織中11β-HSD1蛋白表達(dá)電泳圖Fig 2 Electrophoresis charts of 11β-HSD1 protein expression in adipose issue and muscle tissue of rats in each group

表2 各組大鼠脂肪組織、肌肉組織中11β-HSD1蛋白表達(dá)測(cè)定結(jié)果（x±s，n＝15）Tab 2 Determination results of the 11β-HSD1 protein expressions in adipose tissue and muscle tissue of rats in each group（x±s，n＝15）

11β-HSD1屬短鏈脫氫/還原酶蛋白超家族，廣泛存在于人體各組織中（包括脂肪組織及肝組織）。其在絕大部分的組織和完整細(xì)胞中主要以氧化還原酶的形式存在，因其可在糖皮質(zhì)激素受體前催化無(wú)活性的可的松轉(zhuǎn)化為有活性的氫化可的松，因此在組織水平上放大了局部糖皮質(zhì)激素的作用[10-11]。研究認(rèn)為，11β-HSD1參與了代謝綜合征（如肥胖、胰島素抵抗、2型糖尿病、高血壓等）的病理生理環(huán)節(jié)[12]。通過(guò)抑制11β-HSD1活性可有效改善上述病癥，對(duì)11β-HSD1活性變化和調(diào)控機(jī)制的深入研究可能為代謝綜合征相關(guān)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如腦血管病、認(rèn)知功能異常等的治療帶來(lái)新的突破。

桂枝湯的藥效機(jī)制與11β-HSD1之間的相關(guān)性尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。筆者通過(guò)反向分子對(duì)接技術(shù)發(fā)現(xiàn)11β-HSD1是桂枝湯的潛在靶點(diǎn)，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)營(yíng)衛(wèi)不和模型大鼠脂肪組織和肌肉組織中11β-HSD1蛋白的表達(dá)與正常大鼠比較顯著增強(qiáng)，而高、中劑量桂枝湯給藥后可以下調(diào)營(yíng)衛(wèi)不和模型大鼠脂肪組織和肌肉組織中11β-HSD1的表達(dá)，因而筆者認(rèn)為營(yíng)衛(wèi)不和的內(nèi)部發(fā)生機(jī)制與11β-HSD1表達(dá)具有關(guān)聯(lián)性。

臨床濫用糖皮質(zhì)激素引起的癥狀符合營(yíng)衛(wèi)不和的臨床表現(xiàn)，用桂枝湯治療效果較好[13-14]。過(guò)量的糖皮質(zhì)激素參與了營(yíng)衛(wèi)不和的形成，脂肪組織、肌肉組織內(nèi)的糖皮質(zhì)激素升高可以通過(guò)受體機(jī)制上調(diào)11β-HSD1的表達(dá)，而11β-HSD1的過(guò)度表達(dá)又加強(qiáng)了局部糖皮質(zhì)激素受體的激活。11β-HSD1的天然抑制劑有甘草酸、甘草次酸及其衍生物生胃酮[15-17]、膽汁酸[18]、黃酮/羥基黃酮[19]、大黃素[20]等。其中甘草酸及其衍生物生胃酮是11β-HSD1的非選擇性抑制劑。甘草酸可削弱糖皮質(zhì)激素對(duì)于胰島素的拮抗作用，導(dǎo)致肝對(duì)胰島素的敏感性增加；生胃酮可以降低肝內(nèi)氫化可的松的濃度，增加胰島素的敏感性。而甘草次酸等11β-HSD1抑制劑為桂枝湯所含有效成分，從活性成分方面也佐證了11β-HSD1與營(yíng)衛(wèi)不和的相關(guān)性。

以上研究也提示，雖然桂枝湯組方簡(jiǎn)單，但其活性成分卻十分復(fù)雜。有研究發(fā)現(xiàn)，僅桂枝湯揮發(fā)油中檢測(cè)出的化學(xué)成分就達(dá)70多個(gè)[21]。復(fù)雜的活性成分給篩選桂枝湯的有效作用靶點(diǎn)造成了很大困難，而反向分子對(duì)接技術(shù)可以為我們提供新的高效篩選手段，為經(jīng)方“方證相應(yīng)”關(guān)系的研究提供了一條可行的技術(shù)途徑，對(duì)中藥復(fù)方的藥效機(jī)制研究也具有較大的借鑒意義。

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Study on the Potential Targets of Guizhi Decoction Regulating Ying and Wei Based on Reverse Molecular Docking Technology

SHI Xueli1，GUO Chaofeng2，XIA Meng3
（1.Dept.Science and Technology，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530020，China；2.National Drug Clinical Trials Office，the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China；3.College of Basic Medicine，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530020，China）

R285

A

1001-0408（2017）25-3479-05

2017-04-28

2017-06-15）

（編輯：林 靜）

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.25.07

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.81360514）；廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳中醫(yī)藥普通課題（No.GZPT13-15）；廣西壯族自治區(qū)教育廳高?？蒲许?xiàng)目（No.YB2014180）

＊副教授，碩士生導(dǎo)師。研究方向：中醫(yī)藥防治情志病。電話：0771-4733953。E-mail：shi.lily@163.com

#通信作者：副教授，碩士生導(dǎo)師。研究方向：中醫(yī)經(jīng)方理論與應(yīng)用。電話：0771-5848765。E-mail：guochaofeng96@163.com