劉華巖 王軍

芍藥苷對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)和趨化性的影響

劉華巖 王軍

目的 探討芍藥苷(PF)對(duì)β-淀粉樣蛋白(Aβ)1-42誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)和趨化性的影響。方法 原代培養(yǎng)大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，分別用0、5、25、50 μmol/LPF預(yù)處理細(xì)胞后，采用CCK-8法和LDH法檢測(cè)細(xì)胞毒性。將培養(yǎng)的細(xì)胞分為空白對(duì)照組(正常培養(yǎng)基)、陽(yáng)性對(duì)照組(Aβ1-42處理細(xì)胞)和實(shí)驗(yàn)組(PF+Aβ1-42處理細(xì)胞)。采用ELISA法檢測(cè)各組腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和趨化因子配體1(CXCL1)、趨化因子配體2(CCL2)的表達(dá)水平。采用Transwell小室進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞體外趨化實(shí)驗(yàn)，觀(guān)察各組細(xì)胞趨化遷移情況。結(jié)論 培養(yǎng)大鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞純度達(dá)90%以上，CCK-8法和LDH法測(cè)定均顯示PF對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒作用(均P>0.05)。PF可抑制Aβ1-42誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞分泌促炎性介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6和趨化因子CXCL1、CCL2(均P<0.01)。同時(shí)，PF可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞向Aβ1-42的趨化(均P<0.05)。結(jié)論 PF可抑制Aβ1-42誘導(dǎo)的嚙齒動(dòng)物小膠質(zhì)細(xì)胞生成促炎性介質(zhì)和趨化因子，并抑制小膠質(zhì)細(xì)胞向Aβ1-42趨化遷移，提示PF可能為阿爾茨海默病的治療提供新的契機(jī)。

阿爾茨海默病；β-淀粉樣蛋白；小膠質(zhì)細(xì)胞；炎癥；趨化

阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一種常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，主要以記憶力下降等認(rèn)知功能障礙為特點(diǎn)。AD主要病理機(jī)制為腦內(nèi)β-淀粉樣蛋白(beta-amyloid，Aβ)沉積。小膠質(zhì)細(xì)胞在A(yíng)D的發(fā)展中具有雙重作用[1]。防止Aβ介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度活化和遷移已被認(rèn)為是延緩AD進(jìn)展的潛在手段。芍藥苷(paeoniflorin，PF)是一種水溶性單萜苷[2]，具有抗炎和抗氧化能力且無(wú)明顯不良反應(yīng)及毒性作用[3]。研究證實(shí)PF在腦缺血及神經(jīng)退行性疾病中具有神經(jīng)保護(hù)作用。目前有關(guān)PF對(duì)Aβ刺激下小膠質(zhì)細(xì)胞的炎性反應(yīng)和趨化性的作用知之甚少。本研究采用體外實(shí)驗(yàn)Aβ1-42刺激小膠質(zhì)細(xì)胞模擬AD環(huán)境，旨在探討PF對(duì)Aβ1-42刺激小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)和趨化性的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 新出生當(dāng)天SD大鼠，雌雄不限，體重約8 g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物部提供。

1.2 主要儀器及試劑 包括共聚焦顯微鏡(OLYMPUS公司)、倒置相差顯微鏡(廈門(mén)麥克奧迪醫(yī)療診斷系統(tǒng)有限公司)、酶標(biāo)儀(美國(guó)伯騰儀器有限公司)、CO2培養(yǎng)箱(上海力申科學(xué)儀器有限公司)、DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司)、PF(大連美侖生物技術(shù)有限公司)、Aβ1-42(北京博奧森生物公司)、CD11b抗體(Abcam公司)、CCK-8試劑盒(碧云天生物技術(shù)有限公司)、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒(南京建成生物工程研究所)、ELISA試劑盒(USCN公司、Boster公司)。

1.3 方法

1.3.1 大鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)：參照文獻(xiàn)方法[4]分離培養(yǎng)原代小膠質(zhì)細(xì)胞。將新生SD大鼠腦組織剪碎后用0.25%(質(zhì)量濃度)胰酶消化30 min，利用DMEM培養(yǎng)基(含10% FBS)置于5%(體積分?jǐn)?shù))CO2、37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)至第5天時(shí)，密度可達(dá)70%，進(jìn)行固定，并鑒定純度。第一代細(xì)胞生長(zhǎng)至5～6 d時(shí)，進(jìn)行傳代處理。加入胰酶消化細(xì)胞后，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，收集小膠質(zhì)細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。純度鑒定：將細(xì)胞固定于4%(質(zhì)量濃度)多聚甲醛中15 min。PBS洗3次后，滴加0.1%(質(zhì)量濃度)TritonX-100室溫孵育30 min。PBS洗3次后，滴加山羊血清室溫15 min。滴加抗體CD11b(1∶50稀釋)，4℃過(guò)夜。PBS洗3次后，滴加Cy3標(biāo)記二抗(1∶200稀釋)，室溫60 min。PBS洗3次后，滴加DAPI以復(fù)染細(xì)胞核。PBS洗3次后，滴加抗熒光淬滅劑，封片，于激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察，400倍鏡下拍照。

1.3.2 細(xì)胞毒性檢測(cè)：(1)PF的配制：稱(chēng)取4.8 mg的PF粉末完全溶解于1 mL DMSO中，其濃度為0.01 mol/L，置4℃冰箱備用。因PF處理不同類(lèi)型細(xì)胞所需濃度差異很大[5-6]，故本研究用不同濃度PF處理小膠質(zhì)細(xì)胞，以?xún)?yōu)化PF的實(shí)驗(yàn)濃度。(2)CCK-8法細(xì)胞毒性檢測(cè)：將細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔2×103個(gè)細(xì)胞，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，分為4組，分別用0、5、25、50 μmol/LPF處理細(xì)胞24h，加入10 μmol/L CCK-8溶液繼續(xù)培養(yǎng)1 h，利用酶標(biāo)儀測(cè)定其450 nm下吸光度〔D(λ)450 nm〕值。(3)LDH法細(xì)胞毒性檢測(cè)：按上述步驟(2)方法接種細(xì)胞、分組以及PE處理細(xì)胞24 h，離心留取上清，按照試劑盒說(shuō)明加樣，混勻后37℃水浴15 min。加入2,4-二硝基苯肼，混勻后再置37℃水浴15 min。加入0.4 mol/L NaOH溶液，混勻后室溫放置5 min。利用酶標(biāo)儀檢測(cè)其D(λ)450 nm值。

1.3.3 纖維化Aβ的制備及分組：將Aβ1-42肽首先充分溶于DMSO，濃度為10 mmol/L，混勻，加入DPBS，終濃度為250 μmol/L，充分混勻。置于37℃溫箱中孵育1周，以充分形成纖維化。使用前用培養(yǎng)液稀釋成10 μmol/L。分為3組：空白對(duì)照組(正常培養(yǎng)基)、陽(yáng)性對(duì)照組(Aβ1-42組：10 μmol/L Aβ1-42處理細(xì)胞24 h)和實(shí)驗(yàn)組(PF+Aβ1-42組：50 μmol/L PF處理細(xì)胞24 h，然后10 μmol/L Aβ1-42處理細(xì)胞24 h)。

1.3.4 細(xì)胞因子和趨化因子檢測(cè)：采用ELISA法分別檢測(cè)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、IL-6、趨化因子配體1(chemokineC-X-C motifligand 1，CXCL1)和趨化因子配體2(chemokineC-C motifligand 2，CCL2)。以TNF-α檢測(cè)為例介紹操作過(guò)程。

檢測(cè)前將所有試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫，按照說(shuō)明書(shū)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)稀釋液A和B、檢測(cè)溶液A和B、濃洗滌液和底物溶液。操作步驟：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔、空白孔。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔7孔，依次加入100 μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，余孔加入稀釋后的待測(cè)樣品100 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育2 h。棄去液體，甩干。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1 h。棄去孔內(nèi)液體，每孔用350 μL的洗滌液洗滌，浸泡2 min，吸除酶標(biāo)板內(nèi)的液體，重復(fù)洗板3次。每孔加檢測(cè)溶液B工作液100 μL，加上覆膜，37℃溫育30 min。棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次。每孔加底物溶液90 μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃避光顯色。每孔加入終止溶液50 μL終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。立即用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔D(λ)450 nm值，取各復(fù)孔平均值，使用Curve expert 1.3軟件進(jìn)行分析，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算各待測(cè)樣品細(xì)胞因子及趨化因子水平。

1.3.5 小膠質(zhì)細(xì)胞體外趨化實(shí)驗(yàn)：用Transwell小室(孔徑8 μm)進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，棄培養(yǎng)基，用PBS洗3次，胰酶消化，待細(xì)胞將要從培養(yǎng)瓶壁脫落時(shí)，倒去多余的胰酶。加入無(wú)血清培養(yǎng)基，將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上吹落并分散成單細(xì)胞懸液。進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并稀釋成1×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液備用。將Transwell小室放入24孔板中，分為3組：空白對(duì)照組(Control組：下室為正常培養(yǎng)基)、陽(yáng)性對(duì)照組(Aβ1-42組：下室為用10 μmol/L Aβ1-42培養(yǎng)細(xì)胞24 h后的培養(yǎng)基)和實(shí)驗(yàn)組(PF+Aβ1-42組：50 μmol/L PF處理細(xì)胞24 h后，細(xì)胞移至上室，下室為用10 μmol/L Aβ1-42培養(yǎng)細(xì)胞24 h后的培養(yǎng)基)。分別取細(xì)胞懸液200 μL加入上室，細(xì)胞數(shù)均為5×104個(gè)/孔，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。取出Transwell小室，用PBS上下各沖洗1次；用棉簽擦去微孔膜上層細(xì)胞；多聚甲醛室溫下固定20 min，蘇木素染液染色5 min，蒸餾水沖洗。在200倍倒置顯微鏡下對(duì)遷移至微孔膜下層的細(xì)胞計(jì)數(shù)。每個(gè)樣本選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞，取均數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Bonferroni法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞純度鑒定 正常狀態(tài)下小膠質(zhì)細(xì)胞多為靜息狀態(tài)，貼壁生長(zhǎng)，呈長(zhǎng)形或三角形，胞體小，核小而致密，胞質(zhì)少，突起細(xì)長(zhǎng)而呈高度分枝狀(圖1A)。用CD11b/DAPI免疫熒光染色可見(jiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞純度達(dá)90%以上(圖1B)。

圖1 大鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)(A，倒置相差顯微鏡)與純度鑒定〔B，免疫熒光染色，CD11b陽(yáng)性(紅染)為小膠質(zhì)細(xì)胞，DAPI(藍(lán)染)為細(xì)胞核復(fù)染〕

2.2 PF對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞毒性影響 CCK-8法和LDH法測(cè)定結(jié)果均顯示，5、25、50 μmol/L PF預(yù)處理組D(λ)450 nm值與0 μmol/L PF組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(FCCK-8法=0.29，P>0.05；FLDH法=1.38，P>0.05)，表明即使是在50 μmol/L高濃度情況下，PF對(duì)原代小膠質(zhì)細(xì)胞亦無(wú)明顯細(xì)胞毒作用。本文選擇50 μmol/L進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。具體結(jié)果見(jiàn)圖2。

注：A：CCK-8法；B：LDH法；PF：芍藥苷，圖3、4、6同 圖2 不同PF濃度對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活力的影響(n=5)

2.3 PF抑制Aβ1-42引起的小膠質(zhì)細(xì)胞分泌促炎性介質(zhì) 空白對(duì)照組、Aβ1-42組和PF+Aβ1-42組間比較，TNF-α、IL-1β和IL-6表達(dá)水平均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(FTNF-α=82.34，P<0.01；FIL-1β=44.86，P<0.01；FIL-6=39.42，P<0.01)。兩兩比較，Aβ1-42組小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的促炎性細(xì)胞因子較空白對(duì)照組增多(均P<0.01)，而PF可部分抑制由Aβ1-42引起的TNF-α、IL-1β和IL-6分泌增多(均P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.4 PF抑制Aβ1-42誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞分泌趨化因子 空白對(duì)照組、Aβ1-42組和PF+Aβ1-42組小膠質(zhì)細(xì)胞分泌的CXCL1和CCL2比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FCXCL1=81.84，P<0.01；FCCL2=68.45，P<0.01)。兩兩比較，Aβ1-42組小膠質(zhì)細(xì)胞分泌的CXCL1和CCL2水平較空白對(duì)照組升高(均P<0.01)，而PF可抑制由Aβ1-42引起的趨化因子分泌的增加(均P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)圖4。

注：TNF-α：腫瘤壞死因子α；IF-1β：白細(xì)胞介素-1β；IF-6：白細(xì)胞介素-6；Aβ：淀粉樣蛋白β，圖4～6同；與空白對(duì)照組比較，*P<0.01；與Aβ1-42組比較，#P<0.01 圖3 ELISA法檢測(cè)PF對(duì)Aβ1-42刺激下小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、IL-1β和IL-6的影響

注：CXCL1：趨化因子配體1；CCL2：趨化因子配體2；與空白對(duì)照組比較，*P<0.01；與Aβ1-42組比較，# P<0.01 圖4 ELISA法檢測(cè)PF對(duì)Aβ1-42刺激下小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生CXCL-1和CCL2的影響

2.5 PF抑制小膠質(zhì)細(xì)胞向Aβ1-42的趨化 空白對(duì)照組、Aβ1-42組和PF+Aβ1-42組小膠質(zhì)細(xì)胞向Aβ1-42遷移的能力比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=43.54，P<0.05)。與Aβ1-42組相比，PF預(yù)處理的小膠質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)出較弱的向Aβ1-42遷移的能力。具體結(jié)果見(jiàn)圖5、6。

圖5 倒置顯微鏡下觀(guān)察各組小膠質(zhì)細(xì)胞向Aβ1-42的趨化遷移(蘇木素染色，箭頭所示為蘇木素陽(yáng)性細(xì)胞)

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.01；與Aβ1-42組比較，#P<0.01 圖6 PF對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞向Aβ1-42趨化遷移的影響3討論

3 討論

AD是導(dǎo)致老年人癡呆的常見(jiàn)病因[7]，目前尚無(wú)有效的預(yù)防及治療辦法[8]。Aβ來(lái)源于β-和γ-分泌酶裂解的淀粉樣前體蛋白[9]。大量研究表明，Aβ水平的病理性升高促進(jìn)了腦內(nèi)Aβ低聚物的形成，導(dǎo)致突觸和/或神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的進(jìn)行性瓦解[10]。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的固有免疫細(xì)胞。一方面，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞能夠部分清除Aβ或Aβ-Aβ受體復(fù)合物，進(jìn)而降低Aβ的毒性；另一方面，聚集在神經(jīng)炎性斑塊的過(guò)度活化的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)持續(xù)產(chǎn)生神經(jīng)毒性因子，導(dǎo)致腦損傷進(jìn)一步加重[11]。因此，調(diào)控Aβ誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的活化狀態(tài)對(duì)延緩AD進(jìn)展有潛在作用。

芍藥屬植物作為傳統(tǒng)中草藥在國(guó)內(nèi)已被用于治療疼痛或炎性反應(yīng)疾病，對(duì)芍藥根化學(xué)成分的研究發(fā)現(xiàn)其具有多種生物活性的化合物，包括單萜苷、三萜類(lèi)、黃酮類(lèi)等[12]。PF是一種從芍藥根中分離出來(lái)的單萜苷，近年來(lái)一些學(xué)者致力于PF的神經(jīng)保護(hù)作用及作用機(jī)制的研究。研究表明，PF能夠減輕嚙齒動(dòng)物缺血模型的腦損傷[13]，并減輕谷氨酸或脂多糖引起的神經(jīng)元損傷[5,14]，抑制脂多糖誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度產(chǎn)生促炎性介質(zhì)[14]，證實(shí)了PF在缺血?jiǎng)游锬X內(nèi)對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞異常活化的抑制作用及神經(jīng)保護(hù)作用。另有早期研究證明PF能夠減輕6-羥基多巴胺誘發(fā)的神經(jīng)功能缺損[15]，提示PF在退行性疾病中亦具有神經(jīng)保護(hù)作用[16]。Wang等[6]通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)PF可明顯減輕Aβ25-35誘導(dǎo)的神經(jīng)元線(xiàn)粒體功能障礙，其在A(yíng)D的治療中具有潛力。值得注意的是，Zhong等[17]研究發(fā)現(xiàn)，給AD大鼠腹腔內(nèi)注射PF能明顯減輕記憶障礙和神經(jīng)元凋亡，表明PF在A(yíng)D治療中可能具有一定作用。本研究結(jié)果顯示，Aβ1-42可誘導(dǎo)嚙齒動(dòng)物小膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α、IL-1β和IL-6的過(guò)度產(chǎn)生，而這種作用可被PF所抑制。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示了PF對(duì)受Aβ低聚物刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞具有神經(jīng)保護(hù)作用。

研究證明，Aβ低聚物不僅誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)多的促炎性介質(zhì)，也可促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞分泌趨化因子[18-19]，進(jìn)而導(dǎo)致其向AD腦內(nèi)神經(jīng)炎性斑塊過(guò)度的聚集和趨化。CXCL1和CCL2等趨化因子水平的升高，使更多的小膠質(zhì)細(xì)胞加速向腦內(nèi)Aβ募集[20]。因此，降低小膠質(zhì)細(xì)胞的趨化性已被視為控制AD病情進(jìn)展的一種很有前景的策略。有研究證明PF對(duì)3T3-L1[21]和HT-29[22]細(xì)胞中的CCL2具有抑制作用。因此本研究探討了PF對(duì)Aβ刺激后小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生CCL2的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PF能夠減少由Aβ1-42刺激而導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)多的CCL2。此外，Zhang等[23]研究者發(fā)現(xiàn)，與年齡匹配的健康受試者相比，AD患者外周血單核細(xì)胞表達(dá)更高水平的CXCL1，且CXCL1水平的提高加強(qiáng)了單核細(xì)胞向Aβ肽的遷移，提示在A(yíng)D進(jìn)展中CXCL1能夠促進(jìn)細(xì)胞的趨化性。本研究證實(shí)PF預(yù)處理可抑制Aβ1-42刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞趨化因子的釋放，降低了小膠質(zhì)細(xì)胞的趨化性。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，PF預(yù)處理降低了Aβ誘導(dǎo)的嚙齒動(dòng)物小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度生成促炎性介質(zhì)和趨化因子，使小膠質(zhì)細(xì)胞趨化性降低，進(jìn)而可能發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。有關(guān)PF在A(yíng)D治療中的具體作用及其潛在機(jī)制，尚需今后進(jìn)一步研究。

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(本文編輯：時(shí)秋寬)

Effect of paeoniflorin on the Aβ1-42-induced inflammation and chemotaxis of microglia

LIUHuayan*，WANGJun.

*DepartmentofNeurology,TheFirstHospitalofChinaMedicalUniversity,ShenyangLiaoning110001,China

Email：Liuhy@cmu1h.com

Objective To investigate the effect of paeoniflorin (PF) on the beta-amyloid (Aβ)1-42-induced inflammation and chemotaxis of microglia. Methods Primary cultures of rat microglia were pretreated with 0, 5, 25, 50 μmol/L PF respectively. To determine the cytotoxic effect of PF on microglia, CCK-8 assay was performed, and the activity of LDH in culture supernatant was detected. Microglia were divided into three groups: a blank control group (normal culture medium), a positive control group (Aβ1-42-treated cells) and an experimental group (PF-pretreated and then Aβ1-42-treated cells). Levels of tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6, chemokine (C-X-C motif) ligand 1 (CXCL1) and chemokine (C-C motif) ligand 2 (CCL2) in the culture supernatant were determined by ELISA kits. Transwell inserts were used to determine the chemotactic migration of microgliainvitro. Results The purity of cultured microglia was more than 90%. PF exerted no significant cytotoxic effect on microglia viability according to CCK-8 assay and LDH assay, no statistical difference between groups (P>0.05) was found. PF suppressed Aβ1-42-induced secretion of proinflammatory mediators (TNF-α, IL-1β and IL-6) and chemokines (CXCL1 and CCL2) from microglia between the experimental group and the positive control group(P<0.01) . And PF inhibited microglial chemotaxis towards Aβ1-42(P<0.05) between the experimental group and the positive control group in the number of migrated cells. Conclusions The above findings suggest that PF reduce Aβ1-42-stimulated production of proinflammatory mediators and chemotactic factors from rodent microglia, as well as inhibit microglial chemotaxis towards Aβ1-42. This suggests that PF might provide a potential new therapeutic strategy for Alzheimer’s disease.

Alzheimer’s disease； beta-amyloid； microglia； inflammation；chemotaxis

10.3969/j.issn.1006-2963.2017.04.009

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81300939)；遼寧省科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目(2009225027)；遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20170541036)

110001中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

劉華巖，Email：liuhy@cmu1h.com

R743.9

A

1006-2963(2017)04-0276-06

2016-12-12)