單 莉，周海燕，何菊仙，王詠梅，邱洪濤

西北婦女兒童醫(yī)院婦產(chǎn)科 (西安 710068)

瘦素與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的相關(guān)性研究*

單 莉，周海燕△，何菊仙，王詠梅，邱洪濤

西北婦女兒童醫(yī)院婦產(chǎn)科 (西安 710068)

目的：觀察瘦素(Leptin)在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)患者血清及蛻膜組織中的表達(dá)，并探討其與ICP的相關(guān)性。方法：將80例肝功能正常ICP患者、80例肝功異常ICP患者及100例正常妊娠婦女 ( 對照組) 作為研究對象，采用放射免疫法和Western blot法檢測三組孕婦產(chǎn)前、產(chǎn)后、臍帶血血清及蛻膜組織中Leptin的表達(dá)水平。結(jié)果：兩組ICP患者產(chǎn)前血清Leptin表達(dá)水平明顯高于產(chǎn)后 (P<0．05)；肝功異常組產(chǎn)前血清Leptin表達(dá)水平及蛻膜組織Leptin表達(dá)水平明顯高于肝功正常組 (P <0．05)，兩組分別高于對照組 (P<0．05)；而產(chǎn)后血清及臍帶血Leptin表達(dá)水平三組間無明顯差異 (P>0．05)。肝功異常ICP組、肝功正常ICP組孕婦羊水糞染、胎兒窘迫、低體重兒發(fā)生率均較對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，且兩組間相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；新生兒窒息、產(chǎn)后出血發(fā)生率肝功異常ICP組比對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但肝功異常ICP組與肝功正常ICP組、肝功正常ICP組與對照組相比，差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)。結(jié)論：Leptin可以作為評估1CP患者病情嚴(yán)重程度的實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)，也可以在臨床上指導(dǎo)ICP的預(yù)防及治療，從而改善ICP對孕婦及胎兒造成的嚴(yán)重影響，提高產(chǎn)科質(zhì)量。

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是發(fā)生在妊娠期特有的并發(fā)癥，發(fā)病率0.1 %～15.6 %不等，臨床上以妊娠中晚期皮膚瘙癢、黃疸及血清膽汁酸鹽水平升高為主要表現(xiàn)，可出現(xiàn)嚴(yán)重的母兒并發(fā)癥：產(chǎn)后出血、早產(chǎn)、羊水胎糞污染、胎兒窘迫、胎死宮內(nèi)、新生兒窒息、顱內(nèi)出血等，對母兒造成嚴(yán)重威脅，從而影響產(chǎn)科質(zhì)量[1-4]。 瘦素(Leptin)是一種由肥胖基因編碼的蛋白產(chǎn)物，通過其受體作用于外周多個(gè)組織器官，對機(jī)體許多生理系統(tǒng)及代謝通路產(chǎn)生一定影響。研究顯示，瘦素可能與ICP的發(fā)生發(fā)展有一定的相關(guān)性。本研究通過觀察瘦素在ICP患者血清及蛻膜組織中的表達(dá)，探討其與ICP發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，為我們在臨床上預(yù)防及治療ICP提供新思路、新方法，從而降低母兒并發(fā)癥。

資料與方法

1 一般資料 選擇2009年6月至2016年6月期間在我院產(chǎn)科住院擬行剖宮產(chǎn)的肝功異常ICP 患者80例、肝功正常ICP患者80例及正常妊娠婦女100例(對照組) 作為研究對象。ICP診斷依據(jù)《妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥診療指南》的標(biāo)準(zhǔn)：空腹檢測甘膽酸水平升高≥10.75 μmol/L(正常值5.61 μmol/L)或總膽酸水平升高≥10.75 μmol/L，可診斷為ICP。肝功異常ICP組80例，年齡(29.4±3.8)歲，孕周(36.8±4.0)周，產(chǎn)前BMI(19.9±1.6) kg/m2；肝功正常ICP組80例，年齡(28.4±4.4)歲，孕周(37.4±3.6)周，產(chǎn)前BMI(20.2±2.1) kg/m2；對照組100例，年齡(28.8±3.1)歲，孕周(37.7±3.8)周，產(chǎn)前BMI(20.3±1.8) kg/m2。三組孕婦均為單胎、初產(chǎn)，在年齡、孕周、產(chǎn)前體重指數(shù)( BMI) 方面比較，差異均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0. 05)，具有可比性。

2 標(biāo)本采集 三組孕婦均在產(chǎn)前(剖宮產(chǎn)前)24 h、產(chǎn)后(剖宮產(chǎn)后)72 h采集外周靜脈血5 ml，產(chǎn)時(shí)(剖宮產(chǎn)時(shí))采集新生兒臍靜脈血5 ml。在無菌條件下于胎盤娩出后30 min內(nèi)避開鈣化區(qū)及壞死區(qū)，采集近臍根部蛻膜組織(即母面胎盤組織)，大小約1.5 cm×1.5 cm×1 cm，-80 ℃冰箱保存。

3 實(shí)驗(yàn)試劑 放射免疫檢測試劑盒(Leptin)購自中國原子能科學(xué)研究院同位素研究所；鼠抗人Leptin多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司；羊抗鼠第二抗體IgG、DAB試劑盒購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。

4 血清Leptin的檢測 對采集的血液進(jìn)行離心處理(3000 r/min)，15 min后吸取上層血清，置-20℃冰箱保存，應(yīng)用放射免疫法同一批測定三組孕婦產(chǎn)前、產(chǎn)后及臍帶血Leptin的表達(dá)水平。

5 蛻膜組織Leptin檢測(采用Western blot法) 各組孕婦分別稱取0.1 g蛻膜組織，剪碎，按1∶1比例加入組織裂解液，均漿至渾濁無組織塊，離心機(jī)離心(10000 r/min,)，10 min后取上清；采用分離膠對組織樣品予以SDS-PAGE電泳，然后將蛋白物質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上；將PVDF膜放入1∶200稀釋的一抗中40C過夜，清洗后放入1∶750稀釋的二抗室溫輕搖1 h；最后采用DAB試劑盒顯色處理。

Bandscan 軟件對顯影條帶進(jìn)行灰度分析，將瘦素灰度值分別與內(nèi)參GAPDH灰度值的比值作為Leptin蛋白的相對表達(dá)水平。

結(jié) 果

1 三組血清leptin表達(dá)水平比較 兩組ICP患者產(chǎn)前血清Leptin表達(dá)水平明顯高于產(chǎn)后， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；肝功異常組產(chǎn)前血清Leptin表達(dá)水平明顯高于肝功正常組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，兩組分別與對照組相比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；肝功異常組與肝功正常組產(chǎn)后血清及臍帶血Leptin表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)，與對照組比較(P>0．05)，見表1。

表1 三組血清及臍帶血Leptin表達(dá)水平的比較(ng/ml)

2 蛻膜組織Leptin表達(dá)水平比較 肝功異常組蛻膜組織的Leptin表達(dá)水平(1.43±0.37) ng/ml明顯高于肝功正常組(0.92±0.51)ng/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；且兩組分別與對照組(0.74±0.11)ng/ml相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。

3 三組孕婦的母兒情況 肝功異常ICP組、肝功正常ICP組孕婦羊水糞染、胎兒窘迫、低體重兒發(fā)生率均較對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；且兩組間相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。新生兒窒息、產(chǎn)后出血發(fā)生率肝功異常ICP組比對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0. 05)；但肝功異常ICP組與肝功正常ICP組、肝功正常ICP組與對照組相比，差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)，見表2。

表2 三組孕婦母兒情況的比較[例(%)]

討 論

瘦素主要由脂肪細(xì)胞合成分泌，經(jīng)血循環(huán)到達(dá)全身，與其受體結(jié)合而發(fā)揮作用。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)除脂肪細(xì)胞外，胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞也可合成分泌瘦素，與生殖活動(dòng)關(guān)系密切，對維持妊娠及胎兒生長發(fā)育有著重要作用。妊娠是一種同種半異體移植，正常妊娠的維持有賴于母胎間建立穩(wěn)定的免疫平衡。相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，瘦素通過調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞入侵、胎盤血管形成及生長，維持了胎盤正常生理功能，從而有利于正常妊娠過程的進(jìn)行。瘦素水平在妊娠期高于妊娠前，并隨著妊娠的進(jìn)行而升高。由于妊娠期孕婦體內(nèi)存在瘦素抵抗現(xiàn)象，故使孕婦不受瘦素的影響，仍能攝入所需的營養(yǎng)物質(zhì)以維持妊娠及胎兒生長發(fā)育。有些學(xué)者研究報(bào)道，當(dāng)瘦素水平發(fā)生異常時(shí)，體內(nèi)輔助性T淋巴細(xì)胞( Th) Th1/ Th2 型細(xì)胞因子平衡Th2 向Th1 偏移，細(xì)胞免疫功能及排斥反應(yīng)均增強(qiáng)，母胎間的免疫平衡就會被破壞，從而可能導(dǎo)致ICP 的發(fā)生[5]。

據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)研究報(bào)道，ICP 患者血清膽汁酸水平升高，引起胎盤絨毛血管痙攣，從胎盤間隙流經(jīng)的含氧血量明顯減少，導(dǎo)致胎盤氧灌注及氧交換亦明顯下降，從而使胎盤處于一種相對缺氧狀態(tài)，合體滋養(yǎng)層細(xì)胞增多，同時(shí)合體滋養(yǎng)層細(xì)胞合成分泌瘦素增加，并隨著ICP 患者病情的加重，其瘦素水平也明顯增加。我們的研究結(jié)果也說明了這一點(diǎn)：兩組ICP患者產(chǎn)前血清及蛻膜組織中瘦素表達(dá)水平均明顯高于對照組；肝功異常組明顯高于肝功正常組。當(dāng)妊娠終止后，胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞不再合成分泌瘦素，以及分娩后體重、體重指數(shù)、空腹胰島素及甘油三脂的下降，使產(chǎn)后血清瘦素水平迅速恢復(fù)[6]。我們的研究結(jié)果顯示三組孕婦產(chǎn)后血清瘦素表達(dá)水平無明顯差異。ICP可以對母兒造成一定影響，嚴(yán)重的威脅著母兒健康，影響產(chǎn)科質(zhì)量。從我們的研究三組孕婦母兒情況來看：ICP組羊水糞染、胎兒窘迫、低體重兒發(fā)生率比對照組明顯增加，而且隨著肝功能異常的出現(xiàn)，亦明顯增加；新生兒窒息、產(chǎn)后出血發(fā)生率也增高，肝功異常ICP組與對照組有明顯差異，而肝功異常ICP組與肝功正常ICP組、肝功正常ICP組與對照組相比無明顯差異，這可能和我們在臨床上對于ICP患者加強(qiáng)產(chǎn)前胎兒監(jiān)護(hù)、積極采取一定的措施進(jìn)行治療和把握適時(shí)終止妊娠時(shí)機(jī)有著密不可分的關(guān)系，從而降低了新生兒窒息及產(chǎn)后出血的發(fā)生。

本研究結(jié)果表明，瘦素在ICP 患者血清及蛻膜組織中表達(dá)水平明顯增高，并隨著肝功能異常而增加，與ICP的發(fā)生發(fā)展有著密切的相關(guān)性。我們可將瘦素作為監(jiān)測ICP患者病情嚴(yán)重程度的一個(gè)重要指標(biāo)，反映胎盤功能，以便在臨床上指導(dǎo)ICP的預(yù)防及治療，從而改善ICP對孕婦及胎兒造成的嚴(yán)重影響，降低母兒并發(fā)癥，提高產(chǎn)科質(zhì)量。

[1] Gabzdyl EM,Schlaeger JM. Intrahepatic cholestasis of pregnancy: a critical clinical review[J]. J Perinat Neonatal Nurs，2015,29(1): 41-50.

[2] Williamson C,Geenes V. Intrahepatic cholestasis of pregnancy[J].Obstet Gynecol，2014，124(1):120.

[3] Dixon PH，Williamson C. The pathophysiology of intrahepatic cholestasis of pregnancy[J].Clin Res Hepatol Gastroenterol，2016，40(2): 141.

[4] Rezai S，Lam J，Henderson CE. Intrahepatic cholestasis of pregnancy: maternal and fetal outcomes associated with elevated bile acid levels[J]. Am J Obstet Gynecol，2015，213(1): 114.

[5] 張群鋒，瘦素在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血清及胎盤組織中的表達(dá)及意義[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2013,18(34):2838-2840.

[6] 閆 時(shí)，妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕鼠子代膽固醇代謝與胰島素抵抗及相關(guān)基因在肝臟中的表達(dá)[J]. 中國婦幼保健，2016，31(2) : 386-390.

(收稿：2017-03-18)

The relationship between Leptin and Cholestasis of Pregnancy (ICP)

Shan Li，Zhou Haiyan，He Juxian,et al.Department of Gynecology & Obstetrics,

Northwest Women’s and Children’s Hospital in Shaanxi Province(Xi’an 710068)

Objective: to explore the expression of leptin in the serum and decidual tissues in patients suffering ICP and the potential relationship between leptin and ICP. Methods: 80 ICP patients with normal hepatic function were from group1; and 80 ICP patients with abnormal hepatic function were listed in group 2; 100 healthy pregnant women were enrolled as comparison group. With the help of ELISA and Western blot，the concentrations of Leptin in the serum from umbilical vessels of these 3 groups before and after delivery were detected. Moreover，the expression of Leptin in decidual tissues from these groups was also determined. Results: In both group 1 and group 2，significantly higher expression of Leptin in the serum (P<0.05) before delivery was observed. There were significantly elevated expression of Leptin expression in the serum and decidual tissues in ICP patients with abnormal hepatic function (group 2) when compared with ICP patients with normal hepatic function (group 1). Significantly difference were detected in the expression of Leptin in both group 1 and group 2 (P<0.05) comparing with group 3，respectively. However，there were no significant differences in the expression of Leptin after delivery among these 3 groups (P>0.05) . The occurrence of fetal distress，infant of low-birth weight were much higher in group 1 and group 2 (P<0.05) comparing with group 3，also，there were significant difference (P<0.05) between group 1 and group 2 in the occurrence rate of these complications. There were obviously higher occurrence rate of neonatal asphyxia and after-delivery bleeding in group 2 than group 3 (P<0.05)，however，there were no significant difference in when comparing the occurrence rated of neonatal asphyxia and after-delivery bleeding between group 1 and group 2，as well as between group 1 and group 3 (P>0.05). Conclusion: Leptin can be an important parameter to evaluate the progression of ICP. Thus，it can be much useful in the prevention and therapeutic guidance of ICP.

Cholestasis Pregnancy Leptin @Decidual tissues

*陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(2007K15-02)

膽汁淤積 妊娠 瘦素 @蛻膜組織

R714.25

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.08.006

△通訊作者