黃新造 占桂香 賽 君 紀(jì) 丹

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miR-21表達與肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的相關(guān)性

黃新造 占桂香 賽 君 紀(jì) 丹

miR-21；生物標(biāo)志物；肝細(xì)胞癌；預(yù)后

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常見的惡性實體腫瘤之一，在腫瘤相關(guān)疾病死亡率中排第二[1]。臨床上急需一種能夠準(zhǔn)確預(yù)測HCC患者疾病復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的標(biāo)志物以改善患者臨床療效。報道表明在多種人類腫瘤中miR-21表達增加能夠促進腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵入[2]，且部分研究證實miR-21可以作為某些腫瘤診斷和預(yù)后標(biāo)志物[3-5]，然而HCC患者的miR-21表達情況及其對疾病預(yù)后的影響尚不清楚。本研究旨在探討miR-21對評估HCC患者疾病預(yù)后的價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

本研究中120例均為2007年至2013年在我院接受手術(shù)切除治療的原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者。HCC組織和鄰近非腫瘤組織均為術(shù)中采集，且立即放入液氮中保存?zhèn)溆?。所有患者入組前均未接受任何干預(yù)和治療?；颊咭话闩R床特征見表1，本研究通過我院倫理委員會審批。

1.2 RNA提取和實施定量PCR檢測

采用mirVana miRNA提取試劑盒提取組織miRNA，通過SPECTRAmax微孔板紫外分光光度計測定miRNA濃度，按參考文獻[6]合成miR-21和內(nèi)參U6 snRNA擴增引物。實施定量PCR反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共45個循環(huán)。根據(jù)內(nèi)參U6 snRNA的含量通過2-ΔΔCt方法計算miR-21的相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0軟件處理，相關(guān)性分析采用卡方檢驗和Fisher’s精準(zhǔn)檢驗或獨立t檢驗，組間生存期比較則采用秩和檢驗，對于單一變量檢測有顯著性意義的因素進行多重變量分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCC樣本中miR-21表達檢測

與鄰近非腫瘤組織相比，HCC組織樣本中miR-21表達顯著上調(diào)(P<0.05，圖1)。根據(jù)實施定量PCR檢測結(jié)果將120例HCC患者分成2組，其中高表達患者63例，低表達患者57例。

2.2 miR-21表達與HCC患者臨床病理學(xué)特征分析

miR-21高表達與腫瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相關(guān)，然而miR-21表達水平與患者年齡、性別、實體瘤數(shù)量、腫瘤直徑、血清AFP含量和肝硬化等因素?zé)o關(guān)。見表1。

圖1 實施定量PCR方法檢測HCC組織和臨近非腫瘤組織中miR-21表達量比較

病理學(xué)特征例數(shù)miR-21表達/例高表達低表達P值性別0.929 男性663531 女性542826年齡/歲0.224 <50573324 ≥50633033腫瘤直徑/cm0.302 ≤5512427 >5693930實體瘤數(shù)量0.204 單個623626 多個582431血清AFP/(μg·L-1)0.316 <400754233 ≥400452124肝硬化0.092 否21813 是995544腫瘤分化0.002 良好+中等571542 不良634815TNM分期0.003 Ⅰ～Ⅱ481731 Ⅲ～Ⅳ724626血管侵入0.004 是27207 否934350

2.3 miR-21表達與HCC患者疾病預(yù)后

由于miR-21表達水平與HCC患者腫瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相關(guān)，本研究推測miR-21表達可能是影響HCC患者疾病預(yù)后的因素，為驗證這一猜想，本研究根據(jù)HCC患者miR-21表達情況采用Kaplan-Meier方法繪制患者總生存期曲線，結(jié)果提示miR-21表達上調(diào)HCC患者總生存期顯著短于低表達患者(P<0.05，圖2)，表明miR-21表達上調(diào)與HCC患者疾病預(yù)后不良密切相關(guān)，Cox比例危險模型顯示miR-21表達、腫瘤分化不良、高TNM分期和血管侵入均為影響HCC總生存期的獨立預(yù)后因素(P<0.05，表2，圖2)。

表2 HCC患者總生存期相關(guān)因素的單一和多重變量分析

圖2 HCC患者miR-21表達的Kaplan-Meier分析

3 討論

miRNAs表達異常是多種腫瘤的常見現(xiàn)象，且其通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達進而在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。研究證實miRNA表達改變與人類腫瘤的發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)，因此探究HCC患者組織中miRNA表達譜不僅為HCC發(fā)生或發(fā)展的分子機制研究奠定基礎(chǔ)，同時也為HCC患者腫瘤治療提供新的靶標(biāo)。早期研究報道顯示miR-21在多種腫瘤中表達升高，例如乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌和胰腺癌[3-4]。與上述研究結(jié)果一致，本研究證實HCC組織中miR-21表達顯著上調(diào)。統(tǒng)計學(xué)結(jié)果顯示與相應(yīng)鄰近非腫瘤組織相比HCC組織中表達顯著升高。此外，miR-21表達升高與HCC患者腫瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相關(guān)，提示miR-21可能參與HCC的發(fā)展。許多學(xué)者研究顯示miR-21表達升高與腫瘤患者疾病預(yù)后不良密切相關(guān)，例如，Yan等[5]研究表明miR-21在人乳腺癌中表達升高，且與患者較高的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外，miR-21高表達患者的總生存期顯著低于低表達患者。王斌等[6]研究發(fā)現(xiàn)miR-21在結(jié)直腸癌患者中表達顯著升高，且其表達與高臨床分期密切相關(guān)。Hu等報道表明在喉頭鱗狀細(xì)胞癌樣本中檢測到miR-21表達上調(diào)，且結(jié)果提示miR-21表達上調(diào)為喉頭鱗狀細(xì)胞癌患者疾病預(yù)后不良獨立因素[7]。

總之，本研究結(jié)果提示與鄰近非腫瘤組織相比，HCC組織中miR-21表達顯著上調(diào)，且miR-21表達升高與患者腫瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相關(guān)，統(tǒng)計分析證實miR-21表達可以作為HCC患者疾病預(yù)后不良獨立標(biāo)志物。

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[2] 馬曉路,談綺文,彭穎斐,等.血清 DKK1 水平對肝細(xì)胞癌(HCC)患者預(yù)后判斷的臨床價值〔J〕.復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2014,41(5):589-595.

[3] 伍怡穎,張仲林.miR-21 與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究進展〔J〕.成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2014,9(2):222-225.

[4] 郭仲莉,曾照芳.miR-21 的高表達與肺癌預(yù)后關(guān)系的 meta 分析〔J〕.激光雜志,2014,35(1):58-59.

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(編輯：甘 艷)

435000 鄂東醫(yī)療集團市中醫(yī)醫(yī)院

占桂香

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.08.052

R735.7

B

1001-5930(2017)08-1391-02

2016-10-24

2017-03-28)