閆偉偉，羅慧玉，陳軍娟，韓慧琴，?；劬?/p>

·藥學(xué)研究·

杏花藥材的鑒別研究

閆偉偉1，羅慧玉1，陳軍娟2，韓慧琴1，牛慧娟3

目的 建立杏花藥材鑒別方法，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供科學(xué)依據(jù)。方法 對杏花藥材進(jìn)行性狀、粉末顯微鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜法(HPLC)建立特征圖譜鑒別方法。結(jié)果 性狀、粉末顯微鑒別專屬性強(qiáng)。以蘆丁為參照峰，建立了由11個(gè)特征峰組成的杏花藥材HPLC特征圖譜。結(jié)論 所用方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可行，可用于杏花藥材的鑒別研究。

杏花；性狀；顯微鑒別；特征圖譜；高效液相色譜法；蘆丁

0 引言

杏花為薔薇科植物杏PrunusarmeniacaL.或山杏PrunusarmeniacaL.var.ansuMaxim.的干燥花，其味苦、性溫，3～4月采花，陰干備用。杏花具有豐富的藥用和食療價(jià)值，文獻(xiàn)記載杏花有活血補(bǔ)虛的功效。現(xiàn)代研究證明，其含有杏花精油[1]、苦杏仁苷[2]、植物激素[3]及總黃酮[4]等多種物質(zhì)。近年來杏花以花茶、藥材等不同形式被廣泛使用，而其質(zhì)量控制方法卻鮮有研究，不能有效控制此藥材的質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)立足于杏花藥材真?zhèn)蔚蔫b別，以性狀、粉末顯微鑒別與高效液相(HPLC)特征圖譜為技術(shù)手段，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC 2010A HT高效液相色譜儀(島津公司)，SPD-M10A VP二極管陣列檢測器(島津公司)，LC solution色譜管理系統(tǒng)，AS10200A超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)，Sartorius CPA225D分析天平，BX53型顯微鏡(奧林巴斯公司)，Milli-Q Integral 純水/超純水機(jī)(美國Millipore公司)。

蘆丁對照品(批號(hào)：100080-201408，含量：90.2%)，阿魏酸對照品(批號(hào)：110773-201012，含量：99.6%)，異槲皮苷對照品(批號(hào)：111809-201403，含量：92.9%)均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈(色譜純)，水為超純水，其余試劑均為分析純。杏花藥材10批，由河北省藥品檢驗(yàn)研究院段吉平老師鑒定。鑒定結(jié)果見表1。

表1 杏花樣品來源

2 鑒別

2.1 性狀的鑒別 杏花呈類球形，直徑0.2～0.8 cm，花梗極短或無梗。萼筒鐘形，基部疏被短柔毛，棕色。萼片5，卵圓形或橢圓形；花瓣多皺縮，展平后5枚離生，卵形至倒卵形，白色或粉紅。雄蕊多數(shù)，短于花瓣。子房被柔毛。氣清香，味苦。山杏花較小，直徑0.1～0.5 cm，多為粉紅色。雄蕊多數(shù)，與花瓣近等長或稍長。見圖1。

圖1 杏花、山杏花藥材圖注：A.山杏花，B.杏花

2.2 粉末顯微鑒別 取藥材粉末，過四號(hào)篩，以水合氯醛制片觀察，結(jié)果顯示：粉末淺棕色?；ǚ哿o色、淡黃色或棕黃色，類圓形，極面觀呈類圓三角形，直徑10～50 μm，3孔溝。非腺毛較少，無色或黃棕色，單細(xì)胞，平直或稍彎曲，長短不一，長50～250 μm。草酸鈣簇晶存在于薄壁細(xì)胞中或單個(gè)散在，直徑10～50 μm。萼片表皮細(xì)胞表面觀類方形、長方形或不規(guī)則多角形，垂周壁略呈連珠狀增厚?；ǚ勰覂?nèi)壁細(xì)胞多見，具細(xì)密網(wǎng)狀增厚紋理。見圖2。

圖2 杏花粉末顯微圖注：A.花粉囊內(nèi)壁細(xì)胞，B.花粉粒細(xì)胞，C.非腺毛，D.草酸鈣簇晶，E.萼片細(xì)胞

3 高效液相特征圖譜研究

3.1 色譜條件 色譜柱為YMC-Pack ODS-A C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(125∶105∶770)；檢測波長：328 nm；體積流量：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

3.2 參照物溶液的制備 取蘆丁、阿魏酸與異槲皮苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1 mL各含0.15 mg、7 μg、7 μg的混合溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 取杏花粉末(過四號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇20 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率50 Hz)20 min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 方法學(xué)考察

3.4.1 精密度試驗(yàn) 精密稱取編號(hào)8(陜西旬邑)的杏花樣品0.5 g，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。各特征峰相對保留時(shí)間的RSD為0.15%～0.57%，相對峰面積的RSD為0.20%～0.99%，結(jié)果表明精密度良好。

3.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取編號(hào)8(陜西旬邑)的杏花樣品0.5 g，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，分別在0、2、4、8、12、24、48 h進(jìn)樣，測定峰面積。各特征峰相對保留時(shí)間的RSD為0.18%～0.62%，相對峰面積的RSD為0.25%～0.82%，結(jié)果表明供試品溶液在常溫48 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取編號(hào)8(陜西旬邑)的杏花樣品0.5 g，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下條件色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣，測定峰面積。各特征峰相對保留時(shí)間的RSD為0.14%～0.70%，相對峰面積的RSD為0.24%～0.92%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

3.5 耐用性試驗(yàn) 取三批杏花樣品進(jìn)行耐用性試驗(yàn)，分別采用不同品牌的色譜柱(YMC-Pack ODS-A C18柱、熱電BOS HYPERSIL C18柱、Waters SunFire C18柱，規(guī)格均為250 mm×4.6 mm，5 μm)測定，相對保留時(shí)間重現(xiàn)性較好；分別采用不同品牌的液相色譜儀(島津LC 2010A HT、Waters e 2695-2998)測定，相對保留時(shí)間重現(xiàn)性較好。表明儀器、色譜柱耐用性良好。

3.6 特征圖譜的建立與結(jié)果判定 按“3.1”項(xiàng)條件同時(shí)測定參照物溶液與10批樣品的供試品溶液，記錄色譜圖，得杏花藥材特征圖譜(見圖3)。通過考察不同產(chǎn)地樣品的特征圖譜，發(fā)現(xiàn)共呈現(xiàn)11個(gè)共有特征峰，依次標(biāo)為1～11號(hào)，雖然各特征峰相對峰面積有一定差異，但其特征圖譜基本一致。對比參照物溶液色譜圖(見圖4)，其中4號(hào)為阿魏酸峰，6號(hào)為蘆丁峰，7號(hào)為異槲皮苷峰。由于蘆丁峰較其他峰出峰時(shí)間適中，含量較高，且與其他成分分離良好，故將其作為參照峰，確定其他特征峰相對保留時(shí)間的規(guī)定值。規(guī)定值為：0.36(峰1)，0.39(峰2)，0.56(峰3),0.70(峰5)，1.37(峰8),1.84(峰9),2.17(峰10)，2.51(峰11)。其中4、6、7號(hào)峰應(yīng)分別與參照物溶液中阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷峰保留時(shí)間一致，其余各特征峰的相對保留時(shí)間在規(guī)定值的±5%之內(nèi)。

圖3 杏花藥材特征圖譜

圖4 參照物溶液色譜圖

4 討論

野外調(diào)查發(fā)現(xiàn),杏花為植物杏或山杏的花，二者在性狀方面略有差異：杏花個(gè)體較山杏花大；杏花顏色多以白色、淺粉紅色為主，山杏花較杏花顏色深且鮮艷，以粉紅色為主；杏花雄蕊短于花瓣；山杏花雄蕊長于花瓣。觀察到的二者粉末顯微特征基本相似且鑒別特征明顯。

對樣品溶液在200～400 nm進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明，在328 nm波長處各色譜峰能實(shí)現(xiàn)基本分離，且峰信號(hào)較強(qiáng)，故選擇328 nm作為檢測波長。實(shí)驗(yàn)考察了甲醇-0.1%磷酸(35∶65)、乙腈-0.1%磷酸(15∶85)、甲醇-乙腈-0.1%磷酸(115∶115∶770)、甲醇-乙腈-0.1%磷酸(125∶105∶770)等流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果顯示，當(dāng)采用甲醇-乙腈-0.1%磷酸(125∶105∶770)時(shí)，特征圖譜中各色譜峰能完全分離，且基線平穩(wěn)，峰形良好。

實(shí)驗(yàn)考察了超聲提取、浸泡過夜及回流提取等不同的提取方式，結(jié)果表明,3種方式特征圖譜基本一致，考慮到超聲提取操作簡便易行，省時(shí)省力，故選擇超聲方式提取。同時(shí)對不同的提取時(shí)間進(jìn)行考察，確定超聲時(shí)間超過20 min時(shí)，各峰峰面積不再有變化，故選擇超聲20 min。

特征圖譜利用一組特征峰從整體上對中藥實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制，強(qiáng)調(diào)其特征性成分而非全部，近年來在中藥材中廣為應(yīng)用[5-7]。本研究對藥材的性狀、粉末顯微及特征圖譜等鑒別方法進(jìn)行研究，為其質(zhì)量控制提供了科學(xué)有效的依據(jù)。

[1] 耿明江,董麗,尚校軍,等.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選杏花精油的提取工藝[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(2):464-465.

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Research on identification of apricot blossom

YAN Wei-wei1，LUO Hui-yu1，CHEN Jun-juan2，HAN Hui-qin1，NIU Hui-juan3

(1.Zhangjiakou Food and Drug Inspection Center，Zhangjiakou 075000，China;2.Zhangjiakou Vocational and Technical College，Zhangjiakou 075000，China;3.Xuanhua Iron and Steel Company Worker Hospital，Zhangjiakou 075100，China)

Objective To establish a method for identification of apricot blossom,and to provide scientific basis for its quality standard formulation.Methods The characters and powder of apricot flower were microscopically identified,and the characteristic chromatogram identification method was established by HPLC.Results The microscopic identification of character and powder was specific.The HPLC characteristic chromatogram of apricot blossom was constructed with 11 common characteristic chromatogaphic peaks,including rutin as a reference peak.Conclusion The method is accurate,stable and feasible.It can be used to identify apricot blossom.

Apricot blossom；Character；Microscopic identification；Characteristic chromatogram；HPLC；Rutin

2016-11-16

1.張家口市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 張家口 075000；

2.張家口職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河北 張家口 075000；3.宣化鋼鐵公司職工醫(yī)院，河北 張家口 075100

10.14053/j.cnki.ppcr.201707023