史磊?范純玲?陳尚昆

[摘要] 目的 總黃酮為理氣舒心片的功效成分，建立總黃酮的測定方法，控制理氣舒心片質(zhì)量。 方法 采用紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量，通過回流法提取，NaNO3-Al（NO3）3法顯色測定樣品吸光度，以蘆丁為標準溶液計算求得總黃酮含量。 結(jié)果 蘆丁在8.3014～33.5092mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9997，平均回收率為96.14%，RSD為0.7%。 結(jié)論 三批理氣舒心片樣品總黃酮含量在5.20～5.87mg/片之間，該方法簡便快捷，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，適用于理氣舒心片中總黃酮的測定。

[關(guān)鍵詞] 理氣舒心片；功效成分；蘆丁；紫外-可見分光光度法

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）07-35-04

Effect of composition control Qi Shuxin tablets quality

SHI Lei FAN Chunling CHEN Shangkun

Songyuan Institute for food and drug control，Songyuan 138000，China

[Abstract] Objective The total flavone is effective components of Qi Shuxin tablets.To establish the determination of total flavonoids，and to control Qi Shuxin tablets quality. Methods UV Vis Spectrophotometry was used to determine total flavonoids content.Extraction by refluxing method，NaNO3-Al（NO3）3 was used to color determine sample absorbance.Rutin was as the standard solution to calculate the total flavonoids content. Results Rutin had good linear relationship within the range from 8.3014 to 33.5092mg/L，r=0.9997.The average recovery was 96.14%，RSD was 0.7%. Conclusion Total flavonoids content of the three batch of Qi Shuxin tablets samples is Between 5.20-5.87mg/tablet.The method is simple，rapid，accurate and reproducible.It is suitable for determination of total flavonoids of Qi in Shuxin tablets.

[Key words] Qi Shuxin tablets；Efficacy component；Rutin；UV Vis Spectrophotometry

功效成分是指與中成藥的功效直接相關(guān)的活性成分或活性成分群，是中成藥療效的基礎(chǔ)。目前大部分的中成藥標準是以指標成分控制藥品中某味藥材質(zhì)量，比如用甘草酸的含量評價含甘草的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量，這種方法不能完全體現(xiàn)中成藥的藥用價值和自然屬性。理氣舒心片的處方由當歸、沉香、茯苓等18味組成，具有解肝郁，行氣滯，祛胸痹的功效，主要用于氣滯血瘀癥冠心病，心絞痛，心律不齊，氣短腹脹，胸悶心悸。因處方中大多藥味具有共性成分，無法以單一指標成分控制處方中藥材質(zhì)量。文獻報道總黃酮具有增加心肌營養(yǎng)血流量，降低心肌耗氧量，提高動物耐缺氧能力，降低血清膽固醇，抑制血小板聚集等作用，符合理氣舒心片的功能主治，可以認為總黃酮為理氣舒心片的功效成分[1-5]。理氣舒心片原收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第四冊，標準中僅有一項蒲黃的顯微鑒別，無法準確控制藥品質(zhì)量[6]?？傸S酮的含量測定方法主要有分光光度法、薄層色譜掃描法、高效液相色譜法、超臨界流體色譜法和毛細管電泳法等，高效液相色譜法和毛細管電泳法靈敏度高，準確性好，但在測定時需要較多的黃酮化合物對照品，相對成本較高。薄層色譜掃描法和超臨界流體色譜法靈敏度低，重現(xiàn)性差，也需要較多的黃酮化合物對照品。紫外-可見分光光度法為最常用的總黃酮測定方法之一，具有儀器廉價、操作簡單、檢測成本低、不需要總黃酮中各黃酮化合物對照品等優(yōu)點。為確保用藥安全有效，本次試驗以蘆丁為對照，采用紫外-可見分光光度法測定該處方中總黃酮含量，以功效成分控制藥品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

T9雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）、UV Win V6.0.0工作站；DZF-6050型真空干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（中國甄城華魯電熱電器有限公司山東）；薄層加熱板（瑞士卡瑪）；AL204電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；XS105電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。

蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，含量測定用，批號100080-201610，供UV法測定，含量為92.6%）；甲醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為

圖1 檢測波長確定紫外光譜圖

分析純，購于北京化工廠；重蒸水（自制）。理氣舒心片生產(chǎn)企業(yè)A，批號160302；生產(chǎn)企業(yè)B，批號150701；生產(chǎn)企業(yè)C，批號57151206。

2 功效成分測定[7-15]

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品10mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL中含無水蘆丁0.2mg）。

2.2 標準曲線的制備

精密吸取對照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置25mL量瓶中，各加入甲醇至5mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，再分別加入1%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，分別精密加入4%氫氧化鈉溶液10mL，用水稀釋至刻度，搖勻，放置15min，即得標準曲線系列溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加75%乙醇100mL，稱定重量，85℃加熱回流1h，放冷，用75%乙醇補足減失的重量，濾過，精密量取2.5mL，置25mL量瓶中，加75%乙醇至5mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，再分別加入1%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，分別精密加入4%氫氧化鈉溶液10mL，用水稀釋至刻度，搖勻，放置15min，作為供試品溶液。

2.4 測定波長的選擇

取蘆丁對照品，加甲醇溶液適量，制成對照溶液，于紫外-可見分光光度計200～600nm范圍內(nèi)進行波長掃描。結(jié)果顯示蘆丁對照品在510nm波長處有最大吸收，故確定510nm為測定波長，見圖1。

2.5 測定法

取標準曲線系列溶液，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2015年版四部通則0401），在510nm波長處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。取供試品溶液，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的濃度。

2.6 精密度考察

取同一供試品溶液，重復(fù)測定6次，所得濃度分別為16.4078、16.3834、16.3834、16.3182、16.3182、16.3671mg/L，RSD為0.3%，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察

取精密度項下供試品溶液，30min內(nèi)每5min測定一次，結(jié)果為17.9638、18.0778、17.8416、17.7194、17.5972、17.4994mg/L。RSD為1.3%，表明供試品溶液在30min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性考察

取同一批號供試品適量，精密稱取6份，依法制成供試品溶液，照上述方法分別測定濃度，計算每片含量，所得結(jié)果分別為5.30、5.41、5.35、5.44、5.48、5.42mg/片。RSD為1.2%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.9 線性考察

取標準曲線系列溶液測定，結(jié)果在測定濃度8.3014～33.5092mg/L范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系。y=0.01228x+0.00159，r=0.9997。

2.10 回收率考察

取已知含量的供試品6份，除去包衣，精密稱定，研細，取0.5g，精密稱定，精密加入蘆丁對照品8mg，照供試品溶液制備方法制成回收率測定溶液，在510nm波長處測定吸光度，計算回收率，結(jié)果表明本方法回收率結(jié)果符合方法學(xué)要求，見表1。

2.11 樣品的測定

以供試品溶液的制備方法制備3批理氣舒心片供試品溶液，依照上述方法測定含量，所得結(jié)果見表2。

3 討論

根據(jù)蘆丁的物理性質(zhì)，1g蘆丁可溶于7mL甲醇、23mL沸乙醇、290mL冷乙醇，說明蘆丁在甲醇中的溶解性較高，所以選擇甲醇為對照品的溶解溶劑。樣品提取溶劑選擇不同濃度乙醇試驗，乙醇濃度越大，極性越小，增大極性小的黃酮類溶出，從而在一定乙醇濃度范圍內(nèi)，提取含量呈上升趨勢；當乙醇濃度超過一定范圍，即極性過大，減少了黃酮糖苷類的溶出，從而提取含量呈下降趨勢，經(jīng)試驗所得結(jié)論為，乙醇濃度的最優(yōu)水平為75%。對提取溫度進行考察，當溫度低于85℃時，隨著溫度的升高，熱動力學(xué)增加了黃酮類的溶出，從而提取含量呈上升趨勢，當溫度高于85℃時，可能黃酮發(fā)生了水解或裂解，提取含量呈下降趨勢，所以提取溫度選擇為85℃。對提取時間進行考察，試驗了回流30、45、60和75min，所得含量表明加熱回流60min時含量最高，高于60min含量結(jié)果提取不明顯，確定加熱回流時間為60min。提取溶劑量的選擇，試驗了加入量50、75、100和125mL，實驗結(jié)果顯示100mL時樣品提取完全，增加溶劑量試驗，含量測定結(jié)果不在增加，所以選擇100mL為提取溶劑用量。

總黃酮具有保護造血系統(tǒng)、保護免疫系統(tǒng)、清除自由基、抗氧化、保護DNA等作用，黃酮類化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物，一般具有C6-C3-C6的基本骨架結(jié)構(gòu)，黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用備受青睞。本研究根據(jù)黃酮類化合物的3-羥基、4-羥基或5-羥基、4-羥基或鄰二位酚羥基與鋁鹽進行絡(luò)合反應(yīng)，在堿性條件下生成紅色絡(luò)合物的特點建立，用分光光度法在510nm波長下測定其吸光度，與蘆丁標準品比較，進行待測物中總黃酮的定量測定。選用蘆丁作為標準品的原因是蘆丁具有典型的黃酮類結(jié)構(gòu)和紫外特征，在很多含有黃酮類物質(zhì)的植物中廣泛存在，而且含量比較高，蘆丁比較容易分離得到純體，作為對照品比較易得。

紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量多用于中藥材，中成藥中比較少見。理氣舒心片為治療冠心病心絞痛常用藥，因處方中藥味較多，無法逐一建立含量測定方法控制各藥味質(zhì)量，經(jīng)查閱文獻資料，僅有一篇《HPLC同時測定理氣舒心片中3種活性成分》報道，以柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷為對照品進行含量測定。該方法只能控制處方中青皮、陳皮、枳實等少數(shù)藥味的質(zhì)量，柚皮苷為二氫黃酮、橙皮苷和新橙皮苷均為二氫黃酮衍生物，都是黃酮類成分，卻無法代表處方中所有黃酮類化合物，難以達到整體控制的效果。一般來說，一種中藥所含的化學(xué)成分少則十幾種，多則上百種，復(fù)方制劑就更加復(fù)雜，其中相互之間還有可能發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生新的成分，而目前對中藥成分的研究大多局限于含量較高的成分上，即指標成分，這就可能忽視了其他成分的作用或其綜合作用。如麻黃堿作為麻黃的指標性成分具有明顯的止咳平喘作用，但麻黃能解表散寒的作用卻不能從麻黃堿的藥理作用中得到證實。功效成分是與中藥材和中成藥的功效直接相關(guān)的活性成分或活性成分群，是中成藥療效的基礎(chǔ)，功效成分與中成藥的療效之間存在著必然的聯(lián)系，功效成分的研究對新藥開發(fā)也有著重要的指導(dǎo)意義，應(yīng)作為中成藥質(zhì)量控制和新藥研發(fā)的研究方向。

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（收稿日期：2017-01-21）