張麗云 張建云

【摘要】目的：研究清熱顆粒中蘆丁含量和測定方法。方法：采用 HPLC 法分別對6個(gè)批次的樣品中蘆丁含量進(jìn)行測定。色譜法條件為ZORBAX SB-C18柱（200mm×46mm，5μm），以甲醇-05%磷酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長為 358nm，柱溫為 30℃。結(jié)果：蘆丁進(jìn)樣量在0206～206μg范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系，平均回收率為9986%，r =09994，RSD為117%（n=6）。結(jié)論：HPLC法簡便、可靠、準(zhǔn)確，可用于清熱顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】清熱顆粒； 蘆??； 含量測定

【中圖分類號(hào)】R284【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）06-0029-02

清熱顆粒為廣西柳州市中醫(yī)院院內(nèi)制劑（批準(zhǔn)文號(hào)為桂藥制字Z02060094），由桑葉、野菊花、紫花地丁、九里明、蒲公英、崗梅根六味藥組方，具有清熱解毒、抗菌消炎、清肝明目、疏風(fēng)散熱的功效，用于感冒發(fā)熱、目赤頭痛、上呼吸道感染，咽喉腫痛及各種疥瘡，臨床療效顯著。桑葉為桑科植物桑Morus alba L的干燥葉，具有疏散風(fēng)熱、清肺潤燥、清肝明目的功效，用于風(fēng)熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭痛、目赤昏花[1]。其含有黃酮類、生物堿類、苯丙素類、有機(jī)酸類、甾體及三萜類等多種化合物[2]。桑葉為方中君藥，蘆丁是其主要化學(xué)成分。為了更好的控制制劑的質(zhì)量，保證其療效，研究用高效液相色譜法測定清熱顆粒中蘆丁的含量。

1儀器與材料

11儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；XS205Du分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；HH-S恒溫水浴鍋（江蘇金壇醫(yī)療儀器廠）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。

12材料蘆丁對照品（批號(hào)：100080-201408，含量902%，中國藥品生物制品檢定所）；清熱顆粒（批號(hào)：20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201，本院自制）；甲醇（色譜純，賽默飛世爾科技有限公司）；磷酸（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）。

2方法

21溶液的配制

211對照品溶液的配制精密稱定蘆丁對照品2575mg于25mL容量瓶中，加甲醇溶解制成103 mg/mL的溶液，搖勻，精密量取1mL，移至10mL的容量瓶中，加甲醇溶解制成濃度為0103mg/mL的對照品溶液，即得。

212供試品溶液的配制取10袋清熱顆粒內(nèi)容物，研細(xì)，混勻取約2g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加甲醇50mL，加熱回流30min，濾過，濾渣再用甲醇50mL，同法提取2次，合并濾液。減壓回收溶劑，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，過045μm濾膜，取續(xù)濾液，即得。

213陰性對照品溶液的制備以相同的處方比例取除桑葉外的藥材，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

22色譜條件色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（200mm×46mm，5μm）；流動(dòng)相：以甲醇為流動(dòng)相A，以05%的磷酸溶液為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫；流速：1mL/min；檢測波長：358nm；柱溫：30℃。

23方法學(xué)考察

231線性關(guān)系取0103mg/mL蘆丁對照品溶液分別進(jìn)樣 2、5、75、10、125、20μL測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得蘆丁回歸方程：Y=20E+9X-13E+5，r=09994。結(jié)果蘆丁在0206～206μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

24樣品測定精密稱取6個(gè)批號(hào)的樣品各適量，按供試品制備方法制備樣品溶液，在色譜條件下測定，用外標(biāo)法計(jì)算蘆丁的含量。結(jié)果批號(hào)為20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201的樣品中蘆丁的含量分別為0130mg/袋，0152mg/袋，0175mg/袋，0128mg/袋，0142mg/袋，0126mg/袋，平均為0142mg/袋。

3討論

將蘆丁對照品的甲醇溶液在200nm～600nm 的范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，蘆丁在215nm、258nm、358nm 處出現(xiàn) 3 個(gè)吸收峰，考慮到在短波長位置，處方中其它的組分干擾太大，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[1，3-4]，選擇358nm作為檢測波長。

研究還對含量測定中流動(dòng)相的條件進(jìn)行了考察，曾采用甲醇-水（40∶60），甲醇-1%冰醋酸溶液（35∶65）及 甲醇-05%磷酸溶液（35∶65）作為測定條件，但峰出現(xiàn)拖尾。選用流動(dòng)相為甲醇-05%磷酸溶液進(jìn)行梯度洗脫[1]，分離效果好，分離度大于15，理論塔板數(shù)大于3000，且陰性無干擾，故選擇本系統(tǒng)為流動(dòng)相。

在提取溶劑的選擇上，采用甲醇、乙醇、水作為提取溶劑，通過比較單一溶劑和混合溶劑，最后選定甲醇溶液作為最佳提取溶劑。考察了加熱回流提取時(shí)間的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加熱回流處理20、30、40min 差別不大，為了提取完全同時(shí)又節(jié)約時(shí)間，故選擇加熱回流提取30min為宜。

綜上，采用HPLC法測定清熱顆粒中蘆丁的含量，該方法簡便、可靠、準(zhǔn)確，可用于清熱顆粒的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

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[4]郭玉，唐國濤，陳淑嫻，等.槐花米中蘆丁提取方法的比較研究[J].中成藥，2007，29（11）：1675-1677.