李則均

（黑龍江完達(dá)山乳品有限公司質(zhì)檢中心，哈爾濱 150078）

人乳與牛乳中牛磺酸含量測(cè)定比較

李則均

（黑龍江完達(dá)山乳品有限公司質(zhì)檢中心，哈爾濱 150078）

本試驗(yàn)采用GB 5413．26-2010第二法丹磺酰氯柱前衍生法，應(yīng)用紫外檢測(cè)器測(cè)定人乳和牛乳四個(gè)不同時(shí)期的?；撬岷?，并進(jìn)行比較分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人乳中?；撬岷渴桥Ｈ榈?．2倍，為以牛乳為原料的嬰幼兒食品強(qiáng)化?；撬嵫芯刻峁﹨⒖?。檢測(cè)波長(zhǎng)254nm時(shí)，人乳中?；撬岢龇鍟r(shí)間為7．556min，牛乳中?；撬岢龇鍟r(shí)間為7．557min。本試驗(yàn)采用檢出范圍1．0～16．0μg/mL，在此范圍內(nèi)線性回歸方程y=738．47x-26．162，R2＞0．9999。人乳中?；撬岫ㄐ灾貜?fù)性RSD%(n=6)為0．068，定量重復(fù)性RSD%(n=6)為0．943。

人乳；牛乳；?；撬?；丹磺酰氯柱前衍生

牛磺酸的化學(xué)式為C2H7NO3S，相對(duì)分子質(zhì)量125.15，是一種可溶于水的白色或結(jié)晶性粉末。?；撬崾菣C(jī)體含量最豐富的自由氨基酸，能夠促進(jìn)嬰幼兒腦組織智力發(fā)育，提高視覺(jué)技能，改善內(nèi)分泌增強(qiáng)免疫，有效防止缺鐵性貧血，促進(jìn)腸道雙歧菌生成[1]。嬰幼兒缺乏牛磺酸會(huì)導(dǎo)致智力發(fā)育遲緩，視網(wǎng)膜功能紊亂，免疫力低下等。研究表明，剛出生的嬰幼兒缺乏合成?；撬岬陌腚装彼峄撬峄擊让福瑯O易造成?；撬崛狈2,3]。嬰幼兒的牛磺酸攝取主要來(lái)自母乳，而牛乳中牛磺酸含量很少，長(zhǎng)期喂養(yǎng)未強(qiáng)化牛磺酸含量牛乳的嬰幼兒，易造成?；撬崛狈Α?/p>

目前關(guān)于人乳和牛乳中?；撬岷繙y(cè)定的方法一般采用氨基酸自動(dòng)分析法、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法和超高效液相色譜-串聯(lián)色譜法（HPLCMS/MS）[4]。氨基酸自動(dòng)分析法儀器配置復(fù)雜，靈活性差，分析時(shí)間太長(zhǎng)，易造成牛磺酸結(jié)構(gòu)破壞影響檢測(cè)結(jié)果。氣相色譜法和HPLC-MS/MS法樣品前處理復(fù)雜，氣相色譜法衍生反應(yīng)干擾多且反應(yīng)復(fù)雜，尤其是HPLC-MS/MS法檢測(cè)成本高，不利于廣泛推廣[5～7]。因此本試驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定，此方法前處理簡(jiǎn)單、靈敏度高，而且易改進(jìn)分離條件。

本試驗(yàn)采用食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.169-2016第二法（丹黃酰氯柱前衍生法），分別測(cè)定人乳和牛乳不同時(shí)期的?；撬岷?，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，為配方奶粉人乳化提供相關(guān)技術(shù)參考。樣品前處理沉淀蛋白去除干擾，濾液柱前單磺酰氯衍生，紫外高效液相色譜測(cè)定，外標(biāo)法定量[8]。

1 材料與方法

1．1 儀器與標(biāo)準(zhǔn)品

儀器：高效液相色譜（PE紫外檢測(cè)器）；pH計(jì)（METTLER TOLEDO生產(chǎn)MP220）；數(shù)控超聲波振蕩器（KQ-1000DB,昆山市超聲儀器有限公司）；渦旋混合器（IKA VORTEX生產(chǎn)，型號(hào)GENIUS 3）。

牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)品（上海安普實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司生產(chǎn)）；?；撬醿?chǔ)備液：濃度1mg/mL；?；撬峁ぷ饕海瑵舛确謩e為0μ g/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL。

1．2 試劑

沉淀劑Ⅰ：150g/L亞鐵氰化鉀溶液，亞鐵氰化鉀（科密歐生產(chǎn)，分析純）。沉淀劑Ⅱ：300g/L乙酸鋅溶液，乙酸鋅（科密歐生產(chǎn)，分析純）。碳酸鈉緩沖液：pH9.5,80mmol/L，無(wú)水碳酸鈉（科密歐生產(chǎn)，優(yōu)級(jí)純）。丹磺酰氯溶液：1.5mg/mL，臨用現(xiàn)配，丹磺酰氯（CNW生產(chǎn)，色譜純）。鹽酸甲胺溶液：20mg/ mL，鹽酸甲胺（CNW生產(chǎn)，色譜純）。乙酸鈉緩沖液：10mmol/L，pH4.2，經(jīng)0.45μm微孔膜過(guò)濾，無(wú)水乙酸鈉（科密歐生產(chǎn)，優(yōu)級(jí)純）。

1．3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 人乳采集設(shè)計(jì)

研究表明牛磺酸含量在人乳中隨著哺乳期時(shí)間變化而變化，根據(jù)人泌乳期分為：初乳期（產(chǎn)后0～9d內(nèi)）、過(guò)渡期（產(chǎn)后9～30d）、成熟期（2～5個(gè)月）、晚乳期（6～12個(gè)月）。人乳采樣分為四組，每組進(jìn)行10個(gè)不同樣本測(cè)定。

人乳的采集對(duì)象為產(chǎn)后0～12個(gè)月健康產(chǎn)婦。以“知情自愿”為原則，乳母飲食均衡，奶水充足，無(wú)重大急、慢性遺傳傳染病，無(wú)任何哺乳禁忌癥。

1.3.2 牛乳采集設(shè)計(jì)

根據(jù)牛的泌乳期階段劃分：初乳期（產(chǎn)后0～14d）、泌乳早期（產(chǎn)后1～4個(gè)月）、泌乳中期（產(chǎn)后4～8個(gè)月）、泌乳后期（產(chǎn)后8個(gè)月～干奶）。牛乳采樣分為四組，每組進(jìn)行10個(gè)不同樣本測(cè)定。牛乳來(lái)自完達(dá)山天然有機(jī)牧場(chǎng)。

1．4 樣品前處理

樣品提?。悍Q取30g液體試樣（精確至0.01g）于100mL容量瓶，加入50～60℃溫水至70mL左右，超聲振蕩10min，冷卻至室溫。加入1mL沉淀劑，渦旋混合，定容過(guò)濾。

樣液提?。何?mL濾液至10mL具塞玻璃試管，加1mL碳酸鈉緩沖液、1mL丹磺酰氯溶液，渦旋混合，室溫避光衍生2h，反應(yīng)1h振蕩一次，加100μL鹽酸甲胺渦旋混合，終止反應(yīng)。樣液過(guò)0.45μm微孔膜上機(jī)待測(cè)。牛磺酸工作液與試樣同等條件下衍生。

1．5 分離條件

色譜柱為美國(guó)Phenomenex生產(chǎn)的Luna C18，5μm，4.6×250mm。流動(dòng)相為乙酸鈉緩沖溶液：乙腈=70∶30。流速1mL/min。進(jìn)樣量20μL。紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。

2 數(shù)據(jù)分析

2．1 牛磺酸目標(biāo)峰的確定

采用同一前處理方法分別對(duì)?；撬針?biāo)準(zhǔn)品、含少量?；撬岬呐Ｈ?、?；撬崽砑恿繛?mg/100g的牛乳、含有?；撬岬娜巳?、?；撬崽砑恿繛?0mg/100g的人乳進(jìn)行測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1～5。通過(guò)分析圖1?；撬岬哪繕?biāo)峰保留時(shí)間初步確定為7.552min。分別對(duì)牛乳和人乳進(jìn)行?；撬峒訕?biāo)對(duì)比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，牛乳（圖2、圖3）和人乳（圖4、圖5）中?；撬嵩谠摫Ａ魰r(shí)間與其他峰都得到較好地分離，該保留時(shí)間內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)到干擾峰，并驗(yàn)證了此方法的有效性。因此可以確定圖3牛乳中?；撬崮繕?biāo)峰的保留時(shí)間為7.557min，圖5人乳中?；撬崮繕?biāo)峰的保留時(shí)間為7.556min。

圖1 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)品圖譜

圖2 含少量?；撬崤Ｈ閳D譜

圖3 ?；撬崽砑恿繛?mg/100g牛乳圖譜

圖4 含牛磺酸人乳圖譜

圖5 ?；撬崽砑恿繛?0mg/100g人乳圖譜

2．2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限及人乳定量重復(fù)性

得出線性回歸方程y=7 3 8.4 7x-2 6.1 6 2，R2＞0.9999，如表1和圖6。

表1 牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與對(duì)應(yīng)峰面積

圖6 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)曲線

本試驗(yàn)采用GB 5413.26-2010第二法（丹黃酰氯柱前衍生法）檢測(cè)，本文使用檢出范圍為2～32μg/mL，本文最低濃度2μg/mL低于方法檢出限5μg/mL。

人乳牛磺酸檢測(cè)疊加圖見(jiàn)圖7，樣本為6時(shí)定性重復(fù)性RSD%為0.068，定量重復(fù)性RSD%為0.943。說(shuō)明采用此方法測(cè)定人乳中?；撬?，試驗(yàn)重現(xiàn)性良好。

圖7 人乳牛磺酸定性定量色譜疊加圖

2．3 人乳和牛乳中?；撬岷?/p>

表2 人乳和牛乳不同時(shí)期分組測(cè)定牛磺酸含量 單位：mg/100g

人乳和牛乳中不同時(shí)期試驗(yàn)分組測(cè)定?；撬岷恳?jiàn)表2。通過(guò)表2人乳和牛乳不同時(shí)期的?；撬岷繑?shù)據(jù)對(duì)比，得到圖8。

圖8 人乳和牛乳中不同時(shí)期?；撬岷繉?duì)比折線圖

人乳和牛乳中牛磺酸含量都是動(dòng)態(tài)變化的，人乳中?；撬岷科骄鶠?.31mg/100g，牛乳中?；撬岷科骄鶠?.14mg/100g。人乳中?；撬岷渴桥Ｈ榈?.2倍。人乳初乳期?；撬岷孔罡?，分別是過(guò)渡期的1.4倍，成熟期的1.6倍，晚乳期的2.3倍。牛乳初乳期?；撬岷孔罡撸謩e是泌乳早期、泌乳中期的1.7倍，泌乳后期的2.1倍。

通過(guò)對(duì)50個(gè)實(shí)際人乳分組調(diào)查發(fā)現(xiàn)，乳母食用更多魚(yú)類、蛋類、肝臟類制品能有效提高乳中牛磺酸含量，尤其在初乳期十分明顯。

3 結(jié)論與展望

牛乳中?；撬岷可?，人乳成分復(fù)雜，本試驗(yàn)通過(guò)采取增大稱樣量提高靈敏度，利用丹黃酰氯柱前衍生法，紫外檢測(cè)器測(cè)定人乳和牛乳中?；撬岷?。此方法不會(huì)破壞?；撬岜旧砉逃薪Y(jié)構(gòu)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。前處理操作簡(jiǎn)便，儀器基線穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，檢測(cè)靈敏度高，可以滿足分析要求，適用于大量樣品檢測(cè)工作。

通過(guò)對(duì)牛乳和人乳四個(gè)不同時(shí)期分組試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)牛乳中?；撬岷窟h(yuǎn)遠(yuǎn)低于人乳。人乳中?；撬岷渴桥Ｈ橹械?.2倍，且以初乳期?；撬岷孔罡?。試驗(yàn)結(jié)果可為中國(guó)人乳中?；撬岷空{(diào)查提供參考，為以后研制早產(chǎn)兒奶粉、細(xì)化喂養(yǎng)奶粉配方提供了理論依據(jù)。此檢測(cè)方法為以后人乳和牛乳中其他低分子含量的多肽測(cè)定提供了參考。

[1] 李宏,鄭娓,舒斯云．新生兒缺氧缺血性腦損傷的病理機(jī)制與?；撬岬纳飳W(xué)功能[J]．解剖學(xué)研究,2015,4:290-293．

[2] 宋春梅．?；撬崮X發(fā)育的研究進(jìn)展[J]．第四軍醫(yī)大學(xué)吉林軍醫(yī)學(xué)院報(bào),2002,1:76．

[3] 梁尚棟,李煥英．牛磺酸在神經(jīng)系統(tǒng)中的生理和病理作用[J]．國(guó)外醫(yī)學(xué)．生理病理科學(xué)與臨床分冊(cè),2002,22(1):76．

[4] 王穎,張妮娜,段鶴君．食品中?；撬釡y(cè)定方法比較[J]．中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,19:43-47．

[5] 郭建軍．鮮人乳和鮮牛乳中主要游離氨基酸成分的分析比較[J]．福建輕紡,2000,6:7-9．

[6] 任向楠,蔭士安．人乳中氨基酸的含量及分析方法研究發(fā)展[J]．氨基酸和生物資源,2013,35(3):63-67．

[7] 陶保華,陳啟．超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定人乳中的膽堿、L-肉堿、乙?；?L-肉堿和?；撬醄J]．食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2014,07:157-163．

[8] 食品按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)．食品中?；撬岬臏y(cè)定（GB 5009．169-2016）[S]．

Study on the Determination of Taurine in Human Milk and Bovine Milk

LI Ze-jun
(Quality Inspection Center, Heilongjiang Wandersun Dairy Products Co., Ltd., Harbin 150078)

The content of taurine in four different periods of human milk and milk was determined by UV detector before and after derivatization with GB 5413.26-2010. Through the experimental data, the content of taurine in human milk was 8.2 times that in milk, which could be used as reference for functional milk strengthening taurine. The peak time of taurine in human milk was 7.556min and the peak time of taurine in milk was 7.557min. The linear regression equation y=738.47x-26.162, R2＞ 0.9999 was used in the range of 1.0～16.0μg/mL. The RSD% (n = 6) of the taurine in human milk was 0.068 and the RSD% (n = 6) of the quantitative repeatability was 0.943.

Human milk; Milk; Taurine; Monosulfonyl chloride pre-column derivatization

TS252.1

A

1004-4264（2017）05-0032-03

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.05.009

2017-01-18

李則均（1983-），女，山東人，本科，工程師，研究方向?yàn)槿槠焚|(zhì)量分析。