徐嘉淦石偉葉影石佳高祥福龍惠珍

補(bǔ)中益氣湯對(duì)脾虛慢傳輸型便秘小鼠結(jié)腸組織血管活性腸肽的影響

徐嘉淦1石偉1葉影1石佳1高祥福2龍惠珍2

目的觀察補(bǔ)中益氣湯對(duì)脾虛慢傳輸型便秘（STC）小鼠結(jié)腸組織血管活性腸肽（VIP）的影響，探對(duì)其治療脾虛慢傳輸便秘的作用機(jī)制。方法32只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為正常組（8只）和造模組（24只），造模組采用番瀉葉+限制飲水+控制飲食的方法復(fù)制小鼠脾虛STC模型，模型復(fù)制成功后，將造模組小鼠隨機(jī)分為模型組、中藥組（補(bǔ)中益氣湯）和西藥組（莫沙必利），各組灌胃對(duì)應(yīng)的藥物，1天1次，共7天，末次給藥后檢測(cè)各組小鼠糞便含水率、腸道推進(jìn)率及結(jié)腸組織VIP含量。結(jié)果中藥組小鼠糞便含水率（55.55±10.90）%，腸道推進(jìn)率（69.84±9.67）%，分別高于模型組的（45.50±13.04）%和（50.44±14.45）%（P均<0.05），中藥組小鼠結(jié)腸組織VIP水平（156.73±11.41）ng/L，低于模型組的（245.12±12.43）ng/L（P<0.05）。西藥組小鼠糞便含水率、腸道推進(jìn)率分別為（52.83± 12.43）%，（65.15±13.56）%，與中藥組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），西藥組小鼠結(jié)腸組織VIP水平（120.91±17.65）ng/L較中藥組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論補(bǔ)中益氣湯能提高小鼠糞便含水率及腸道推動(dòng)率，改善脾虛慢傳輸型便秘癥狀，其作用機(jī)制可能與降低結(jié)腸組織VIP水平有關(guān)。

小鼠；慢傳輸型便秘；補(bǔ)中益氣湯；脾虛；血管活性腸肽

結(jié)腸慢傳輸型便秘（slow transit constipation，STC）是指因胃腸道動(dòng)力減弱，腸內(nèi)容物傳輸減慢而導(dǎo)致的便秘[1]。臨床主要表現(xiàn)為排便困難，大便次數(shù)減少，便意減弱甚至消失。流行病學(xué)研究顯示，STC約占功能性便秘的45.5%[2]，隨著生活水平的提高，這一比例正逐年上升。便秘嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，甚至?xí)l(fā)心腦血管意外，危及生命。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察補(bǔ)中益氣湯對(duì)STC模型小鼠腸道傳輸功能及血管活性腸肽（VIP）的影響，初步探討補(bǔ)中益氣湯治療STC可能作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性昆明小鼠32只，體質(zhì)量（20±2）g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心代購(gòu)并飼養(yǎng)于該中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證：SYXK（浙）2008-0115。各組小鼠常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)7天。

1.2 藥物與試劑補(bǔ)中益氣湯（黃芪18g，黨參15g，生白術(shù)、炙甘草各9g，升麻、柴胡、陳皮各6g，當(dāng)歸3g，由浙江省中醫(yī)院中藥房提供），制備成濃度為0.225g/mL的水煎液備用。枸櫞酸莫沙必利片：江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，5mg/片，國(guó)藥準(zhǔn)字：19990315，配置成濃度為0.095mg/mL的混懸液。番瀉葉煎液：取番瀉葉500g（由浙江省中醫(yī)院中藥房提供）加入5L沸水中浸泡10min后，過(guò)濾，取濾液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)皿將其濃縮成1g/mL的溶液，裝入瓶?jī)?nèi)，備用?；钚蕴脊辔敢海喝“⒗畼?shù)膠100g（天津市登科化學(xué)試劑有限公司），加入800mL水，煮沸直至溶液透明后，加入粉狀活性炭50g（天津市北辰方正試劑廠）,再煮沸3次，待溶液冷卻后加水定容到1000mL，備用；血管活性腸肽（VIP）試劑盒：上海信裕生物科技有限公司提供，產(chǎn)品貨號(hào)xy-E12161。

1.3 儀器電子精密天平：北京賽多利斯天平有限公司；酶標(biāo)儀：芬蘭（Labsystems Multiskan MS）公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與模型制備將32只雄性昆明小鼠按照完全隨機(jī)設(shè)計(jì)原則分成正常組、模型組、西藥組、中藥組四組，每組8只，除正常組外余三組根據(jù)文獻(xiàn)[3-4]的方法，采用番瀉葉+限制飲水+控制飲食的方法復(fù)制小鼠脾虛STC模型。具體方法：造模第1～7天，按20g/（kg·d）灌胃番瀉葉水煎液（1g/mL），同時(shí)自由飲水進(jìn)食，造成脾虛模型，模型成功標(biāo)志：小鼠活動(dòng)減少，反應(yīng)較慢，四肢乏力，消瘦拱背，被毛枯槁。第8天開(kāi)始停止灌胃番瀉葉水煎液，隔天喂食滅菌生大米4～8g，隔天飲水1次，每次飲水30min，共15天。

2.2 藥物干預(yù)造模完成后，除正常組外，余三組仍以隔天喂食滅菌生大米4～8g，隔天飲水1次，每次飲水30min。同時(shí)根據(jù)小鼠體表面積換算成人等效劑量的方法[5]，中藥組每天灌胃補(bǔ)中益氣湯煎液9g/kg，西藥組每天灌胃莫沙必利混懸液1.9mg/kg，正常組和模型組每天各灌胃生理鹽水0.2mL/10g。各組每天給藥1次，連續(xù)灌胃7天。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 糞便含水率末次給藥結(jié)束后，收集各組小鼠糞便各12顆，托盤電子分析天平稱重，記為濕重，然后置于80℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中24h后再稱重，記為干重。糞便含水率=（濕重-干重）/濕重×100%。

2.3.2 腸道推進(jìn)率末次給藥前，各組小鼠禁食不禁水14h，給藥后，按0.2mL/20g的劑量灌胃活性炭灌胃液，立刻計(jì)時(shí)，30min后，用頸椎脫臼法處死小鼠，迅速打開(kāi)腹腔，仔細(xì)分離小鼠腸系膜，剪取上自幽門、下至回盲部的小腸管，置于托盤上，測(cè)量小腸總長(zhǎng)度以及活性炭推動(dòng)的距離，計(jì)算小腸推動(dòng)率。小腸推動(dòng)率=活性炭推動(dòng)的距離/小腸總長(zhǎng)度×100%

2.3.3 結(jié)腸VIP水平測(cè)量小鼠小腸長(zhǎng)度及炭末推進(jìn)的距離后，迅速切取結(jié)腸中段腸管3cm，稱重，用預(yù)冷的生理鹽水進(jìn)行清洗，沖去腸道內(nèi)容物，然后使用玻璃勻漿器，采用手工勻漿的方式制作組織勻漿，然后用離心機(jī)以2000r/min的轉(zhuǎn)速離心15min后，取上清凍存于-80℃，留以待測(cè)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Elisa）的方法檢測(cè)VIP水平。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示定量資料，使用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩樣本間均數(shù)的比較；采用單因素方差分析（One-Way ANOVA）進(jìn)行多樣本均數(shù)比較，當(dāng)方差齊時(shí)用LSD法，不齊時(shí)選用Dunnett's T3檢驗(yàn)。P＜0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 補(bǔ)中益氣湯對(duì)小鼠糞便含水率的影響與正常組相比，模型組小鼠糞便含水率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，中藥組糞便含水率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），西藥組雖也有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

3.2 補(bǔ)中益氣湯對(duì)小鼠腸道推進(jìn)率的影響與正常組比較，模型組小鼠腸道推動(dòng)率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，各藥物干預(yù)組腸道推動(dòng)率有上升，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；中藥組較西藥組腸推動(dòng)率有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠糞便含水率及腸道推進(jìn)率比較

表1 各組小鼠糞便含水率及腸道推進(jìn)率比較

注：與正常組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

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3.3 補(bǔ)中益氣湯對(duì)小鼠結(jié)腸組織VIP水平的影響

與正常組比較，模型組小鼠結(jié)腸VIP濃度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，各藥物干預(yù)組小鼠結(jié)腸VIP濃度均有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；西藥組較中藥組VIP濃度下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠結(jié)腸VIP含量

表2 各組小鼠結(jié)腸VIP含量

注：與正常組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與中藥組比較，#P<0.05；VIP：血管活性腸肽

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4 討論

STC為臨床常見(jiàn)病，其病情頑固，治療困難，目前病因尚不明確，臨床上并無(wú)針對(duì)STC的特效藥，現(xiàn)多采用瀉劑或促動(dòng)力藥對(duì)癥處理，療效欠佳，且副作用多。

STC屬中醫(yī)“便秘”范疇，基本病機(jī)為熱結(jié)、寒凝、氣滯、氣血陰陽(yáng)虧虛等，導(dǎo)致大腸傳導(dǎo)失司發(fā)為便秘[6]。臨床上，STC多表現(xiàn)為排便困難、便意減弱或消失，且常常伴有納差乏力、神疲氣短等癥狀，與中醫(yī)脾氣虛關(guān)系密切。趙蕾等[7]研究發(fā)現(xiàn)慢性功能性便秘人群中，以氣虛型（70.6%）最多見(jiàn)，顯示脾氣虛在慢性便秘發(fā)病中起著重要的作用。

補(bǔ)中益氣湯出自李東垣《內(nèi)外傷辨惑論·卷中·飲食勞倦論》，原方由黃芪、人參、白術(shù)、升麻、柴胡、陳皮、當(dāng)歸、炙甘草等八味中藥構(gòu)成，為補(bǔ)氣升陽(yáng)，甘溫除熱的代表方。補(bǔ)中益氣湯具有雙向調(diào)節(jié)作用，能促進(jìn)或抑制腸道蠕動(dòng)，恢復(fù)腸道功能[8]。何云貴[9]運(yùn)用補(bǔ)中益氣湯治療慢性便秘150例，結(jié)果顯示治療組總有效率為96.6%，療效明顯優(yōu)于莫沙必利組（68%）。另有學(xué)者[10]認(rèn)為，補(bǔ)中益氣湯具有補(bǔ)氣通便之效，運(yùn)用補(bǔ)中益氣湯治療結(jié)腸慢傳輸型便秘，并與西藥組（西沙比利）進(jìn)行比較，顯示中藥組有效率高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

血管活性腸肽（VIP）是腸神經(jīng)系統(tǒng)中主要的抑制性遞質(zhì)之一，能夠調(diào)節(jié)腸道平滑肌的舒張，促進(jìn)胃腸道腺體分泌，抑制腸道蠕動(dòng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[11]發(fā)現(xiàn)，慢性便秘模型組大鼠結(jié)腸組織VIP表達(dá)高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示VIP的分布異常可能與慢性便秘發(fā)病有關(guān)。

本研究顯示，補(bǔ)中益氣湯能夠提高STC模型小鼠糞便含水率及腸道推動(dòng)率，從而改善便秘癥狀，同時(shí)降低腸抑制遞質(zhì)VIP的水平。補(bǔ)中益氣湯改善脾虛型慢傳輸便秘的癥狀的作用機(jī)制可能與降低結(jié)腸VIP水平有關(guān)。

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（收稿：2016-08-16修回：2016-10-09）

Effects of Buzhongyiqi Decoction on Vasoactive Intestinal Peptide in Colonic Tissue in Slow Transit Con－stipation Mice with Spleen Deficiency

XU Jiagan1,SHI Wei1,YE Ying1,SHI Jia1,GAO Xiangfu2,LONG Huizhen21 The First Clinical Medical College,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China;2 Department of Internal Chinese Medicine,the First Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou(310000),China

ObjectiveTo investigate the effects of buzhongyiqi decoction on vasoactive intestinal peptide（VIP）in slow transit constipation（STC）mice with spleen deficiency,in an attempt to explore the underlying mechanism.MethodsThirty-two male Kunming mice were randomly divided into normal group（n=8）and model group（n= 24）.The model group was copied to STC model with spleen deficiency by folium sennae+limited water+control diet. Then,the model group were randomly divided into model control group,Chinese herb group（buzhongyiqi decoction）and western medicine group（mosapride）.Each group was treated one time a day by gavage with its corresponding drug,the course lasted for 7d.After the last treatment,the moisture content of feces,intestinal propulsion rates and the content of VIP in colonic tissue were detected.ResultsMoisture content of feces and intestinal propulsion rate in Chinese herb group were（55.5±10.90）%and（69.84±9.67）%,respectively,which were higher than those in model control group[（45.50±13.04）%and（50.44±14.45）%,P<0.05].VIP level of Chinese herb group was lower than that of model control group[（156.73±11.41）ng/L vs（245.12±12.43）ng/L,P<0.05].The moisture content of feces and Intestinal propulsion rate in western medicine group were（52.83±12.43）%and（65.15±13.56）%; no significant difference was found between Chinese herb group and western medicine group（P>0.05）.The VIP level of western medicine group[（120.91±17.65）ng/L]was significantly lower than that of Chinese herb group（P< 0.05）.ConclusionBuzhongyiqi decoction can increase the moisture content of feces and intestinal propulsion rate and improve symptoms of STC with spleen deficiency.The underlying mechanism might be related to the decreaseof VIP in colonic tissue.

mice;slow transit constipation;buzhongyiqi decoction;spleen deficiency;vasoactive intestinal peptide

浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)計(jì)劃（新苗人才計(jì)劃）項(xiàng)目（No.2015R410027）

1浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院（杭州310053）；2浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科（杭州310000）

徐嘉淦，Tel：15700067082；E-mail：574800732@qq.com