周 翔陳志亮熊秀林顧 寧△

（1.南京中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學三附院，江蘇 南京 210001；3江西中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，江西 南昌 330000）

·研究報告·

化濕降濁方對高尿酸血癥模型大鼠血尿酸、尿尿酸水平及腎功能的影響*

周 翔1陳志亮2熊秀林3顧 寧2△

（1.南京中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學三附院，江蘇 南京 210001；3江西中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，江西 南昌 330000）

目的 觀察化濕降濁方對高尿酸血癥模型大鼠血尿酸、尿尿酸及腎功能的影響。方法 采用灌胃次黃嘌呤聯(lián)合氧嗪酸鉀腹腔注射方法復制高尿酸血癥大鼠模型。以苯溴馬隆為陽性藥物對照，研究化濕降濁方（1.2 g/mL）對高尿酸血癥大鼠血尿酸（UA）、尿UA、血清黃嘌呤氧化酶（XOD）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）的影響。結(jié)果 與空白組對比，模型組大鼠血UA、血清XOD的活性顯著升高（均P＜0.01），尿UA水平下降（P＜0.01）。與模型組相比，中藥組與苯溴馬隆組都能不同程度地促進大鼠尿UA排泄、抑制血清XOD的活性以達到降低血UA的作用，其差異具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）。中藥組與苯溴馬隆組都能不同程度降低模型大鼠異常的血清SCr、BUN水平，與模型組大鼠比較，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01），且中藥組較苯溴馬隆組降低異常的血清SCr作用更明顯（P＜0.01）。結(jié)論 灌胃次黃嘌呤聯(lián)合氧嗪酸鉀腹腔注射可以成功復制高尿酸血癥模型大鼠；化濕降濁方可明顯促進模型大鼠尿UA的排泄，具有抑制血清XOD的活性，從而達到降低血UA目的，并能一定程度改善異常的腎功能。

化濕降濁方 高尿酸血癥 模型大鼠 血尿酸 尿尿酸 腎功能

高尿酸血癥 （HUA）是指血尿酸水平超過正常（男＞420 μmol／L，女＞357 μmol／L）的一種狀態(tài)，其發(fā)病機制與遺傳背景 （如HGPRT/PRS等基因缺陷）、內(nèi)分泌和環(huán)境因素等相關［1］。高尿酸狀態(tài)可加重心血管事件發(fā)生，近年來，有大量流行病學證據(jù)和臨床研究顯示，HUA與心血管事件（高血壓、冠心病、心肌梗死、心力衰竭等）的發(fā)病率及死亡率相關，是心血管事件的一項獨立危險因素［3］，故高尿酸的早期干預，尤其是心血管疾病患者防治HUA的意義重大?；仡櫸墨I資料，關于中藥或中西藥聯(lián)合治療HUA均取得了較好的臨床療效。本研究建立HUA大鼠模型，觀察化濕降濁方干預作用，初步探析化濕降濁方影響尿酸代謝的作用機制，為其臨床應用提供一定實驗依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物 雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量（180±20）g，購自浙江省實驗動物中心，許可證號：SCXK（浙）2014-001。

1.2 藥物試劑 1）化濕降濁方：澤瀉25 g，土茯苓25 g，炒黃柏20 g，炒蒼術(shù)15 g，豬苓10 g，川牛膝20 g。上述中藥（飲片）加水煎，將化濕降濁方藥物加水浸泡0.5 h，文火煎煮2次，每次40 min，合并2次水煎液，并過濾取藥液，70℃恒溫水浴，濃縮成每毫升藥液含生藥1.2 g，按化濕降濁方成人劑量計算每日60 mL，用蒸餾水配成所需濃度（1.2 g/mL），給藥濃度為0.72 g/mL，置于4℃?zhèn)溆谩?）苯溴馬?。ㄊ蕾Q(mào)天階制藥有限責任有限公司，批號H20033683）壓碎，加蒸餾水溶解配成0.5 mg/mL，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?）氧嗪酸鉀（OAPS）購自美國Sigma公司（STBC1486V）。4）次黃嘌呤（HX）購自上海阿拉丁生化科技有限公司（D1513017）。5）尿酸（20160704）、肌酐、尿素氮（批號20160613），黃嘌呤氧化酶（XOD）試劑盒（20160627），上述試劑盒均采自南京建成生物研究所。

1.3 儀器 7600全自動生化分析（日本日立公司）；低速自動平衡離心機 （KUBOTA Corporation-5420型）；FSH-Ⅱ高速電動勻漿機 （江蘇金壇市環(huán)宇科學儀器廠）；光譜752紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；酶標儀（BIDRAD Corporation 680型）。

1.4 造模 選用尿酸前體物質(zhì)次黃嘌呤和尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀聯(lián)合應用的造模方法建立大鼠HUA病理模型［2］。造模灌胃予大鼠HX（30 g/L可溶性淀粉配制），體積為2 mL/kg，每日1次。第2日，除空白組外，各組大鼠繼續(xù)給予OAPS（200 mg/kg，體積為1 mL/kg）腹腔注射，每隔48 h腹腔注射1次。

1.5 分組及給藥 普通飼料適應性喂養(yǎng)1周后，將40只雄性SD大鼠隨機分為4組，空白組10只，模型組10只，中藥組10只，苯溴馬隆組10只，大鼠造模同1.4制備HUA大鼠模型，至造模的第7日開始，中藥組與別嘌呤醇組上午造模，下午灌胃給藥1次，空白組、模型組均予等量0.9%氯化鈉注射液灌胃，各組連續(xù)7 d。

1.6 指標檢測 在造模給藥第14日清晨將大鼠放入代謝籠，收集次日24 h尿，取新鮮尿樣以3500 r/min離心15 min，取上清，通過全自動生化分析儀檢測尿尿酸；收集尿液結(jié)束后禁食12 h，將各組大鼠腹腔注射水合氯醛（350 mg/kg）麻醉，由腹主動脈取血3～5 mL，加入抗凝劑，靜置2 h后，離心（3000 r/min，15 min）后取上層清液，具體操作步驟按試劑盒說明進行。

1.7 統(tǒng)計學處理 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理。計量資料均以（±s）表示，多樣本均數(shù)的兩兩比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠血清UA、尿UA、血清XOD的比較 見表1。與空白組比較，模型組大鼠尿UA顯著降低，而血清UA、血XOD均顯著升高（均P＜0.01），提示大鼠HUA模型制作成功。中藥組與苯溴馬隆組均能不同程度降低HUA模型大鼠血清UA、XOD水平，與模型組大鼠比較，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01），其中苯溴馬隆組降低血清UA的作用較中藥組更為明顯（P＜0.01），而中藥組降低血清XOD的作用較苯溴馬隆組更為明顯（PP＜0.01）。中藥組與苯溴馬隆組大鼠尿UA水平，與模型組大鼠比較，均有不同程度地升高（均P＜0.01），其中苯溴馬隆組排泄UA的作用較中藥組更為明顯（P＜0.01）。

表1 各組大鼠血清UA、尿UA、血清XOD比較（±s）

表1 各組大鼠血清UA、尿UA、血清XOD比較（±s）

與空白組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.01；與苯溴馬隆組比較，▲P＜0.01。下同。

組別 n 血XOD（U/L）血清UA（μmol/L） 尿UA（μmol/L）空白組 10 12.3±2.8模型組 10 27.8±5.1*苯溴馬隆組 10 17.2±4.9△110.2±17.5 254.7±24.1 310.1±34.1*129.6±32.7*179±22.6△221.2±25.6△中藥組 10 11.8±6.2△▲194±43.3△195.5±24.3△▲

2.2 各組大鼠血清Scr、BUN的比較 見表2。模型組大鼠血SCr、BUN水平較空白組均有不同程度升高（均P＜0.01），表明大鼠制作HUA模型后存在不同程度的腎功能異常。中藥組與苯溴馬隆組能不同程度降低HUA模型大鼠異常的血清SCr、BUN水平，與模型組大鼠比較，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01），且中藥組較苯溴馬隆組降低異常的血清SCr作用更明顯（P＜0.01）。

3 討 論

中醫(yī)學并無“高尿酸血癥”相應的病名，歷史上諸多醫(yī)著中“痹證”“濁毒”“濕毒”等章節(jié)內(nèi)容涉及于此，其主要形成與先天稟賦不足，肝、脾、腎三臟虧虛以致筋脈失養(yǎng)有關，或后天嗜食肥甘厚味，海鮮發(fā)物，久則損傷脾胃，脾失健運、釀濕生濁，濕濁蘊毒。又濕性黏滯，濕濁流注血脈，久而化熱，內(nèi)蘊化痰，痰濕膠結(jié)，腐傷血肉，形成痰濁瘀阻的病理基礎。在充分參考文獻資料和前期臨床實踐基礎上，本課題組總結(jié)出 “濕濁內(nèi)蘊”是形成HUA的病理基礎，故以祛濕化濁，利小便為治法，自擬化濕降濁方。

表2 各組大鼠血清Scr、BUN比較（±s）

表2 各組大鼠血清Scr、BUN比較（±s）

組別 n SCr（μmol/L） BUN（mmol/L）空白組 10 103.9±28.9 27.6±17.2模型組 10 236.4±46.5*57.3±21.6*苯溴馬隆組 10 206.9±22.3△48.2±14.6△中藥組 10 149.6±31△▲36.6±23.8△

化濕降濁方中重用澤瀉、土茯苓為君，以健脾化濕兼清熱；黃柏味苦燥濕，助下焦泄?jié)嵋詾槌?；蒼術(shù)、豬苓為佐藥，蒼術(shù)性辛苦溫，可消痰水，逐皮間風水結(jié)腫；豬苓甘淡平，歸腎經(jīng)，善利尿消腫；川牛膝引藥下行為使，兼能補肝腎，扶正固本。該方具有祛濕化濁、利尿消腫、清熱通絡之功。近來來，現(xiàn)代藥理學表明：土茯苓［4］具有顯著的降低血尿酸作用，對于腎功能有一定程度的改善作用，可減輕其全身炎癥反應應激狀態(tài)；亦有學者研究提示［5］黃柏與蒼術(shù)的提取物對HUA小鼠起到明顯降低尿酸水平作用，此外其他復方研究表明二妙丸、五子承氣湯、活血四妙湯等均具有良好的降低血尿酸作用［6-8］。

現(xiàn)代醫(yī)學表明，無癥狀HUA可以促進低密度脂蛋白膽固醇過氧化，促進血小板黏附、聚集，最終引起血栓形成，同時尿酸鹽結(jié)晶沉積對血管內(nèi)膜有著直接損傷作用［9］。Yu等［10］研究報道，尿酸可能通過有機陰離子轉(zhuǎn)運體（OTA）進入人臍靜脈內(nèi)皮細胞，并快速誘導氧化應激反應，反過來進一步激活局部的腎素-血管緊張素系統(tǒng)，并產(chǎn)生血管緊張素Ⅱ，促進心室重塑過程。目前臨床西藥常用苯溴馬隆作為降尿酸的主要藥物，苯溴馬隆主要具有抑制近曲腎小管對尿酸的重吸收作用，雖使尿尿酸排出增多，但常常易于導致尿酸鹽晶體在尿路沉積［11］。由于短時間內(nèi)大量尿酸結(jié)晶沉積于腎臟集合管、腎盂和輸尿管，顯微鏡下可見管腔內(nèi)尿酸結(jié)晶沉積，形成晶體或呈雪泥樣沉積物，這些物質(zhì)可導致輸尿管梗阻或急性腎衰竭［12］。同時，無癥狀HUA合并腎臟病變的風險系數(shù)增高，腎損害的程度與血尿酸過高持續(xù)時間呈線性關系，導致腎臟纖維形成，腎小球硬化、動脈硬化及動脈壁增厚［13］，最終誘發(fā)心血管事件，包括心衰、高血壓、冠心病等。

尿酸作為嘌呤代謝的最終產(chǎn)物，XOD是尿酸形成過程中關鍵酶，是調(diào)控尿酸生成的至關重要的因素。當嘌呤核苷酸經(jīng)過代謝，轉(zhuǎn)化為黃嘌呤，最終需經(jīng)過XOD的氧化，轉(zhuǎn)化為尿酸。人體內(nèi)肝臟XOD的含量最高，其次是小腸［14］，因此抑制XOD活性是治療HUA的主要機制之一，對于高尿酸的早期預防意義重大。

本實驗采用灌胃次黃嘌呤聯(lián)合腹腔注射氧嗪酸鉀來復制高尿酸血癥病理模型，次黃嘌呤作為外源性尿酸形成前體，可直接激活XOD的活性，轉(zhuǎn)化尿酸，再聯(lián)合尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀可減少尿酸分解，維持一定時間內(nèi)的血尿酸濃度［15］。本次實驗選擇血UA、尿UA及血清XOD、腎功能作為檢測指標，著重觀察化濕降濁方促進尿酸排泄、抑制血清XOD活性，從而降低血UA水平及改善異常腎功能的干預效應。結(jié)果表明：化濕降濁方能夠一定程度促進尿UA的排泄及抑制血清XOD活性、阻礙內(nèi)源性尿酸的生成。血Cr和BUN作為腎功能重要指標，化濕降濁方可一定程度減輕HUA模型大鼠的腎損害。本研究結(jié)果為化濕降濁方的臨床應用提供了一定的實驗依據(jù)。

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Effect of HuaShi Jiangzhuo Decoction on Levels of Serum and Urine Uric Acid and Renal Function of Hyperuricemia Model Rats

ZHOU Xiang，CHEN Zhiliang，XIONG Xiulin，et al. The First Clinical MedicalCollege of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210029，China.

Objective：To observe the effect of Huashi Jiangzhuo decoction on hyperuricemia rat model and do the preliminary study of Huashi Jiangzhuo decoction to improve the uric acid metabolism.Methods：Hyperuricemia rat model was replicated by intragastric administration of hypoxanthine combined with potassium oxonate injection.Benzene bromine Malone was taken as positive drug control，the effect of Huashi Jiangzhuo decoction（1.2 g/mL）on serum uric acid（UA），urine UA，serum xanthine oxidase（XOD），blood urea nitrogen（BUN），creatinine（Scr）was oberved.Results：Compared with the control group，the model group significantly increased blood UA and serum XOD（P＜0.01）.Compared with the control group，traditional medicine group and benzene bromine Malone group effectively promoted urinary UA excretion，inhibited the activity of serum XOD in order to reduce the blood UA，the difference was significant（all P＜0.01）；traditional medicine group and benzene bromine Malone group decreased the abnormal serum Scr and content of BUN and the difference was significant（all P＜0.01）；the traditional medicine group did it better than the benzene bromine Malone group on decreasing the abnormal serum Scr，the difference was significant（all P＜0.01）.Conclusion：Intragastric administration of hypoxanthine combined with potassium oxonate by intraperitoneal injection can replicate hyperuricemia model rats successfully；Huashi Jiangzhuo decoction can obviously promote urinary UA excretion，inhibit the activity of serum XOD，reduce blood UA to protect the renal function，thus is worthy of further research and promotion.Gu Ning is the anthor of communication.

Huashi Jiangzhuo decoction；Hyperuricemia；Model Rats；Uric acid；Urine Uric Acid；Renal function

R285.5

A

1004-745X（2017）04-0588-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.04.007

2016-10-06）

江蘇省中醫(yī)藥局科技項目（YB2015058）；南京市中醫(yī)院科研項目（YJ201402）

△通信作者（電子郵箱：zx6214196@sina.com）