沙 亮， 何劍波， 李科志， 陳 闖， 黃 山， 趙蔭農(nóng)， 連 芳， 鄔國(guó)斌

(1 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 肝膽外科， 南寧 530021； 2 廣西醫(yī)科大學(xué)研究生院， 南寧 530021；3 廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 南寧 530021)

特異性下調(diào)LKB1的表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響

沙 亮1,2， 何劍波1， 李科志1， 陳 闖1， 黃 山1， 趙蔭農(nóng)1， 連 芳3， 鄔國(guó)斌1

(1 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 肝膽外科， 南寧 530021； 2 廣西醫(yī)科大學(xué)研究生院， 南寧 530021；3 廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 南寧 530021)

目的 研究特異性下調(diào)LKB1的表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞系SK-hep-1遷移侵襲能力的影響。方法 Real-time PCR和Western Blot檢測(cè)人肝癌細(xì)胞株和人正常肝細(xì)胞HL7702中LKB1表達(dá)情況。設(shè)計(jì)并合成LKB1特異性雙鏈小干擾RNA(LKB1-siRNA)，轉(zhuǎn)染到高表達(dá)LKB1的人肝癌細(xì)胞株SK-hep-1中靶向沉默LKB1基因表達(dá)，并設(shè)置陰性對(duì)照組(NC組)。Real-time PCR和Western Blot檢測(cè)LKB1基因的mRNA水平與蛋白表達(dá)水平的變化。利用CCK-8法檢測(cè)肝癌細(xì)胞增殖能力。通過(guò)體外Transwell小室基質(zhì)侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)，觀察LKB1表達(dá)沉默后對(duì)人肝癌細(xì)胞株SK-hep-1侵襲遷移能力的影響。計(jì)量資料兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。結(jié)果 與正常人肝細(xì)胞HL7702相比，LKB1基因和蛋白在人肝癌細(xì)胞SK-hep-1中高表達(dá)(P值均<0.05)。與NC組相比，siLKB1-1處理組SK-hep-1細(xì)胞中的LKB1基因和蛋白表達(dá)均明顯降低(P值均<0.05)。與NC組相比，siLKB1-1轉(zhuǎn)染的SK-hep-1細(xì)胞增殖速度明顯加快、侵襲和遷移能力明顯增強(qiáng)(1.393±0.022 vs 1.128±0.032、147±19 vs 83±21、113±13 vs 75±17；t值分別為15.313、14.879、8.791；P值均<0.001)。結(jié)論 LKB1有可能參與抑制肝癌增殖、侵襲遷移的過(guò)程并影響肝癌的預(yù)后。

癌， 肝細(xì)胞； LKB1； 細(xì)胞增殖； 腫瘤侵潤(rùn)； 細(xì)胞運(yùn)動(dòng)

LKB1(liver kinase B1)基因又名STK11(serine/thronine protein kinase 11)基因。是由433個(gè)氨基酸構(gòu)成的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，分子量60 kD，包括激酶區(qū)域、N端調(diào)節(jié)域和C端調(diào)節(jié)域。LKB1在人體組織中廣泛表達(dá)，且參與調(diào)控多種生物學(xué)過(guò)程，如細(xì)胞能量代謝、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖及細(xì)胞極性。LKB1胚系突變是導(dǎo)致黑色素斑-胃腸多發(fā)性息肉綜合征(Peutz-Jeghers syndrome，PJS)的主要原因，PJS后期發(fā)生腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)比健康人群要顯著升高[1]。目前研究表明，LKB1作為一個(gè)抑癌基因在多種惡性腫瘤中呈低水平表達(dá)，如非小細(xì)胞肺癌[2]、乳腺癌[3]、胃癌[4]、胰腺癌[5]、肝癌[6]等。LKB1表達(dá)缺失時(shí)會(huì)破壞上皮細(xì)胞的極性而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展、侵襲、轉(zhuǎn)移[7]。在癌基因KrasG12D突變肺癌小鼠模型中，伴隨LKB1的缺失會(huì)顯著縮短腫瘤潛伏期，增加腫瘤負(fù)擔(dān)，促進(jìn)肺癌的侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[8]。在乳腺癌中過(guò)表達(dá)LKB1能夠顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲遷移及血管生成的過(guò)程[9]。同時(shí)發(fā)現(xiàn)LKB1高表達(dá)與乳腺癌的總生存期呈正相關(guān)[10]。此外，在肝癌患者中LKB1的低表達(dá)可能是一個(gè)不良的預(yù)后因子。本實(shí)驗(yàn)利用RNA干擾技術(shù)，以高表達(dá)LKB1蛋白的肝癌細(xì)胞株SK-hep-1為研究對(duì)象，針對(duì)LKB1基因沉默表達(dá)后探討SK-hep-1細(xì)胞的生物學(xué)行為改變，為進(jìn)一步研究肝癌的發(fā)病機(jī)制提供思路。

1 材料與方法

1.1 主要材料

1.1.1 細(xì)胞系 人正常肝細(xì)胞系HL7702、人肝癌細(xì)胞系SK-hep-1、HepG2、SSMC7704細(xì)胞來(lái)源于上海生命科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)，由本實(shí)驗(yàn)保存。

1.1.2 主要試劑 小鼠抗人LKB1單克隆抗體、兔抗人β-actin購(gòu)自Cell Signaling Technology公司、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)抗體購(gòu)自碧云天公司；DMEM培養(yǎng)基、FBS、胰酶購(gòu)自Gibco公司；Lipofectamine2000、Trizol試劑購(gòu)自Invitrogen公司。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、Real-time PCR試劑盒購(gòu)自TOYOBO公司。BCA試劑盒購(gòu)自凱基公司。

1.1.3 小干擾RNA(siRNA)基因序列的設(shè)計(jì) 由上海吉瑪基因化學(xué)技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)并合成3條特異性抑制LKB1基因表達(dá)的siRNA和1條無(wú)關(guān)對(duì)照序列(NC)。siRNA針對(duì)的LKB1目的序列見(jiàn)表1。將含有siRNA粉劑的EP管離心后利用附贈(zèng)的DEPC水溶解為儲(chǔ)存液，放置-20 ℃冰箱備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人正常肝細(xì)胞系HL7702、人肝癌細(xì)胞SK-hep-1、HepG2、SSMC7704在含10%胎牛血清、青霉素(100 U/ml)和鏈霉素(100 μg/ml)的DMEM培養(yǎng)基中維持生長(zhǎng)，細(xì)胞置于37 ℃，含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%時(shí)，用含有EDTA的胰蛋白酶進(jìn)行消化，并以1∶3或1∶4的比例進(jìn)行傳代。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染前24 h取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SK-hep-1細(xì)胞消化計(jì)數(shù)，以3×105細(xì)胞/孔接種于6孔板中，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70%～90%時(shí)，按照Lipofectamine2000說(shuō)明書(shū)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)分為陰性對(duì)照組(NC)、實(shí)驗(yàn)組1(siLKB1-1)、實(shí)驗(yàn)組2(siLKB1-2)和實(shí)驗(yàn)組3(siLKB1-3)。為了檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染效率，SK-hep-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染了FAM標(biāo)記的siRNA,轉(zhuǎn)染6 h后，更換培養(yǎng)基為完全培養(yǎng)基，并在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染24 h后收集各組細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。1.2.3 Real-time PCR檢測(cè)LKB1 mRNA的表達(dá)水平 將轉(zhuǎn)染48 h后的各組細(xì)胞采用Trisol試劑提取總RNA，核酸濃度檢測(cè)儀測(cè)定其濃度和純度，按照TOYOBO逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)合成cDNA。引物序列見(jiàn)表1。按照TOYOBO Real-time PCR試劑盒操作步驟進(jìn)行LKB1基因擴(kuò)增并以β-actin作為內(nèi)參進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性1 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火并延伸45 s，共進(jìn)行40個(gè)反應(yīng)循環(huán)；反應(yīng)結(jié)束建立溶解曲線(xiàn)。同一實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用2-△△CT法計(jì)算。

表1 siRNA及引物序列

1.2.4 Western Blot 檢測(cè)細(xì)胞中LKB1蛋白的表達(dá) 將轉(zhuǎn)染48 h后的各組細(xì)胞棄去培養(yǎng)液，用預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞3次，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入適量的裂解液(按1∶100的比例加入蛋白酶抑制劑PMSF)，晃動(dòng)混勻后置于冰上充分裂解細(xì)胞30 min，4 ℃、12000 r/min離心15 min,收集上清，獲得細(xì)胞總蛋白。按照凱基BCA蛋白含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組總蛋白含量。調(diào)整蛋白質(zhì)樣品濃度，使每孔蛋白質(zhì)上樣量為60 μg，聚丙烯酰胺凝膠電泳，電轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，封閉過(guò)后按照anti-LKB1(1∶100)、anti-β-actin(1∶1000)、4 ℃搖床孵育過(guò)夜，TBST洗膜4次，每次10 min，再分別與相應(yīng)的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育1 h，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

1.2.5 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖曲線(xiàn) 將轉(zhuǎn)染24 h后的各組細(xì)胞消化收集離心重懸，利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)各組細(xì)胞。以5000細(xì)胞/孔接種于96孔板中，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。在細(xì)胞貼壁后24、48、72 h檢測(cè)各組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，每孔加入10 μl的CCK-8試劑，放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，2 h后上機(jī)檢測(cè)每孔光密度(OD)值，繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)。

1.2.6 細(xì)胞侵襲能力檢測(cè) 將Matri-gel膠置于4 ℃過(guò)夜，用無(wú)血清預(yù)冷的DMEM培養(yǎng)基按1∶6稀釋Matri-gel膠混勻，每孔60 μl均勻鋪在24孔Transwell上室的聚碳酸脂膜上，37 ℃過(guò)夜。收集轉(zhuǎn)染24 h后的各組細(xì)胞，消化用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞計(jì)數(shù)，按每孔1×105/200 μl接種于上室。將小室置于24孔板中，下室加入700 μl含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37 ℃、5%CO2培養(yǎng)24 h后取出小室，用棉簽擦去上室未穿膜的細(xì)胞，PBS洗滌2次，700 μl甲醇固定30 min，吉姆薩染色液染色30 min，PBS洗滌干凈，室溫晾干。顯微鏡下取5個(gè)隨機(jī)視野計(jì)數(shù)，計(jì)算平均值，每組重復(fù)2～3次。

1.2.7 細(xì)胞遷移能力檢測(cè) Transwell小室不鋪Matri-gel膠，按細(xì)胞數(shù)目為每孔1×104/200 μl接種于上室，其余實(shí)驗(yàn)步驟同1.2.6節(jié)。

2 結(jié)果

2.1 LKB1在肝癌細(xì)胞系與正常肝細(xì)胞中的表達(dá)差異 采用Real-time PCR和Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞系中LKB1 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。結(jié)果顯示相對(duì)于正常肝細(xì)胞HL7702，LKB1 mRNA在SK-hep-1細(xì)胞中的表達(dá)要顯著高于肝癌細(xì)胞HepG2、SSMC7704(P<0.05)；LKB1 蛋白水平在SK-hep-1細(xì)胞中的表達(dá)也明顯高于HepG2、SSMC7704、HL7702(P<0.05)(圖1)。

圖1 LKB1 mRNA和蛋白在肝癌細(xì)胞系與正常肝細(xì)胞中的表達(dá)情況 a: LKB1 mRNA表達(dá)情況。與肝癌細(xì)胞HepG2、SSMC7704比較，*P<0.05; b:Western Blot 檢測(cè)LKB1蛋白表達(dá)情況

2.2 siRNA轉(zhuǎn)染SK-hep-1細(xì)胞后LKB1 mRNA和蛋白水平表達(dá)情況 Real-time PCR法檢測(cè)siRNA干擾LKB1基因后在mRNA水平的表達(dá)變化，結(jié)果顯示，siLKB1-1處理組LKB1的mRNA表達(dá)相對(duì)NC組明顯降低(P<0.05)。Western Blot 法檢測(cè)siRNA干擾LKB1基因后蛋白水平的表達(dá)變化，結(jié)果顯示，LKB1-1處理組LKB1的蛋白表達(dá)相對(duì)NC組明顯降低(P<0.05)，說(shuō)明細(xì)胞SK-hep-1中的LKB1基因被有效沉默，所以選擇siLKB1-1來(lái)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)(圖2)。

圖2 SK-hep-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染LKB1-siRNA后LKB1 mRNA和蛋白表達(dá)情況 a:LKB1 mRNA的表達(dá)情況。與NC組比較，*P<0.05;b: LKB1蛋白表達(dá)情況

2.3 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng) CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖的結(jié)果顯示，與NC組相比，轉(zhuǎn)染siLKB1-1后的SK-hep-1細(xì)胞增殖在72 h加快(1.393±0.022 vs 1.128±0.032)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.313,P<0.001)(圖3)。

圖3 siLKB1-1轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞的增殖能力變化與NC組比較，*P<0.001

2.4 下調(diào)LKB1后肝癌細(xì)胞遷移能力的變化 利用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特異性下調(diào)LKB1表達(dá)后SK-hep-1細(xì)胞遷移能力的變化，結(jié)果顯示，與NC組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移數(shù)目增多(147±19 vs 83±21)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.879,P<0.001)(圖4)。

圖4 siLKB1-1轉(zhuǎn)染SK-hep-1細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響(吉姆薩染色，×100)

2.5 下調(diào)LKB1后肝癌細(xì)胞侵襲能力的變化 顯微鏡下計(jì)數(shù)各組穿過(guò)基底膜的細(xì)胞數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示，與NC組相比，實(shí)驗(yàn)組穿過(guò)基底膜的細(xì)胞數(shù)增加(113±13 vs 75±17)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.791，P<0.001)(圖5)。

圖5 siLKB1-1轉(zhuǎn)染SK-hep-1細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響(吉姆薩染色，×100)

3 討論

目前根治性手術(shù)切除仍是治療原發(fā)性肝癌的主要方法[11]，但術(shù)后肝癌易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)使得5年生存率仍不理想。由于肝癌發(fā)生過(guò)程隱匿，病情進(jìn)展迅速，惡性程度高，早期癥狀不明顯，致絕大部分患者就診時(shí)已是腫瘤晚期或是出現(xiàn)了肝外轉(zhuǎn)移，失去根治性手術(shù)切除的機(jī)會(huì)。雖然目前認(rèn)為綜合治療肝癌可以發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì)，能夠提高患者的預(yù)后[12]，但是肝癌易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)也使得遠(yuǎn)期療效欠佳。因此，深入研究腫瘤侵襲遷移的分子機(jī)制并探索有效的預(yù)防和治療措施具有重要的臨床意義。

肝癌和大多數(shù)腫瘤一樣，是一個(gè)多因素、多步驟、多基因共同作用的結(jié)果，涉及腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成、侵襲、遷移等一系列生物學(xué)過(guò)程。LKB1作為一個(gè)抑癌基因，其編碼產(chǎn)物為一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，通過(guò)自身磷酸化或者磷酸化下游底物發(fā)揮功能。有研究[13]表明，其在多種惡性腫瘤中表達(dá)缺失并參與惡性進(jìn)展。在能量下降的情況下，LKB1作為AMPK的上游，能夠磷酸化AMPK，從而激活A(yù)MPK，實(shí)現(xiàn)對(duì)mTOR活性的負(fù)性調(diào)控，并進(jìn)一步影響腫瘤的進(jìn)展。在胰腺癌的研究中，LKB1下調(diào)可能通過(guò)減少p53/p21依賴(lài)的生長(zhǎng)抑制作用來(lái)促進(jìn)胰腺導(dǎo)管腺癌的發(fā)生[5]。在乳腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)LKB1可能通過(guò)上調(diào)p21WAF/CIP1和下調(diào)Cyclin D1、Cyclin E的表達(dá)來(lái)抑制細(xì)胞增殖[10]。通過(guò)敲除小鼠LKB1基因，發(fā)現(xiàn)小鼠死于胚胎期，解剖發(fā)現(xiàn)血管發(fā)育異常，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)敲除LKB1后血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)明顯上升，故推測(cè)LKB1可能通過(guò)下調(diào)VEGF發(fā)揮對(duì)腫瘤的抑制作用[14]。有研究[15]發(fā)現(xiàn)LKB1的失活突變通過(guò)mTOR-HIF-1α信號(hào)軸調(diào)控賴(lài)氨酰氧化酶表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)肺癌細(xì)胞的侵襲能力。有研究[16]表明，在胃癌中LKB1通過(guò)下調(diào)CD44的表達(dá)來(lái)抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。在膽管細(xì)胞癌中，低表達(dá)LKB1通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin來(lái)促進(jìn)疾病的進(jìn)展[17]。但LKB1在肝癌中的具體調(diào)節(jié)作用機(jī)制目前還不是十分明確。另有研究[18]表明，肝癌中低表達(dá)LKB1與該疾病的臨床進(jìn)展有密切關(guān)系，LKB1低表達(dá)的肝癌患者預(yù)后更差，提示LKB1的低表達(dá)可能是導(dǎo)致肝癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制之一。

RNA干擾是一種目前常用的基因沉默技術(shù)，利用小分子雙鏈RNA高效、特異地阻斷細(xì)胞內(nèi)特定基因的表達(dá)，促使mRNA降解，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞表現(xiàn)出某種特定基因缺失的表型[19]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)針對(duì)LKB1基因有效干擾的siRNA，將其轉(zhuǎn)染至高表達(dá)LKB1的肝癌細(xì)胞株SK-hep-1中沉默LKB1基因的表達(dá)，然后檢測(cè)該細(xì)胞系體外生物學(xué)行為的改變，從而研究下調(diào)LKB1 表達(dá)后是否可以增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的侵襲遷移能力。Transwell小室模型是用來(lái)研究體外腫瘤細(xì)胞侵襲遷移能力的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法，通過(guò)模擬腫瘤細(xì)胞降解細(xì)胞外基質(zhì)和穿過(guò)基底膜的侵襲遷移過(guò)程。通過(guò)熒光定量PCR及蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，LKB1 mRNA及蛋白表達(dá)水平均明顯受到抑制，說(shuō)明轉(zhuǎn)染siRNA后成功沉默了LKB1在細(xì)胞中的表達(dá)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｈ缓笸ㄟ^(guò)CCK-8法檢驗(yàn)了沉默LKB1后SK-hep-1細(xì)胞的增殖能力。通過(guò)Transwell小室侵襲、遷移模型檢驗(yàn)了沉默LKB1后SK-hep-1細(xì)胞的侵襲、遷移能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與NC組相比，下調(diào)LKB1基因的表達(dá)后SK-hep-1細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移能力均明顯增強(qiáng)，說(shuō)明LKB1作為一個(gè)抑癌基因，其低表達(dá)與肝癌的惡性生物學(xué)行為有關(guān)。但是，LKB1基因在肝癌發(fā)生發(fā)展中起到的作用及調(diào)控惡性生物學(xué)行為中的作用機(jī)制及詳細(xì)調(diào)控網(wǎng)絡(luò),還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)去探究闡明。

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(本文編輯：朱 晶)

Influence of specific down-regulation of LKB1 expression on invasion and migration of hepatoma cells

SHALiang,HEJianbo,LIKezhi,etal.

(DepartmentofHepatobiliarySurgery,TheAffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To investigate the influence of specific down-regulation of LKB1 expression on invasion and migration of the hepatoma cell line SK-hep-1. Methods Quantitative real-time PCR (RT-PCR) and Western blot were used to measure the expression of LKB1 in the human hepatoma cell line SK-hep-1 and normal hepatocytes (HL7702). LKB1 specific double-strand small interfering RNA was designed, synthesized, and then transfected into the human hepatoma cell line SK-hep-1 with high expression of LKB1 to silence the expression of LKB1 gene. A negative control (NC) group was established. RT-PCR and Western blot were used to measure the changes in the mRNA and protein expression of LKB1. Cell Counting Kit-8 was used to measure the proliferative capacity of hepatoma cells. In vitro Transwell chamber invasion and migration assays were used to observe the influence of LKB1 gene silencing on invasion and migration of the human hepatoma cell line SK-hep-1. Thet-test was used for comparison of continuous data between two groups; a one-way analysis of variance was used for comparison between multiple groups, and the least significant differencet-test was used for further comparison between any two groups. Results Compared with normal human hepatocytes (HL7702), SK-hep-1 cells had significantly higher mRNA and protein expression of LKB1 (bothP<0.05). Compared with the NC group, the siLKB1-1 treatment group had significant reductions in the mRNA and protein expression of LKB1 in SK-hep-1 cells (bothP<0.05). Compared with the NC group, the siLKB1-1 treatment group had a significantly higher cell proliferation rate and significant increases in invasion and migration (1.393±0.022 vs 1.1284±0.032,t=15.313,P<0.001; 147±19 vs 83±21,t=14.879,P<0.001; 113±13 vs 75±17,t=8.791,P<0.001). Conclusion LKB1 may be involved in inhibiting the proliferation, invasion, and migration of hepatoma cells and can affect the prognosis of patients with liver cancer.

carcinoma, hepatocellular； liver kinase b1； cell proliferation； neoplasm invasiveness； cell movement

10.3969/j.issn.1001-5256.2017.05.016

2017-01-16；

2017-03-09。

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81460426)；國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 (81360315)；廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 (2014GXNSFAA118191)

沙亮(1990-)，男，主要從事肝膽腫瘤方面的研究。

鄔國(guó)斌，電子信箱: gb.wu@139.com。

R735.7

A

1001-5256(2017)05-0875-05