林劍勇+肖樹榮+鄧益斌

【關(guān)鍵詞】微小RNA；肺癌；基因診斷；治療

中圖分類號：R730；R734.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2016.05.025

微RNA（miRNAs）是一類存在于生物體內(nèi)長度為20～25 nt、具有基因調(diào)控功能的非編碼RNA分子，主要參與基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)[1]。研究表明[2～5]，miRNA的表達(dá)異常與多種腫瘤密切相關(guān)，這為其在腫瘤診斷、治療和預(yù)后判斷中的應(yīng)用提供了潛在的研究價(jià)值。

1MiRNA與肺癌的關(guān)系

目前研究發(fā)現(xiàn)，MiR17、let7、miR29、miR126等微RNA與肺癌關(guān)系密切。其中，miR17在肺癌早期表達(dá)上調(diào)，隨著肺癌的發(fā)展其表達(dá)逐漸下降，而let7、miR29和miR126的表達(dá)則與肺癌呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。MiR17的表達(dá)在肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著重要角色，尤其是小細(xì)胞肺癌。Oeztuerk等[6]采用反義核酸技術(shù)對miR17表達(dá)進(jìn)行抑制后，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞增殖速度明顯下降，說明miR17的過表達(dá)與肺癌之間存在相關(guān)性。Ras和HMGA2是let7家族中最具代表性的兩個(gè)致癌基因，在肺癌組織細(xì)胞中其表達(dá)均明顯上調(diào)。Dai[7]和Tsai[8]等研究發(fā)現(xiàn)，將let7b體外轉(zhuǎn)染LKR13細(xì)胞后，能夠抑制Ras基因的表達(dá)，進(jìn)而可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和生長，使細(xì)胞密度明顯降低。Dutta等[9]研究發(fā)現(xiàn)，let7g表達(dá)上調(diào)則細(xì)胞中HMGA2的表達(dá)下降，細(xì)胞增殖受抑制，說明let7表達(dá)下調(diào)與肺癌之間存在相關(guān)性。MiR29家族包括miR29a、miR29b、miR29c等，主要作用靶標(biāo)是肺癌細(xì)胞中的甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT）。MiR29與甲基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，主要表現(xiàn)為在甲基轉(zhuǎn)移酶高表達(dá)的肺癌細(xì)胞中，miR29表達(dá)則明顯下調(diào)[10]。MiR126的主要作用靶標(biāo)是Crk蛋白，這是一類參與細(xì)胞增殖、遷移、黏附和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程的接頭蛋白。有研究表明，當(dāng)miR126[11]、miR182[12]等表達(dá)上調(diào)時(shí)，Crk蛋白則表達(dá)下降，并且伴隨著腫瘤細(xì)胞的遷移、浸潤和黏附能力也都相應(yīng)減弱，說明miR126、miR182等的表達(dá)與肺癌之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

2MiRNA在肺癌基因診斷中的應(yīng)用

基因診斷是指借助聚合酶鏈反應(yīng)、基因測序、分子雜交等技術(shù)手段檢測和分析與腫瘤相關(guān)的基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)改變，從而對腫瘤進(jìn)行診斷的一種新方法[3]。由于微RNA在不同腫瘤組織或腫瘤組織與非腫瘤組織中的表達(dá)模式不同，通過對比分析微RNA表達(dá)譜在不同組織間的變化情況，篩查出表達(dá)異常的miRNA分子，是腫瘤基因診斷研究的新思路[4]。Shikeeva等[13]研究發(fā)現(xiàn)，let7在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)明顯下調(diào)，其診斷敏感性為97%，特異性為92%，因此，認(rèn)為let7可作為非小細(xì)胞肺癌的分子診斷標(biāo)記物。Patnaik等[14]采用交叉驗(yàn)證分析研究發(fā)現(xiàn)，miR146b在肺鱗癌細(xì)胞中表達(dá)明顯下調(diào)，其診斷敏感性為95%，特異性為98%。目前，大量研究表明，miRNA在腫瘤基因診斷中有較高的敏感性和特異性，因此可作為腫瘤診斷的分子標(biāo)記物。

3MiRNA在肺癌治療中的應(yīng)用

放療是腫瘤治療的常規(guī)方法，由于目前對放射性元素誘導(dǎo)基因表達(dá)改變的機(jī)制尚不明確，因此放療在腫瘤臨床治療中的廣泛應(yīng)用受到限制。Weidhaas等[15]研究發(fā)現(xiàn)，肺癌細(xì)胞內(nèi)let7家族的表達(dá)在放療前后均發(fā)生明顯改變，表現(xiàn)在放療后let7a和7b的表達(dá)均明顯下降，而let7g則顯著上調(diào)，說明let7a和7b表達(dá)顯著上調(diào)的肺癌細(xì)胞對放療敏感性增強(qiáng)，而表達(dá)明顯下調(diào)的肺癌細(xì)胞則對放療不敏感。因此，可以通過上調(diào)腫瘤細(xì)胞中對放射性元素敏感的微RNA的表達(dá)來提高放療效果。

化療是腫瘤治療的另一種常規(guī)方法，這種方法的最大特點(diǎn)是在腫瘤治療過程中除了殺傷腫瘤細(xì)胞外，對正常細(xì)胞也造成較大傷害。Bemis等[16]研究發(fā)現(xiàn)，對吉非替尼（表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑）治療敏感的肺癌細(xì)胞往往是miR128b表達(dá)不足或缺失，而不敏感的肺癌細(xì)胞則是miR128b的表達(dá)明顯上調(diào)。因此，篩選化療藥物敏感基因，提高腫瘤細(xì)胞的藥物敏感性，降低藥物用量和副作用，逐漸成為腫瘤治療研究新熱點(diǎn)。

基因治療是腫瘤治療研究的新方法，原理是通過導(dǎo)入外源miRNA或抑制細(xì)胞內(nèi)miRNA表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)抑制癌基因或上調(diào)抑癌基因表達(dá)的目的，比如：（1）導(dǎo)入雙鏈RNA，經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Dicer酶切割形成若干miRNA分子，與靶基因特異性結(jié)合，抑制癌基因表達(dá)；（2）導(dǎo)入可編碼miRNA的質(zhì)粒DNA，產(chǎn)生源源不斷的miRNA分子，與靶基因特異性結(jié)合，抑制癌基因表達(dá)，但該法采用的腺病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體存在感染風(fēng)險(xiǎn)；（3）導(dǎo)入反義miRNA分子，直接與靶基因特異性結(jié)合，抑制癌基因表達(dá)。Xu等[17]研究結(jié)果顯示，采用脂質(zhì)體將反義miR31導(dǎo)入A549細(xì)胞內(nèi)，反義miR31能與靶基因特異性結(jié)合，抑制癌基因表達(dá)，從而抑制肺癌細(xì)胞的增殖。Matsubara等[18]研究發(fā)現(xiàn)，針對靶基因設(shè)計(jì)合成反義寡核苷酸分子，并借助脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后，能有效抑制miR17和miR20a的表達(dá)，引起肺癌細(xì)胞的凋亡。目前，大量研究表明，基因治療逐漸成為腫瘤治療研究的新熱點(diǎn)。

4問題與展望

盡管大量研究表明，微RNA表達(dá)改變與多種腫瘤發(fā)生關(guān)系密切，但目前利用微RNA作為腫瘤基因診斷指標(biāo)，尚缺乏一套成熟的判斷標(biāo)準(zhǔn)。而通過導(dǎo)入外源miRNA或抑制細(xì)胞內(nèi)miRNA表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)抑制癌基因或上調(diào)抑癌基因表達(dá)目的的基因治療，也由于靶向性、安全性和有效性等問題，使基因治療研究面臨重重困難。盡管如此，作為一類新型分子標(biāo)記物，微RNA在肺癌發(fā)生發(fā)展、基因診斷和基因治療中的應(yīng)用價(jià)值仍然是今后研究的熱點(diǎn)。參考文獻(xiàn)[1]Powdrill MH，Destrochers GF，Singaravelu R，et al.The role of microRNAs in metabolic interactions between viruses and their hosts[J].Curr Opin Virol，2016（19）：7176.

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（收稿日期：2016-08-02修回日期：2016-09-23）

（編輯：潘明志）