馮輝

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針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

馮輝1,2

(1.上海市光華中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,上海 200052;2.上海市中醫(yī)藥研究院中西醫(yī)結(jié)合關(guān)節(jié)炎研究所,上海 201210)

動(dòng)物模型作為開(kāi)展基礎(chǔ)研究必不可少的工具,對(duì)于深入研究疾病的病因、發(fā)病機(jī)制和探索新的治療方法,具有非常重要的意義。近年來(lái),針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物研究進(jìn)展迅速,為闡釋針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制提供證據(jù)支持。該文就近年來(lái)有關(guān)針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行綜述,以期為針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床應(yīng)用提供借鑒。

針灸療法;關(guān)節(jié)炎,類風(fēng)濕;實(shí)驗(yàn)研究;綜述

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種常見(jiàn)的以慢性對(duì)稱性、進(jìn)行性及侵蝕性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的自身免疫性疾病。RA的患病率在我國(guó)約為0.4%,全球?yàn)?.5%～1.0%[1]。本病屬中醫(yī)學(xué)“痹證”范疇,在文獻(xiàn)中又被描述為“尪痹”“頑痹”“歷節(jié)”“痛風(fēng)”“骨槌風(fēng)”等名稱[2]。目前,西醫(yī)治療RA尚無(wú)特效方法,且長(zhǎng)期服藥毒性和不良反應(yīng)較大,生物制劑的應(yīng)用又給患者帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。傳統(tǒng)中醫(yī)治療RA在緩解疼痛、消除腫脹、改善活動(dòng)受限、提高生存質(zhì)量、降低毒副反應(yīng)方面具有一定優(yōu)勢(shì),其中針灸療法因其安全、經(jīng)濟(jì)、療效穩(wěn)定而被廣泛應(yīng)用于臨床[3]。

動(dòng)物模型作為開(kāi)展基礎(chǔ)研究必不可少的工具,對(duì)于深入研究疾病的病因、發(fā)病機(jī)制和探索新的治療方法,具有重要意義。常用的RA動(dòng)物模型有佐劑關(guān)節(jié)炎(adjuvant-induced arthritis,AA)模型、膠原(collagen-induced arthritis,CIA)誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型?，F(xiàn)就近年來(lái)有關(guān)針灸治療RA的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究綜述如下,以期為針灸治療RA的臨床應(yīng)用提供借鑒。

1 針灸對(duì)RA病理形態(tài)學(xué)的影響

RA是以滑膜炎為病理特征的慢性全身性自身免疫性疾病,滑膜炎癥反應(yīng)表現(xiàn)為滑膜細(xì)胞增殖、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、微血管的新生、血管翳的形成及軟骨和骨組織的破壞,即以增殖性和侵蝕性為RA滑膜炎的特點(diǎn)。這種滑膜炎在活動(dòng)期患者終身反復(fù)不斷。抑制滑膜細(xì)胞的異常增殖、組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及微血管和血管翳的形成是治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的重要策略。楊露晨等[4]研究發(fā)現(xiàn)艾灸日本大耳白兔雙側(cè)腎俞穴后,此“艾灸血清”能延緩RA滑膜細(xì)胞G1/S期轉(zhuǎn)換,從而抑制RA滑膜細(xì)胞增殖。許素琴等[5]研究發(fā)現(xiàn)針刺腎俞穴能夠明顯降低佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞增生、滑膜內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及血管炎表現(xiàn)。高虹等[6]研究發(fā)現(xiàn)針灸治療佐劑性關(guān)節(jié)炎模型(AA),可以顯著減輕AA大鼠關(guān)節(jié)皮下軟組織及滑膜充血、水腫,緩解多形核白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞對(duì)滑膜的浸潤(rùn)及滑膜細(xì)胞增生,抑制AA大鼠關(guān)節(jié)炎癥腫脹及滑膜細(xì)胞的增生反應(yīng),從而阻止其病變的進(jìn)展。張海波等[7]采用激光針灸對(duì)Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠模型進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),激光針灸100 mW可以顯著抑制CIA大鼠滑膜細(xì)胞增生、纖維組織增生,其在適當(dāng)?shù)墓β拭芏?1.42 W/cm2)下,作用優(yōu)于雙氯芬酸二乙胺(扶他林),其療效與激光參數(shù)設(shè)置相關(guān)。

2 針灸治療RA機(jī)理研究

2.1 針灸對(duì)RA炎癥反應(yīng)作用及機(jī)理

滑膜的慢性炎癥反應(yīng)是RA持續(xù)進(jìn)展、遷延不愈,最終導(dǎo)致骨破壞的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。大量證據(jù)表明,炎癥因子在關(guān)節(jié)局部的浸潤(rùn),是RA關(guān)節(jié)損傷和炎癥的重要介質(zhì),這些細(xì)胞因子參與RA的整個(gè)病理過(guò)程,是導(dǎo)致RA慢性滑膜炎的重要原因[8]。根據(jù)細(xì)胞因子的傳統(tǒng)名稱和生物學(xué)特性可以分為白細(xì)胞介素(IL)、干擾素(IFN)、腫瘤壞死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、生長(zhǎng)因子(GF)、趨化性細(xì)胞因子等,是感染、炎癥和免疫性疾病的重要介質(zhì)。許多細(xì)胞因子已被公認(rèn)為是RA關(guān)節(jié)損傷和炎癥的重要介質(zhì),這些細(xì)胞因子參與RA的整個(gè)病理過(guò)程。與RA相關(guān)的細(xì)胞因子有TNF-a、IL-10、IL-1、IL-2等[9-11],這些細(xì)胞因子對(duì)滑膜細(xì)胞分化、增殖和分泌有調(diào)節(jié)作用。據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道,針灸治療實(shí)驗(yàn)性RA大鼠具有確切的抗炎效應(yīng)[12],其作用機(jī)制與調(diào)節(jié)上述炎癥因子有關(guān)。

2.1.1 針灸對(duì)TNF-a、IL-1分泌的影響

TNF-a是主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生的細(xì)胞因子,是RA慢性炎癥反應(yīng)的主要效應(yīng)分子;IL-1屬于Th1型致炎細(xì)胞因子,與RA滑膜細(xì)胞的增生、血管翳的形成及骨質(zhì)破壞密切相關(guān),在RA發(fā)病中與TNF-a中起著“中心罪犯”作用。因此,降低TNF-a、IL-1分泌是治療RA起效的重要環(huán)節(jié)之一。王振宇等[13]在研究中發(fā)現(xiàn)經(jīng)穴預(yù)刺激能夠顯著降低關(guān)節(jié)炎模型大鼠血清中的TNF-a水平,并能夠下調(diào)丘腦中TNF-amRNA表達(dá),顯示了針灸治療的良性預(yù)刺激效應(yīng);王興等[14]通過(guò)調(diào)督通脈針灸法治療AA大鼠,發(fā)現(xiàn)大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織TNF-a表達(dá)顯著降低,IL-10表達(dá)顯著升高;對(duì)比研究結(jié)果[15]顯示,普通針灸法和調(diào)督通脈針灸法均可以降低大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織的炎細(xì)胞浸潤(rùn)、血管增生和血管翳的形成,且調(diào)督通脈針灸法明顯優(yōu)于普通針灸法,能顯著降低滑膜組織TNF-a和IL-1b的mRNA表達(dá),增高IL-10的mRNA表達(dá),表明調(diào)督通脈針灸療法可能對(duì)RA的炎癥緩解具有更好的作用。李建武等[16]在研究中發(fā)現(xiàn)隔物溫和灸能抑制RA大鼠血清IL-1b、TNF-a分泌水平,減輕RA大鼠足跖關(guān)節(jié)腫脹程度,與MTX聯(lián)合應(yīng)用能夠使作用加強(qiáng);高潔等[17]在研究中發(fā)現(xiàn)電針治療可以顯著降低CIA大鼠外周血和關(guān)節(jié)液中TNF-a、VEGF水平。章婷婷等[18]發(fā)現(xiàn)鋪灸可減輕AA大鼠足趾腫脹程度,降低血清TNF-a、IL-1水平,提高IL-10水平;高駿等[19]發(fā)現(xiàn)艾灸腎俞和足三里可以抑制Th1致炎因子IL-1b而促進(jìn)Th2抗炎因子IL-4的分泌,調(diào)整Th1/Th2細(xì)胞因子失衡,從而發(fā)揮抗炎作用;羅磊等[20]也發(fā)現(xiàn)艾灸腎俞、足三里可以顯著降低RA大鼠跖關(guān)節(jié)局部細(xì)胞因子IL-1b和TNF-a表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)因子IL-2的表達(dá),其機(jī)制可能是艾灸通過(guò)降低T-bet轉(zhuǎn)錄,而促進(jìn)GATA3轉(zhuǎn)錄,從而抑制RA大鼠T細(xì)胞向Th1方向分化,調(diào)整Th1/Th2功能失衡,糾正細(xì)胞免疫紊亂,達(dá)到治療目的[21]。針灸通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子失衡,可以從整體上治療RA,恢復(fù)RA過(guò)程中的致炎因子與抑炎因子失衡,體現(xiàn)出雙向調(diào)節(jié)的作用。

2.1.2 針灸對(duì)IL-6分泌的影響

IL-6可由T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生,在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)、促進(jìn)骨髓造血等方面均有重要作用。研究證實(shí)RA患者滑液中IL-6的水平顯著升高,與RA疾病活動(dòng)指數(shù)相關(guān)[22]。IL-6對(duì)RA的致病作用主要在于增加IL-1和TNF-a的效應(yīng);還參與RA的骨破壞及局部骨侵蝕[23]。王瑞輝[24]電針RA大鼠的足三里和昆侖穴,觀察腹腔巨噬細(xì)胞IL-1和脾臟細(xì)胞IL-6的活性,結(jié)果表明電針組較對(duì)照組,腹腔巨噬細(xì)胞IL-1和

脾臟細(xì)胞IL-6活性顯著下降。

2.1.3 針灸對(duì)炎癥信號(hào)通路的影響

慢性炎癥浸潤(rùn)導(dǎo)致的滑膜增生、血管翳形成,是RA骨破壞的主要原因。炎癥因子的表達(dá)和釋放,受多種因素的調(diào)控,其中轉(zhuǎn)錄因子NF-kB是被研究最多、機(jī)制最明確的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,是調(diào)控炎癥因子釋放的最主要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。張秀榮等[25]研究發(fā)現(xiàn),通過(guò)針刺大鼠夾脊穴,可以顯著降低CIA大鼠足跖腫脹度和NF-kB表達(dá);王興等[26]發(fā)現(xiàn)調(diào)督通脈針灸法能夠抑制脊神經(jīng)核因子NF-kB的高表達(dá)活性,從而抑制炎癥、免疫反應(yīng)等,改善癥狀及病情;袁娟等[27]研究發(fā)現(xiàn),艾灸可以顯著降低RA大鼠血清TNF-a、IL-1含量,下調(diào)滑膜組織中TLR4、MyD88、TRAF-6和NF-kB p65的mRNA表達(dá),提示艾灸調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的作用與抑制滑膜組織TLR4-MyD88-NF-kB信號(hào)通路的異常激活有關(guān)。

除了NF-kB轉(zhuǎn)錄因子之外,針灸調(diào)節(jié)炎癥因子表達(dá)的作用還與其他信號(hào)通路有關(guān)。研究表明,電針治療可以降低CIA大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞COX-2mRNA的表達(dá)[28],調(diào)控滑膜細(xì)胞中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白(如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29、絡(luò)氨酸激酶、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1型受體、WDR74蛋白等)、下調(diào)細(xì)胞內(nèi)能量代謝和核苷酸生物合成(如調(diào)控谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶、核苷二磷酸激酶B、半胱氨酸蛋白酶抑制劑B、乙醛脫氫酶等),從而抑制滑膜細(xì)胞的增生,減輕炎癥反應(yīng)[29]。高駿等[30]認(rèn)為艾灸治療實(shí)驗(yàn)性RA大鼠具有確切的抗炎效應(yīng),其抗炎效應(yīng)的發(fā)揮需依賴于下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA)的完整,艾灸可能通過(guò)調(diào)節(jié)HPAA功能,從而抑制NF-kB炎性信號(hào)通路而發(fā)揮抗炎作用。艾灸還可以通過(guò)抑制滑膜細(xì)胞中CyclinD1和CDK4復(fù)合物增加,從而抑制滑膜細(xì)胞的異常增殖發(fā)揮抗炎作用[31]。羅磊等[32]在研究中發(fā)現(xiàn)艾灸不僅在整體上對(duì)胸腺、脾臟等免疫器官有保護(hù)作用,而且也能改善局部滑膜細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。艾灸能顯著降低RA大鼠下丘腦室旁核nNOS的含量,增強(qiáng)RA大鼠滑膜組織中Caspase-3的表達(dá)[33],增加下丘腦和炎癥組織的HSP70表達(dá)[34],調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)滑膜中Fas/FasL蛋白表達(dá)[35],降低血清中MMP-9表達(dá)[36],提示艾灸可能通過(guò)誘導(dǎo)炎性滑膜細(xì)胞的凋亡,抑制局部組織的增生,以減輕局部組織的炎癥、水腫等癥狀,這可能是艾灸發(fā)揮溫通作用的有效機(jī)制之一。

研究發(fā)現(xiàn),G蛋白偶聯(lián)受體及其介導(dǎo)信號(hào)與RA也有密切聯(lián)系,可通過(guò)特異性的接受如細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)、細(xì)胞表面成分等配體的激活,活化細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路,產(chǎn)生特定基因和蛋白表達(dá),實(shí)現(xiàn)其炎癥和免疫效應(yīng)。如腺苷受體A2AR的缺失,將導(dǎo)致更加嚴(yán)重炎癥和組織損傷,提示A2AR是抗炎的重要介導(dǎo)受體[37];促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin releasing hormone, CRH)有顯著免疫抑制作用,其受體也是G蛋白偶聯(lián)受體,免疫組化結(jié)果顯示,電針環(huán)跳、陽(yáng)陵泉可以顯著升高關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)局部CRHR表達(dá),改善大鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙[38]。

2.2 針灸對(duì)RA神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)作用

神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)假說(shuō)是1977年由Besedovsky H等[39]提出,認(rèn)為機(jī)體免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)之間存在一個(gè)由一些共同的或相似的肽類物質(zhì)所介導(dǎo)的調(diào)節(jié)環(huán)路,維持著機(jī)體內(nèi)部的穩(wěn)定與平衡?，F(xiàn)代研究已經(jīng)證實(shí)神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫三大信息傳遞系統(tǒng)之間有相互作用的介導(dǎo)物質(zhì)和共同生物學(xué)語(yǔ)言,即三大信息傳遞系統(tǒng)通過(guò)信息(細(xì)胞因子、激素、化學(xué)遞質(zhì)等)聯(lián)系調(diào)節(jié)著各器官、系統(tǒng)等功能,使彼此之間在空間與時(shí)間上保持密切聯(lián)系,相互配合,相互制約,從而使機(jī)體功能達(dá)到整體協(xié)調(diào)統(tǒng)一。這與中醫(yī)整體觀理論為指導(dǎo)的針灸療法整體性、雙向性規(guī)律和特性不謀而合。

2.2.1 神經(jīng)系統(tǒng)方面

2.2.1.1 針灸對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響

下丘腦是機(jī)體神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)聯(lián)系的樞紐,神經(jīng)肽是由神經(jīng)纖維產(chǎn)生、儲(chǔ)存和釋放的調(diào)節(jié)因子,是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)重要的介質(zhì)之一,也是免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因子。腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)是中樞的重要神經(jīng)遞質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn),艾灸可以激活下丘腦內(nèi)NE、5-HT神經(jīng)元,促使下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸的功能活動(dòng)興奮[40]。海馬區(qū)被認(rèn)為是與機(jī)體免疫系統(tǒng)關(guān)系最為密切的腦區(qū)之一,參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)免疫調(diào)節(jié)的整合環(huán)路,治療信息可通過(guò)海馬單胺類遞質(zhì)活動(dòng)介導(dǎo)作用,改變下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌的功能狀態(tài),調(diào)整垂體激素和影響皮質(zhì)激素的分泌。周海燕等[41]研究發(fā)現(xiàn)艾灸腎俞、足三里穴可以顯著降低弗氏完全佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠海馬區(qū)GR和褪黑素受體1B(MEL1B)表達(dá),調(diào)節(jié)海馬中樞功能從而顯示抗炎效應(yīng)。唐照亮等[42-43]研究發(fā)現(xiàn),艾灸的抗炎免疫作用可因6-羥多巴胺(6-OHDA)選擇性損毀海馬內(nèi)去甲腎上腺素(NA)能神經(jīng)支配或切除腎上腺而被削弱或部分阻斷,表明艾灸 的作用依賴于以海馬腎上腺及松果腺等結(jié)構(gòu)與功能的完善,推測(cè)海馬和松果腺可能是艾灸抗炎免疫作用的高位調(diào)節(jié)點(diǎn)之一。許建陽(yáng)等[44]觀察弗氏完全佐劑(AA)大鼠海馬中有大量的fos樣免疫反應(yīng)性(FIL)陽(yáng)性細(xì)胞,說(shuō)明炎性刺激可誘導(dǎo)原癌基因(c-los)在海馬內(nèi)的表達(dá),經(jīng)電針治療后FIL陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)受到抑制,FIL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少,提示電針對(duì)AA大鼠的抗炎鎮(zhèn)痛中樞作用機(jī)制。

2.2.1.2 針灸對(duì)外周神經(jīng)系統(tǒng)的影響

機(jī)體受到外界刺激,通過(guò)感受器傳入外周神經(jīng),然后進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行整合,并由神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)傳出信息,作用于機(jī)體靶器官、靶細(xì)胞上。針灸治療起效的機(jī)制也遵循這一信息傳遞環(huán)路。針灸可以引起免疫細(xì)胞產(chǎn)生免疫活性物質(zhì),一方面調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)本身功能,另一方面作用于交感-腎上腺素能神經(jīng)系統(tǒng),調(diào)節(jié)交感和副交感神經(jīng),引起外周及中樞NA水平變化。另外在免疫狀態(tài)下,直接支配胸腺、脾臟等免疫器官的交感神經(jīng)活性發(fā)生改變,可以誘發(fā)c-fos作用于免疫細(xì)胞,調(diào)節(jié)免疫功能。趙倉(cāng)煥等[45]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),電針治療可以使炎癥局部FLI陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)減少,即電針可以抑制c-fos在外周炎癥局部表達(dá)而達(dá)到鎮(zhèn)痛效果,提示電針對(duì)外周神經(jīng)系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)作用。唐照亮等[46]應(yīng)用6-OHDA化學(xué)切除外周交感神經(jīng)軸突纖維,觀察艾灸對(duì)正常和環(huán)磷酰胺抑制小鼠免疫功能。結(jié)果,運(yùn)用6-OHDA及環(huán)磷酰胺后,小鼠胸、脾指數(shù)及IL-1、IL-2含量均低于正常組水平;艾灸后能提高小鼠免疫功能,改善其免疫抑制,上述指標(biāo)均高于各自對(duì)照組,但仍低于交感神經(jīng)完整組。結(jié)果表明,外周交感神經(jīng)末梢毀損后,艾灸增強(qiáng)免疫的作用被消弱和部分阻斷,提示交感神經(jīng)參與艾灸對(duì)免疫的調(diào)節(jié)。

下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸不僅為神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能軸,也是與免疫系統(tǒng)最密切的一個(gè)功能軸,因此從HPA軸著手,研究神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)機(jī)制是目前的熱點(diǎn)。HPA主要的調(diào)節(jié)物質(zhì)分別是由腎上腺、垂體、下丘腦分泌的GC、ACTH、CRH組成。GC是體內(nèi)首要的抗炎物質(zhì),與ACTH、CRH三者間互相影響,通過(guò)復(fù)雜的正負(fù)反饋調(diào)節(jié)構(gòu)成完整的HPA[47]。研究發(fā)現(xiàn),HPA對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)主要是通過(guò)其分泌糖皮質(zhì)激素來(lái)實(shí)現(xiàn)的。一方面,糖皮質(zhì)激素與免疫細(xì)胞上廣泛存在的糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合,抑制免疫細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的分泌;另一方面,減少淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等的黏附、移行及局部侵潤(rùn),達(dá)到免疫抑制作用。高秀花等[48]研究發(fā)現(xiàn)艾灸腎俞、足三里穴能夠顯著降低AA誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎家兔血清促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)、皮質(zhì)酮(CS)含量,升高促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)含量,提示艾灸對(duì)HPA調(diào)控作用;周海燕[49]研究發(fā)現(xiàn),艾灸腎俞、足三里穴能明顯抑制實(shí)驗(yàn)性RA大鼠的炎癥反應(yīng),調(diào)控CRH、ACTH、GC的異常水平,但在腹腔注射GR激動(dòng)劑后這些作用消失,提示GR激動(dòng)劑在艾灸對(duì)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的調(diào)整中具有重要的地位和作用。余曙光等[50]觀察電針對(duì)RA大鼠糖皮質(zhì)激素(CS)及受體(GCR)的影響,結(jié)果提示電針能夠增加RA大鼠CS、GCR含量水平。近來(lái)發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素既能誘導(dǎo)未成熟的胸腺淋巴細(xì)胞凋亡,而且對(duì)成熟的淋巴細(xì)胞,糖皮質(zhì)激素也能夠誘導(dǎo)其凋亡。CS誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡的作用基礎(chǔ)需要GCR的協(xié)同參與。而免疫細(xì)胞上的受體也是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。魏焦祿等[51]在觀察針刺、艾灸對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血漿皮質(zhì)酮(CS)的影響差異的研究中,發(fā)現(xiàn)分別針刺和艾灸足三里、腎俞穴位,對(duì)AA大鼠血漿皮質(zhì)酮的影響存在差異,針刺對(duì)促進(jìn)CS水平升高更顯著。

2.2.3 免疫系統(tǒng)方面

針灸對(duì)免疫系統(tǒng)具有明顯的調(diào)整作用,這種調(diào)整作用根據(jù)機(jī)體具體的功能狀態(tài)的不同而呈現(xiàn)一定差異。針灸對(duì)免疫異常狀態(tài)的調(diào)整作用,主要表現(xiàn)在對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫的調(diào)整上。研究發(fā)現(xiàn),艾灸腎俞、足三里可以明顯增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)AA誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠T淋巴細(xì)胞活性,抑制胸腺萎縮,增加T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率極其分泌IL-2、IFN-r能力,抑制IL-1、IL-6、TNF-a等炎性細(xì)胞因子分泌,增加具有保護(hù)作用熱休克蛋白HSP70表達(dá)及其基因轉(zhuǎn)錄水平,從而啟動(dòng)IL-2的活化,發(fā)揮免疫調(diào)整作用[52]。針灸可以明顯調(diào)整關(guān)節(jié)炎大鼠血清CD4、CD8陽(yáng)性細(xì)胞比例[53],顯著降低RA大鼠血清及膝關(guān)節(jié)內(nèi)IL-17和IL-23的表達(dá),其作用與潑尼松龍相近[54];電針治療還可以顯著升高CIA大鼠滑膜組織中血管活性腸肽(VIP)含量,上調(diào)IL-4表達(dá),降低IFN-g表達(dá),而加用VIP受體拮抗劑后,其作用消失,表明電針抗炎作用與VIP介導(dǎo)的抗炎機(jī)制具有顯著相關(guān)性[55]。電針CIA大鼠足三里和懸鐘穴,可以顯著升高大鼠關(guān)節(jié)滑液中VIP受體VPAC1 mRNA表達(dá),上調(diào)CD4＋Foxp3＋Treg細(xì)胞表達(dá),下調(diào)CD4＋I(xiàn)L17＋Th17細(xì)胞表達(dá),提示針刺足三里與懸鐘穴有明顯的調(diào)節(jié)免疫作用,其機(jī)制可能與VIP信號(hào)激活及Th17/Treg細(xì)胞平衡重建密切相關(guān)[56]。

除此之外,黏附分子在RA發(fā)病中越來(lái)越受到關(guān)注。黏附分子共分為三大類,即選擇素、Ig超家族、整合素,它們是一類具有多種生物功能的受體型跨膜糖蛋白,能介導(dǎo)細(xì)胞黏附、趨化、淋巴細(xì)胞回巢等作用,在RA炎癥形成過(guò)程中充當(dāng)重要角色。在RA過(guò)程中,這些黏附分子可趨化RA病變局部淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,引起滑膜組織增生性病變,促使血管翳形成,加重骨破壞。He L等[57]研究發(fā)現(xiàn),艾灸腎俞、足三里能夠顯著抑制大鼠病變關(guān)節(jié)滑膜炎癥與增生,改善炎性細(xì)胞對(duì)軟骨侵蝕,預(yù)防關(guān)節(jié)滑膜病變,抑制血清黏附分子ICAM-1的產(chǎn)生,阻抑血管翳生成,從而延緩病變進(jìn)程。

針灸對(duì)RA的治療作用是通過(guò)對(duì)機(jī)體整體免疫功能的良性雙向調(diào)整來(lái)實(shí)現(xiàn)的。大部分研究結(jié)果支持這種觀點(diǎn),如針灸在對(duì)免疫球蛋白、補(bǔ)體、T細(xì)胞亞群、淋巴細(xì)胞免疫功能、NK細(xì)胞活性、紅細(xì)胞免疫功能、C反應(yīng)蛋白、細(xì)胞因子等的影響,以及針灸對(duì)某些中樞神經(jīng)遞質(zhì)和CART、腎上腺皮質(zhì)激素的調(diào)節(jié)均表現(xiàn)出良性的雙向調(diào)整作用。盡管以上研究分別從神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫角度探討了針灸治療RA的可能機(jī)制,但因所采用的研究手段較為單一,機(jī)理探討也較為局限,缺乏一定的深度和系統(tǒng)性,尚不能完全闡明針灸作用的內(nèi)在機(jī)理。因此借助現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù),與多學(xué)科結(jié)合,從多水平多角度深入、系統(tǒng)地探討針灸治療RA的內(nèi)在機(jī)制和作用途徑已勢(shì)在必然。

3 對(duì)鎮(zhèn)痛的作用

針刺鎮(zhèn)痛自20世紀(jì)60年代發(fā)展至今,其有效性已被廣泛的臨床應(yīng)用結(jié)果充分證明,其作用主要通過(guò)影響經(jīng)典遞質(zhì)、神經(jīng)肽物質(zhì)以及影響自由基來(lái)實(shí)現(xiàn),也可以通過(guò)對(duì)原癌基因表達(dá)和核轉(zhuǎn)錄因子影響等來(lái)實(shí)現(xiàn)。國(guó)內(nèi)對(duì)于針灸治療RA模型大鼠的鎮(zhèn)痛機(jī)制研究也在持續(xù)開(kāi)展[58]。

尺寸：?1.0 m×1.1 m。停留時(shí)間，40 min。用來(lái)儲(chǔ)存物化處理的出水，保證生化處理系統(tǒng)進(jìn)水的穩(wěn)定。

3.1 外周神經(jīng)鎮(zhèn)痛機(jī)制

針灸能夠誘導(dǎo)外周炎性細(xì)胞釋放阿片類物質(zhì)參與鎮(zhèn)痛并發(fā)揮核心作用。電針刺激交感神經(jīng)纖維,使內(nèi)含阿片類物質(zhì)的細(xì)胞在炎癥部位富集。交感神經(jīng)興奮激活炎癥部位細(xì)胞間黏附分子-1,使炎癥區(qū)域多形核白細(xì)胞及單核細(xì)胞增加內(nèi)源性阿片肽的表達(dá)[57],同時(shí),由交感神經(jīng)元激活釋放的NE可以激活炎癥細(xì)胞上的腎上腺素能受體也可以導(dǎo)致b-內(nèi)啡肽參與鎮(zhèn)痛[59]。RA針灸鎮(zhèn)痛研究發(fā)現(xiàn),針刺、灸法均可以顯著提高RA大鼠痛閾,提高血漿及炎癥組織中b-EP含量,針灸聯(lián)用效果優(yōu)于單用針刺和單用灸法組[60],且電針鎮(zhèn)痛作用隨針刺次數(shù)增加而增強(qiáng),并在一定程度上呈穴位特異性[61]。原位雜交技術(shù)顯示在關(guān)節(jié)炎局部,阿片肽家族主要成員POMC mRNA和PENK mRNA的表達(dá)均顯著升高,電針干預(yù)后,二者的表達(dá)進(jìn)一步升高,顯示了電針干預(yù)炎性疼痛的作用[62]。而m-阿片肽受體、d-阿片肽受體、k-阿片肽受體在炎癥局部均介導(dǎo)了電針干預(yù)炎性疼痛作用[63-65]。

電針作用于下丘腦-垂體-腎上腺軸。電針還可以通過(guò)皮質(zhì)酮抑制COX-2干擾內(nèi)源性大麻素代謝,使炎癥組織部位內(nèi)源性大麻素CB2受體(CB2R)上調(diào)并抑制前列腺2(PGE2)釋放,其作用可被促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRF)拮抗劑和CB2R拮抗劑分別抑制[66]。免疫組化顯示,電針患側(cè)環(huán)跳、陽(yáng)陵泉后,關(guān)節(jié)炎大鼠炎癥局部CB2R、CRHR表達(dá)顯著提高,使炎性痛病灶局部組織中致炎致痛物質(zhì)與鎮(zhèn)痛物質(zhì)之間平衡受到調(diào)控,顯著減輕了關(guān)節(jié)炎局部疼痛[38,67]。

3.2 中樞鎮(zhèn)痛機(jī)制

中樞內(nèi)源性阿片肽釋放是中樞鎮(zhèn)痛的關(guān)鍵。含有b-EP神經(jīng)纖維可投射到腦中的各個(gè)部分,在下丘腦含量較高。與腦啡肽相比,b-EP具有更強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用,且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn),中樞神經(jīng)系統(tǒng)中同時(shí)存在阿片肽與抗阿片肽,后者可限制鎮(zhèn)痛效果的發(fā)揮[68],兩者之間的矛盾是主宰針灸鎮(zhèn)痛效果優(yōu)劣的決定性因素之一[69]。放射免疫顯像顯示,在AA大鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,b內(nèi)啡肽表達(dá)顯著升高,而電針可以進(jìn)一步升高b內(nèi)啡肽的表達(dá),實(shí)現(xiàn)中樞鎮(zhèn)痛作用[70]。研究也發(fā)現(xiàn)針刺使關(guān)節(jié)炎家兔痛閾升高的同時(shí),中樞神經(jīng)b-EP、CCK8、脊髓SP含量明顯升高,同時(shí)外周組織中b-EP、LEK含量也升高,PEG2含量降低,同時(shí)表現(xiàn)出中樞及外周鎮(zhèn)痛作用[71]。

電針可以抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生,從而減輕疼痛。姬廣臣等[72]觀察炎癥痛和針刺鎮(zhèn)痛時(shí),大鼠中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)(PAG)部位Ⅰ型IL-1受體基因(IL-1RI mRNA)表達(dá)的變化,在大鼠腳掌注射2%角叉菜膠(100mL)造成炎癥痛模型,電針致炎側(cè)足三里和昆侖穴30 min,結(jié)果電針組大鼠該部位的IL-1RⅠmRNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與假電針組相比顯著減少,可知電針可明顯下調(diào)大鼠PAG部位IL-1RⅠmRNA表達(dá),起到鎮(zhèn)痛作用。在CFA致痛模型中,環(huán)跳、陽(yáng)陵泉穴交替進(jìn)行2 Hz和10 Hz電針能提高PWL同時(shí)抑制CFA誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞活化以及IL-1b、IL-6和TNF-a的上調(diào)[73]。

針灸可影響神經(jīng)遞質(zhì)釋放。5-HT廣泛分布于機(jī)體的組織中,在中樞神經(jīng)系統(tǒng),如松果體、下丘腦中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),是調(diào)節(jié)人體痛覺(jué)的重要神經(jīng)遞質(zhì)之一。電針夾脊穴可顯著增加RA大鼠脊髓5-HT及其代謝產(chǎn)物5-HIAA水平,顯著降低脊髓內(nèi)去甲腎上腺素(NA)和多巴胺(DA),提示NA隨著中樞部位不同對(duì)針刺鎮(zhèn)痛可產(chǎn)生截然相反作用,腦內(nèi)NA拮抗針刺鎮(zhèn)痛,而脊髓內(nèi)NA加強(qiáng)針刺鎮(zhèn)痛,電針可抑制大鼠中樞DA神經(jīng)元活動(dòng),參與鎮(zhèn)痛[74]。

針灸也可以通過(guò)對(duì)原癌基因表達(dá)和自由基的影響顯示鎮(zhèn)痛作用。王瑞輝等[75]發(fā)現(xiàn),電針可以緩解佐劑關(guān)節(jié)炎病理性疼痛的作用機(jī)制與抑制傷害性傳入沖動(dòng)誘發(fā)脊髓原癌基因的表達(dá)有關(guān),納洛酮可阻斷電針抑制AA大鼠脊髓c-fos表達(dá)的部分效應(yīng),退出電針抑制AA大鼠誘發(fā)脊髓原癌基因表達(dá)與電針引起內(nèi)源性B-EP的釋放有關(guān)。潘惠娟等[76]發(fā)現(xiàn)電針可以明顯提高實(shí)驗(yàn)性RA大鼠痛閾,降低腦組織內(nèi)NO含量并抑制腦組織內(nèi)NOS轉(zhuǎn)化產(chǎn)生NO并趨于平衡,產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。針灸鎮(zhèn)痛一直是針灸研究領(lǐng)域的熱點(diǎn),其起效的機(jī)制一直在研究中。針灸對(duì)RA的疼痛緩解,也離不開(kāi)對(duì)炎癥和免疫的調(diào)節(jié),是綜合調(diào)節(jié)的結(jié)果。對(duì)單一靶點(diǎn)的研究往往有“只見(jiàn)樹(shù)木不見(jiàn)森林”的困惑,多靶點(diǎn)、網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制研究或許為揭示針灸治療RA疼痛機(jī)制提供新的思路。

4 結(jié)語(yǔ)

RA是一種系統(tǒng)性的慢性自身免疫病,屬于難治性復(fù)雜疾病。針灸是古老中醫(yī)的一部分,其對(duì)RA細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥免疫反應(yīng),以及疼痛緩解具有顯著療效。然而目前研究多是針對(duì)單一靶點(diǎn)、單分子研究,并不能體現(xiàn)針灸的整體調(diào)節(jié)作用。當(dāng)今大數(shù)據(jù)時(shí)代下,基于多層面、多系統(tǒng)的數(shù)據(jù)分析或許能為闡釋針灸治療RA的作用機(jī)制提供新的思路和線索。神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)關(guān)注神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫三大系統(tǒng)在人體內(nèi)的相互作用,將生病的人體看作一個(gè)失衡的網(wǎng)絡(luò),通過(guò)共同介質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)使其達(dá)到平衡,從而減輕炎癥反應(yīng),緩解疼痛、減緩骨破壞,是針灸治療RA起效機(jī)制之一。然而目前的研究,仍集中在分子層面,僅限于簡(jiǎn)單做一些神經(jīng)內(nèi)分泌免疫學(xué)方面的指標(biāo),或?qū)ζ渲心骋幌到y(tǒng)做深入研究,尚未在更高層面揭示其網(wǎng)絡(luò)內(nèi)在的本質(zhì)聯(lián)系。RA的內(nèi)在發(fā)病機(jī)制是多元的、復(fù)雜的,針灸治療RA的作用也是多靶點(diǎn)、多途徑的,如何脫離單靶點(diǎn)、單分子研究模式,在更高層面闡釋其治療RA的作用機(jī)制,仍有很長(zhǎng)路要走。

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Advances in Animal Experimental Studies on Acupuncture-moxibustion Treatment for Rheumatoid Arthritis

1,2.

1.200052201210,

An animal model as an indispensable tool for basic study is of very important significance for further studies on the etiology and pathogenesis of disease and exploration of new treatments. In recent years, animal studies on acupuncture-moxibustion treatment for rheumatoid arthritis developed rapidly to provide evidence support for expounding the mechanism of its therapeutic action on rheumatoid arthritis. This article summarizes recent years’ animal experimental studies on acupuncture-moxibustion treatment for rheumatoid arthritis to provide reference for its clinical application of acupuncture-moxibustion treatment to rheumatoid arthritis.

Acupuncture-moxibustion therapy; Arthritis, rheumatoid; Experimental study; Review

1005-0957(2017)04-0504-09

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2017.04.0504

2016-06-20

上海市中醫(yī)藥三年行動(dòng)計(jì)劃重大研究項(xiàng)目(ZYSNXD-CC-ZDYJ054);上海市“杏林新星”計(jì)劃(ZYSNXD011-RC- XLXX-20130042)

馮輝(1978—),女,副主任醫(yī)師,博士,主要從事針灸治療關(guān)節(jié)病及痛證的臨床及基礎(chǔ)研究