利 玲，高 音

（鄂東醫(yī)療集團黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院）藥學(xué)部，湖北黃石435000）

HPLC測定達(dá)原飲中的芍藥苷和黃芩苷的含量

利 玲，高 音*

（鄂東醫(yī)療集團黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院）藥學(xué)部，湖北黃石435000）

目的：建立同時測定達(dá)原飲中芍藥苷和黃芩苷含量的方法。方法：采用雙波長HPLC，Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：0.2%H3PO4溶液-甲醇（體積比50∶50）；檢測波長分別為230nm（芍藥苷）和280nm（黃芩苷）；柱溫為30℃；流速為1mL·min-1。結(jié)果：芍藥苷和黃芩苷分別在9.69～155.04μg·mL-1，18.66～298.56μg·mL-1線性關(guān)系良好，平均回收率分別為99.03%，98.98%，RSD分別為1.95%，1.67%。結(jié)論：該法簡便、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，可用于達(dá)原飲中芍藥苷和黃芩苷含量的同時測定。

HPLC；達(dá)原飲；芍藥苷；黃芩苷；含量測定

達(dá)原飲出自于《溫疫論·溫疫初起》段中，是明朝中醫(yī)吳又可以決氣伏于膜原而制[1]。該方由檳榔、厚樸、草果仁、知母、芍藥、黃芩和甘草七味中藥組方而成，又名達(dá)原散。用于瘟疫或瘧疾邪伏膜原之憎寒壯熱，胸悶嘔惡，頭痛煩躁，脈弦數(shù)，舌邊深紅，苔垢膩等癥，具有開達(dá)膜原，辟穢化濁之功。現(xiàn)代多應(yīng)用于各種發(fā)熱、盜汗、病毒性腦炎等[2,3]。達(dá)原飲是經(jīng)典用于濕遏熱伏的半表半里證的名方，沿用千年，并在國人抗擊非典的過程中發(fā)揮了重要的作用。

為了有效地控制達(dá)原飲的質(zhì)量，本研究選擇芍藥苷和黃芩苷作為檢測對象，建立了雙波長HPLC法同時測定達(dá)原飲中芍藥苷和黃芩苷兩種成分的含量。該方法簡單快速，穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性好，對于控制該中藥方劑的質(zhì)量提供了重要依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

日立L-7000型高效液相色譜系統(tǒng)，配有L-7110型泵，L-7200型自動進(jìn)樣器，L-7420型UV檢測器；BS110S型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；KQ 500DE型數(shù)控超聲波清潔器（昆山市超聲儀器有限公司）。

芍藥苷（96.4%中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-201438）；黃芩苷（93.3%中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201318）；芍藥、黃芩、檳榔、厚樸、草果、知母、甘草藥材購自湖北蘄州中藥材市場；甲醇（色譜純，美國Fisher Scientific公司）；磷酸（AR國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；水為純凈水。

1.2 色譜條件

色譜柱為Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6× 250 mm，5 μm）；流動相：0.2%H3PO4溶液-甲醇（體積比50∶50）；檢測波長分別為230 nm（芍藥苷）和280nm（黃芩苷）；柱溫為30℃；流速為1 mL· min-1。

1.3 溶液的制備

1.3.1 對照品溶液精密稱取芍藥苷對照品10mg，黃芩苷20mg，分別置25mL容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，室溫放冷后用甲醇定容至刻度，即得芍藥苷對照品儲備液（385.6μg·mL-1）和黃芩苷對照品儲備液（746.4μg·mL-1），保存于4℃冰箱。臨用時，分別精密量取兩種儲備液，按體積比1∶1混合均勻，得到芍藥苷和黃芩苷的對照品混合溶液，濃度分別為芍藥苷193.8μg·mL-1，黃芩苷373.2μg· mL-1。

1.3.2 供試品溶液取裝量差異項下的本品5g，研細(xì)，精密稱取約1g，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲處理30min，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

1.3.3 陰性供試品溶液按處方分別自制不含芍藥和不含黃芩的達(dá)原飲浸膏粉各10g，取適量按供試品制備項下方法制備陰性對照溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 專屬性考察

參考相關(guān)文獻(xiàn)[4-8]，經(jīng)過色譜條件的摸索與優(yōu)化，采用0.2%H3PO4溶液-甲醇（體積比50∶50）等度洗脫的方法。取對照品溶液、供試品溶液及各陰性供試品溶液，按2.1項下色譜條件進(jìn)樣分析，分別在230nm和280nm記錄供試品溶液色譜圖，分別有與對照品溶液芍藥苷、黃芩苷保留時間一致的特征峰，所測樣品的色譜峰之間以及和雜質(zhì)色譜峰分離良好，保留時間分別為4.94min和12.31min，陰性對照樣品無此特征峰，如圖1，2。表明供試品中其它組分對所測組分無干擾。

圖1 HPLC色譜圖（230 nm）Fig.1 HPLC chromatogram（230 nm）

圖2 HPLC色譜圖（280 nm）Fig.2 HPLC chromatogram（280 nm）

2.2 線性關(guān)系考察

分別取混合儲備液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0和 8.0mL置10mL容量瓶中，用甲醇定容。配制成含芍藥苷9.69、19.38、38.76、77.52、116.28、155.04μg·mL-1和含黃芩苷18.66、37.32、74.64、149.28、223.92、298.56μg· mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。以芍藥苷的峰面積比值為Y，以芍藥苷的濃度為X，得到芍藥苷的回歸方程和相關(guān)系數(shù)，芍藥苷對照品在9.69～155.04μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為Y=2201.4X -29608，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。以黃芩苷的峰面積比值為Y，以黃芩苷的濃度為X，得到黃芩苷的回歸方程和相關(guān)系數(shù)，黃芩苷對照品在18.66～298.56μg· mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為Y=64373.1X-41202.5，相關(guān)系數(shù)r=0.9991。

2.3 精密度考察

取對照品混合溶液，按2.1項下色譜條件，自動重復(fù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量20μL，記錄色譜圖。結(jié)果芍藥苷、黃芩苷峰面積RSD分別為1.74%，1.59%，表明儀器精密度良好。

2.4 重復(fù)性考察

取同一批號樣品（批號141001）6份，按1.3.2項下方法分別制備樣品溶液，按2.1項下色譜條件，分別進(jìn)樣分析，進(jìn)樣量20μL。計算芍藥苷和黃芩苷的平均含量分別為1.14，6.43mg·g-1，RSD分別為1.79%，1.94%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性考察

取配制好的同一批號樣品溶液（批號141001），室溫下放置，分別于配制后0，2，4，6，8 h各進(jìn)樣1次，記錄色譜圖，芍藥苷、黃芩苷峰面積RSD分別為1.81%，1.93%，表明樣品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗

取同一批號（141001）達(dá)原飲樣品約0.5g，共6份，精密稱定，各精密加入芍藥苷對照品儲備液（385.6μg·mL-1）1.5mL，黃芩苷對照品儲備液（746.4μg·ml-1）4mL，按1.3.2項下方法，分別制備樣品溶液。用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，按2.1項中色譜條件，分別進(jìn)樣分析，進(jìn)樣量20μL，計算各被測成分的平均回收率，結(jié)果見表1。

表1 達(dá)原飲中芍藥苷和黃芩苷的加樣回收率（n=6）Tab.1 Recovery of peoniflorin and baicalin in Dayuanyin（n=6）

2.7 樣品含量測定

取不同批號的達(dá)原飲樣品3批，分別按1.3.2項下方法制備樣品溶液，按2.1項下色譜條件，分別進(jìn)樣分析，進(jìn)樣量20μL，記錄峰面積，分別計算樣品中芍藥苷和黃芩苷的含量（mg·g-1）。每批樣品測定3份，結(jié)果見表2。

表2 達(dá)原飲中芍藥苷和黃芩苷的含量測定結(jié)果Tab.2 Content of peoniflorin and baicalin in Dayuanyin

3 結(jié)論

達(dá)原飲方中芍藥清熱滋陰，可防諸辛燥藥之耗散陰津；黃芩苦寒，清熱燥濕。二者共為佐藥。配合方中其它藥味即可達(dá)奏開達(dá)膜原，辟穢化濁，清熱解毒之功。芍藥苷和黃芩苷分別為芍藥和黃芩的有效成分，且測定方法均比較成熟，故選擇這兩種成分作為含量測定的指標(biāo)成分。結(jié)果表明，本法簡便，準(zhǔn)確可靠，專屬性強，可用于同時測定達(dá)原飲中芍藥苷和黃芩苷的含量。

［1］高忠英.談“邪伏膜原”與達(dá)原飲之運用［J］.北京中醫(yī)雜志，1994，13（4）：43-45.

［2］徐寧，徐敬才.淺析達(dá)原飲的運用及其類方［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2003，27（5）：341．

［3］宋茹，遲歸兵.達(dá)原飲膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，2008，30（8）：附9-附11.

［4］師永清.雙波長HPLC同時測定熊膽丸中梔子苷和黃芩苷的含量［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28（8）：762-765.

［5］侯志堅，師永清.雙波長HPLC同時測定防風(fēng)通圣丸中梔子苷和黃芩苷的含量［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17（24）：80-82.

［6］周蓬，宋青，馬帥.HPLC法同時測定小兒豉翹清熱顆粒中梔子苷、芍藥苷、黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素［J］.中成藥，2013，35（8）：1693-1696.

［7］朱冠華，顧圣瑩，康雷，等.HPLC法同時測定參芍胃安顆粒中芍藥苷和黃芩苷的含量［J］.中國藥房，2014，25（27）：2533-2535.

［8］趙佳麗，肖國棟，徐宏祥，等.HPLC測定咽炎片中的黃芩苷、芍藥苷和丹皮酚［J］.華西藥學(xué)雜志，2014，29（4）：476-477.

Simultaneous determination of peoniflorin and baicalin content in dayuanyin by HPLC

LI Ling,GAO Yin*
（Department of Pharmacy,Huangshi Central Hospital（Affiliated Hospital of Hubei Polytechnic University）, Edong Healthcare Group,Huangshi 435000,China）

Objective:To establish a method for simultaneously determining peoniflorin and baicalin in Dayuanyin.Method:A double wavelength RP-HPLC method was developed.The analysis was performed on a Aglient ZORBAX SB-C18column（4.6×250mm,5μm）using methanol-0.2%phosphoric acid,the flow rate was 1.0 mL·min-1.Peoniflorin and baicalin were detected at 230～280 nm respectively.The column temperature was 30℃. Result:The calibration curves of peoniflorin and baicalin showed good linearity in the ranges of 9.69～155.04 μg· mL-1and 18.66～298.56 μg·mL-1.The average recoveries were 99.03%and 98.98%with RSD of 1.95%and 1.67%. Conclusion:The method is simple,accurate,sensitive and reproducible for simultaneous determining peoniflorin and baicalin in Dayuanyin.

HPLC;Dayuanyin;peoniflorin;baicalin;content determination

R917

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20170323

2016-11-30

利玲（1975-），女，湖北省黃石市人，主管藥師，2005年畢業(yè)于中國藥科大學(xué)藥學(xué)專業(yè)本科，研究方向：臨床藥理學(xué)。

高音（1964-），女，大專學(xué)歷，主管藥師。