霍燕燕，和 玉，鄭艷金

（西安文理學院化學工程學院，陜西西安710065）

分析測試

牛奶中雙甲脒殘留量氣質聯(lián)用測定方法研究*

霍燕燕，和 玉，鄭艷金

（西安文理學院化學工程學院，陜西西安710065）

研究了牛奶中雙甲脒的氣相色譜-質譜檢測方法。實驗結果表明：在酸性條件下，牛奶試樣中的雙甲脒水解生成2,4-二甲基苯胺，得到的產(chǎn)物加入堿性溶液NaOH（4 mol·L-1）后用適量正己烷萃取，過濾后供氣相色譜質譜測定。在10～150μg·L-1濃度范圍內，2,4-二甲基苯胺的濃度與其測得的峰面積有較好的線性關系，線性方程Y＝39942Χ（μg·L-1）-223586，r=0.9988，檢出限為3.0 ng·mL-1。在空白牛奶樣品中，添加雙甲脒標準溶液，做加標回收實驗，結果表明平均回收率為104.1%～106.8%，相對標準偏差（RSD）為1.77%和3.08%。實驗證明該方法快速，分離度較好，適用于牛奶中雙甲脒含量的檢測。

雙甲脒；2,4-二甲基苯胺；氣相色譜-質譜

雙甲脒，含中等毒性的殺螨劑，一般常用于果樹、蔬菜、茶葉、棉花等作物的螨害防治。它含有多種類型的毒殺機理，不僅如此，雙甲脒可以利用食物鏈的傳遞，一層一層滲透或者會通過皮膚的接觸、吸收后會引起中毒，對人體具有潛在的危害。雙甲脒價格低廉，獲得途徑較為容易，所以曾經(jīng)在全國內以及國外被農民大量使用，然而經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其代謝產(chǎn)物2,4-二甲基苯胺具有致癌作用，因此我國農業(yè)部、衛(wèi)生部根據(jù)最新發(fā)布的《農藥安全使用規(guī)定》嚴格規(guī)定要禁止使用該殺螨劑。食品中農藥殘留物已廣泛引起人們的關注，但對雙甲脒殘留物研究較少[1]。

迄今為止，牛奶中雙甲脒殘留量檢測方法有氣相色譜法[2-4]、液相色譜法[5]等。傳統(tǒng)測定雙甲脒方法是氣相色譜法，它將牛奶中殘留的雙甲脒分解為2,4-二甲基苯胺，然后用七氟丁酸酐衍生之后，用電子捕獲檢測器進行測定。一方面，此方法加入衍生化試劑操作較復雜；另一方面，七氟丁酸酐屬于劇毒試劑，對操作人員身體傷害較大。若以液相色譜法直接測定雙甲脒含量，忽視了雙甲脒在酸性條件下會水解為2,4-二甲基苯胺的特性，只測定雙甲脒母體含量作為雙甲脒的總殘留量是不準確的，所以液相色譜法有一定的缺陷。

本文將牛奶中的雙甲脒在酸性條件下水解為2,4-二甲基苯胺，其為堿性化合物，且在堿性條件下，溶于大多數(shù)有機溶劑。水解后，加入堿性溶液再加入正己烷萃取。用0.45μm的有機相濾膜過濾后，再用氣相色譜-質譜進行定性、定量，結果是雙甲脒和其代謝物的總殘留量。該方法簡單、快捷，用于檢測牛奶中的雙甲脒殘留能得到令人滿意的效果，且檢出限遠低于標準規(guī)定的雙甲脒最大殘留量0.05mg·kg-1。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

雙甲脒標準品純度≥95.0%（D-86199 Augsburg,Germany）;2,4-二甲基苯胺標準品純度≥95.0%（D-86199 Augsburg,Germany）；

雙甲脒標準儲備液（100mg·L-1）：準確稱取10.0mg雙甲脒，用正己烷稀釋溶解并定容至100mL容量瓶中，儲存在冰箱中備用；

2,4-二甲基苯胺標準儲備液（100mg·L-1）：準確稱取10.0mg 2,4-二甲基苯胺，用正己烷稀釋溶解并定容至100mL容量瓶中，儲存在冰箱中備用。

1mg·mL-1標準中間液：分別準確移取雙甲脒和2,4-二甲基苯胺標準儲備液各1mL放到兩個100mL容量瓶中，再用正己烷稀釋定容至100mL，得到濃度為1 mg·L-1的標準中間液；

4mol·L-1NaOH（優(yōu)級純）；1mol·L-1HCl（優(yōu)級純）；無水Na2SO4(優(yōu)級純)；正己烷（色譜純）。

Trace 1300-ISQ氣相色譜質譜聯(lián)用儀（賽默飛世爾有限公司）；DHG-9023A恒溫干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）；TGL-16G離心機（上海安亭科學儀器廠）；BS 224 S電子天平（賽多利斯科學儀器北京有限公司）；色譜柱：TG-5MS（15m× 0.25mm×0.25μm）（Thermo Scientific）；進樣針：10μL（安捷倫科技有限公司）。

1.2 測試條件

1.2.1 氣相色譜條件色譜柱：TG-5MS（15m× 0.25mm×0.25μm）；載氣：He（純度99.99%）；采用恒流模式，柱流速：1mL·min-1；進樣的模式：不分流進樣，時間為1min；樣品進樣量：1μL；進樣口的溫度：260℃；柱溫：初始溫度50℃保持1min，以20℃·min-1升至250℃保持10min。

1.2.2 質譜條件電離需要的能量（EI）：70 eV；離子源的溫度：300℃；傳輸線溫度：300℃；掃描方式：選擇離子監(jiān)測（SIM）模式，2,4-二甲基苯胺的定量離子為m/z121，參考特征離子為m/z120，m/z106。

1.3 牛奶樣品前處理

移取0.5mL牛奶樣品放于4mL離心管中→加入1 mol·L-1HCl溶液1mL→放到60℃恒溫干燥箱中靜置30min→冷卻至室溫→用10000 r·min-1離心機離心10min→取上清液于另一離心管中→加入1mL 4 mol·L-1NaOH溶液→2mL正己烷，混勻，靜置5min→放入10000r·min-1離心機中離心10min→取上層正己烷液并加入0.1g無水Na2SO4除去水分→用0.45μm的有機相濾膜過濾后，供氣相色譜質譜聯(lián)用儀測定。

1.4 譜圖

采用全掃描的方式進行檢測2,4-二甲基苯胺標準溶液（1mg·L-1），掃描范圍：m/z 41-m/z350，得到其質譜圖和色譜圖。利用2,4-二甲基苯胺的全掃描質譜圖和保留時間，對2,4-二甲基苯胺的定性、定量特征目標離子進行選擇，2,4-二甲基苯胺的保留時間為：4.54，定量離子選?。?06，120，121。

圖12 ,4-二甲基苯胺色譜圖、質譜圖（2,4-二甲基苯胺含量10-4μg）Fig.1 Chromatogram and Mass spectrogram of 2,4-dimethyl aniline

采用離子監(jiān)測模式對2,4-二甲基苯胺進行定量檢測得到對應的色譜圖和質譜圖。100μg·L-1的2,4-二甲基苯胺色譜圖和質譜圖（圖1）。

從圖1中可知，保留時間為：4.56min。濃度為100μg·L-1的2,4-二甲基苯胺的對應的峰面積為4013590。

2 結果與討論

2.1 工作曲線與檢出限

準確移取1 mg·L-1的2,4-二甲基苯胺適量，分別配制濃度為10、20、40、100、150μg·L-1標準溶液，用氣相色譜-質譜測定。根據(jù)所得數(shù)據(jù)繪制峰面積-濃度工作曲線見圖2。

圖22 ,4-二甲基苯胺標準曲線Fig.2 Standard curve of 2,4-dimethyl aniline

由圖2可知，在10～150μg·L-1的濃度范圍內，峰面積與2,4-二甲基苯胺的濃度有較好的線性關系。線性方程Y＝39942X－223586,r=0.9988,該方法的檢出限為3.0 ng·L-1。

2.2 牛奶樣品的檢測

按照上述的前處理方法，對不同品牌、不同批號的牛奶進行水解、堿化，用正己烷萃取，用0.45μm的濾膜過濾后，用氣相色譜-質譜儀測定，檢測結果見表（3.1）。上述對于不同品牌牛奶的檢測，均未能測出雙甲脒及其殘留量2,4-二甲基苯胺。

表1 牛奶樣品的檢測結果Tab.1 Detection results of milk samples

2.3 回收率及精密度試驗

取兩個空白牛奶樣品（銀橋原點牧場，生產(chǎn)批號20160101B062M45）各0.2mL，添加雙甲脒1mL，濃度分別為150μg·L-1和176μg·L-1，再用1mL正己烷萃取，結果見表2。在10～150μg·L-1的線性范圍內，兩個添加濃度的雙甲脒的平均回收率分別為106.8%、104.1%，相對標準偏差分別為3.08%、1.77%，回收率較好。

表2 加標回收率的測定Tab.2 Determination of recoveries of spiked standard

3 結論

上述不同品牌、不同批號的牛奶中均未檢測出雙甲脒。原因分析：雙甲脒在低濃度下不穩(wěn)定容易失效，低溫條件下最多可保存7d左右，失效后就無法檢測。已生產(chǎn)的牛奶中本來就沒有雙甲脒或含量非常低，當檢測的時候，牛奶中少量的雙甲脒已經(jīng)部分失效或全部失效，含量更是少之又少，所以牛奶經(jīng)前處理后進氣質儀檢測，未測出其代謝產(chǎn)物。

本文選擇使用氣質聯(lián)用儀檢測牛奶中的雙甲脒及其代謝產(chǎn)物2,4-二甲基苯胺，樣品中的雙甲脒在酸性條件下水解得到2,4-二甲基苯胺，該產(chǎn)物堿化后萃取到正己烷中，再用氣相色譜質譜儀檢測和確證。該方法前處理步驟較為簡單，無需衍生，實驗的重復性好，靈敏度高。加標平均回收率為104.1%和106.8%。相對標準偏差（RSD）為1.77%和3.08%，能較好地滿足牛奶中雙甲脒殘留的分析要求。

［1］趙嬰榮.單甲脒在蘋果中殘留量的測定［J］.農藥,1991,30（50）：26-30.

［2］鄭永權,姚建仁,邵向東,等.蜂蜜中雙甲脒殘留量檢測方法［J］.農藥科學與管理,2000,21（3）：14-16.

［3］王元鴻,榮會,張瑩,等.食品中雙甲脒殘留量氣相色譜測定方法研究［J］.中國食品衛(wèi)生雜志,2001,13（6）：20-22.

［4］楊容.氣相色譜法檢測茶葉中痕量雙甲脒［J］.食品科技, 2006,（2）：94-95.

［5］趙增運,吳斌,沈崇鈺,等.高效液相色譜法測定蜂蜜中的雙甲脒殘留［J］.中國養(yǎng)蜂,2005,56（5）：4-5.

Detection of amitraz pesticide residues in milk using GC-MS*

HUO Yan-yan，HE Yu，ZHEN Yan-jin
（School of Chemical Engineering,Xi′an University,Xi′an 710065,China）

This paper studied amitraz’s residues in milk by gas chromatography-mass spectrometry method. Under acidic conditions,the amitraz of milk sample hydrolyzes 2,4-dimethyl aniline,the obtained product was added sodium hydroxide solution（4 mol·L-1）and added an appropriate amount of n-hexane extraction,then use gas chromatography mass spectrometry to determine.In 10～150μg·L-1concentration range,the concentration of 2,4-dimethyl aniline and measured peak area has a good linear relationship,relationship equation Y=39942X（Mg· L-1）-223586,r=0.9988,the detection limit was 3.0ng·mL-1.Blank milk samples added 2,4-dimethyl aniline standard solution,do spiked recovery experiments,the results show that the average recovery rate was 104.1%and 106.8%,relative standard deviation（RSD）was 1.77%and 3.08%.The method is rapid,has a good separating degree for detecting milk amitraz content.

amitraz；2,4-dimethylaniline；gas chromatography-mass spectrometry

O625

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20170320

2016-06-23

西安市科技計劃項目（CXY1531WL34）；陜西省教育廳項目（16JK2194）

霍燕燕（1983），女，碩士，實驗師，從事現(xiàn)代光譜分析方面的研究。