于鵬杰 戈 銳 王煥麗 張成武 燕 速 馬玉濱

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810000)

胃腺癌組織中肌成束蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)及意義

于鵬杰 戈 銳 王煥麗1張成武 燕 速 馬玉濱

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810000)

目的 檢測胃腺癌中肌成束蛋白(Fascin)和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9的表達(dá)，分析其臨床意義。方法 85例胃腺癌患者的臨床資料及術(shù)后蠟塊組織作為觀察組，正常胃黏膜組織32例作為對照組，應(yīng)用免疫組化方法檢測二組中Fascin和MMP-9的表達(dá)。結(jié)果 觀察組中Fascin和MMP-9的陽性率明顯高于對照組。觀察組中Fascin和MMP-9的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度密切相關(guān)。觀察組中Fascin的表達(dá)與腫瘤的最大徑密切相關(guān)。相關(guān)分析顯示Fascin和MMP-9呈正相關(guān)。結(jié)論 胃腺癌中Fascin和MMP-9高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的形成和進(jìn)展，二者具有一定的協(xié)同作用。

胃腺癌；肌成束蛋白；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；免疫組化

胃癌病變涉及飲食因素及遺傳因素等，可以發(fā)生在胃的任何部位，絕大部分是胃腺癌，其病變與基因和蛋白的表達(dá)失調(diào)有關(guān)〔1〕。肌成束蛋白(Fascin)是一種細(xì)胞骨架蛋白，研究認(rèn)為其高表達(dá)與腫瘤的形成和進(jìn)展有關(guān)〔2,3〕。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9是與轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白，可以降解細(xì)胞外基質(zhì)成分和基底膜，使轉(zhuǎn)移的屏障破壞，促使腫瘤遷移〔4,5〕。本文對胃腺癌患者術(shù)后留取的腫瘤組織進(jìn)行Fascin和MMP-9蛋白的檢測，分析其臨床意義。

1 材料和方法

1.1 臨床資料 2014年5月至2015年12月我院經(jīng)病理學(xué)確診、并行根治手術(shù)的胃腺癌患者作為觀察組，共85例，其中男45例，女40例，年齡35～86歲，平均61.8歲。納入均符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)前均未行放、化療。選擇上述患者術(shù)后標(biāo)本中距腫物邊緣>3 cm的正常胃黏膜組織32例作為對照組，其中男16例，女16例，年齡37～82歲，平均58.8歲。兩組一般臨床資料無明顯差異，具有可比性。

1.2 兩組中Fascin和MMP-9表達(dá)的檢測 兩組術(shù)后標(biāo)本均應(yīng)用甲醛溶液固定，石蠟包埋，切取4 μm切片后置于膠片上進(jìn)行Fascin和MMP-9的檢測。Fascin和MMP-9的檢測應(yīng)用免疫組化二步法，應(yīng)用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。

1.3 Fascin和MMP-9結(jié)果的判斷 Fascin和MMP-9陽性部位是細(xì)胞質(zhì)，以染成棕黃色為陽性。選擇上皮細(xì)胞分布集中的熱點(diǎn)區(qū)進(jìn)行計(jì)數(shù)，共選擇3個(gè)高倍視野區(qū)域，計(jì)算陽性率，取平均值，以陽性率<10%定為陰性，以≥10%定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組中Fascin和MMP-9陽性率的比較 兩組中Fascin和MMP-9的陽性率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2 觀察組不同臨床病理特征中Fascin和MMP-9表達(dá)的差別 觀察組中Fascin和MMP-9的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度密切相關(guān)。觀察組中Fascin的表達(dá)與腫瘤的最大徑密切相關(guān)。見表2。

2.3 觀察組Fascin和MMP-9表達(dá)的相關(guān)性 Fascin和MMP-9表達(dá)有正相關(guān)性(r=0.51,P<0.05)。

表1 兩組中Fascin和MMP-9陽性率的比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床病理特征中Fascin和 MMP-9表達(dá)的差別〔n(%)〕

3 討 論

Fascin最早由Bryan和Kane從海膽卵母細(xì)胞的提取物中發(fā)現(xiàn)并提純，人的Fascin基因位于染色體的7p22，其編碼的蛋白分子量為55 kD，參與F肌動(dòng)蛋白的特異性結(jié)合，具有高度保守性〔6,7〕。也有研究認(rèn)為Fascin蛋白含有4個(gè)β三葉草結(jié)構(gòu)域，每個(gè)三葉草結(jié)構(gòu)域中還含有6個(gè)雙鏈β發(fā)夾結(jié)構(gòu)，目前的研究認(rèn)為Fascin在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、黏附及細(xì)胞間信息交流中有重要的作用〔8,9〕。楊強(qiáng)等〔10〕應(yīng)用免疫組化方法檢測Fascin在結(jié)直腸腺瘤和腺癌中的表達(dá)，認(rèn)為Fascin蛋白是結(jié)直腸癌發(fā)生的一個(gè)遲發(fā)性的事件，在惡性腫瘤中高表達(dá)，且參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。MMPs是一組在結(jié)構(gòu)上具有較高同源性、能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的內(nèi)肽酶的總稱，MMP-9是家族中的重要成員，與MMP-2同屬于明膠酶類，也稱為明膠酶B〔11,12〕。MMP-9主要來源于巨噬細(xì)胞、惡性腫瘤細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞等〔13〕。MMP-9具有催化效率高、對底物的專一性、無明顯的催化副反應(yīng)的作用〔14〕。MMP-9的作用主要有三個(gè)環(huán)節(jié)：①轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)；③酶原活化；③活化后的調(diào)節(jié)。以上作用可以引起細(xì)胞外基質(zhì)的有效降解，使細(xì)胞轉(zhuǎn)移的屏障消失，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和播散〔15,16〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中提示Fascin和MMP-9高表達(dá)是胃癌形成的促進(jìn)因素。研究認(rèn)為Fascin高表達(dá)時(shí)會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞膜表面突起的增多，使細(xì)胞分化程度的下降，細(xì)胞增殖旺盛、肌動(dòng)蛋白骨架重建和細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)，使腫瘤組織在三維的基質(zhì)中的侵襲能力提高2～5倍〔10〕。也有研究認(rèn)為Fascin主要通過參與細(xì)胞突起的形成來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移〔17,18〕。本文結(jié)果提示Fascin和MMP-9高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的淋巴道播散和侵襲性生長。Fascin高表達(dá)是促進(jìn)腫瘤生長的重要因素，F(xiàn)ascin高表達(dá)是腫瘤細(xì)胞活動(dòng)性增高的表現(xiàn)。Fascin在腫瘤進(jìn)展中的作用可能與多種蛋白的調(diào)節(jié)有關(guān)，如對細(xì)胞黏附蛋白的調(diào)節(jié)。Fascin可以引起黏附蛋白E-cadherin表達(dá)的下降或丟失，此時(shí)細(xì)胞間的連接緊密度下降，細(xì)胞易于離開原發(fā)灶，形成播散〔19〕。本文結(jié)果提示Fascin和MMP-9具有一定的協(xié)同作用，這是Fascin促進(jìn)轉(zhuǎn)移的一種調(diào)節(jié)方式。劉俊等〔20〕也在肝門膽管癌中發(fā)現(xiàn)Fascin和MMP-9高表達(dá)及協(xié)同作用，認(rèn)為Fascin和MMP-9共同表達(dá)于癌細(xì)胞的胞質(zhì)中，F(xiàn)ascin的表達(dá)上調(diào)可以激活MMP-9，而當(dāng)MMP-9激活后引起細(xì)胞基底的降解，促使腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移〔21〕。

1 Gao ZL,Zhang C,Du GY,etal.Clinical significance of changes in tumor markers,extracellular matrix,MMP-9 and VEGF in patients with gastric carcinoma〔J〕.Hepatogastroenterology,2007;54(77):1591-5.

2 王 瑞.FASCIN-1和MMP-1在喉鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2011;19(10):1958-61.

3 Ozerhan IH,Ersoz N,Onguru O,etal.Fascin expression in colorectal carcinomas〔J〕.Clinics,2010;65(2):157-64.

4 Zheng H,Takahashi H,Murai Y,etal.Expressions of MMP-2,MMP-9 and VEGF are closely linked to growth,invasion,metastasis and angiogenesis of gastric carcinoma〔J〕.Anticancer Res,2006;26(5A):3579-83.

5 李 治,帥曉明,黃 韜.MMP-2、MMP-9在乳腺癌轉(zhuǎn)移中作用的研究〔J〕.華西醫(yī)學(xué),2006;21(1):43-4.

6 Uyama N,Iimuro Y,Kawada N,etal.Fascin,a novel marker of human hepatic stellate cells,may regulate their proliferation,migration,and collagen gene expression through the FAK-PI3K-Akt pathway〔J〕.Oncogene,2012;92(1):57-71.

7 劉 俊,李灼日,毛先海.Fascin在肝門膽管癌組織中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中國普通外科雜志,2011;20(6):647-50.

8 于維霞,熊勝道,盧朝輝,等.Fascin與Ki-67在分化差的非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)〔J〕.中國實(shí)用內(nèi)科雜志,2005;25(8):705-7.

9 Qin YR,Hong T,Qiao JJ,etal.Expression of fascin in human esophageal squamous cell carcinoma and its clinical significance〔J〕.J Southern Med Univ,2011;31(7):1216-9.

10 楊 強(qiáng),盧朝輝,羅玉鳳,等.Fascin蛋白在結(jié)、直腸腺瘤和癌中的表達(dá)及意義〔J〕.診斷病理學(xué)雜志,2006;13(5):359-61.

11 Czyzewska J,Guzińskaustymowicz K,Kemona A,etal.The expression of matrix metalloproteinase 9 and cathepsin B in gastric carcinoma is associated with lymph node metastasis,but not with postoperative survival.〔J〕.Folia Histochem Et Cytobiol,2008;46(1):57-64.

12 常 瑋,王斌全.RECK和MMP-9在喉鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.醫(yī)學(xué)研究雜志,2010;39(4):73-6.

13 牟衛(wèi)平，劉 晶，劉榮耀，等.COX-2、MMP-9在胃癌中的表達(dá)及意義〔J〕.濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014；37(1)：1-4.

14 劉 俊,李灼日.Fascin、MMP-9與膽管癌的相關(guān)性研究進(jìn)展〔J〕.中國現(xiàn)代手術(shù)學(xué)雜志,2011;15(2):156-9.

15 Lu W,Hong ZL,Lin LY,etal.Expression of MMP-9 and MMP-9 mRNA in gastric carcinoma and its correlation with angiogenesis〔J〕.National Med J China,2003;83(9):782-6.

16 Wang X,Shi L,Deng Y,etal.Inhibition of leucine aminopeptidase 3 suppresses invasion of ovarian cancer cells through down-regulation of Fascin and MMP-2/9〔J〕.Europ J Pharmacol,2015;768:116-22.

17 朱人杰,鄭慶玲,顧棟樺.Fascin蛋白在胃腺癌中的表達(dá)及與MMP-2、MMP-9的相關(guān)性〔J〕.浙江醫(yī)學(xué),2010;32(10):1518-9.

18 Li R,Li G,Deng L,etal.IL-6 augments the invasiveness of U87MG human glioblastoma multiforme cells via up-regulation of MMP-2 and fascin-1.〔J〕.Oncol Reports,2010;23(6):1553-9.

19 Hayashi Y,Osanai M,Lee GH.Fascin-1 expression correlates with repression of E-cadherin expression in hepatocellular carcinoma cells and augments their invasiveness in combination with matrix metalloproteinases〔J〕.Cancer Sci,2011；102(6):1228-35.

20 劉 俊,李灼日,毛先海.Fascin和MMP-9在肝門膽管癌組織中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.世界華人消化雜志,2012;22(9):795-9.

21 劉長歡,金 玲,丁麗娜,等.MMP-9和Fascin蛋白在口腔扁平苔蘚中的表達(dá)及相關(guān)性研究〔J〕.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2016;20(1):11-4.

〔2015-12-07修回〕

(編輯 杜 娟)

于鵬杰(1980-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事胃腸腫瘤研究。

R735

A

1005-9202(2017)04-0899-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.04.051

1 青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科一病區(qū)