金清，郭利偉

(長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025)

國內(nèi)豬流行性腹瀉防治研究進(jìn)展

金清，郭利偉

(長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025)

豬流行性腹瀉是一種高度接觸性腸道傳染病，各日齡豬均易感，發(fā)病急、傳播快、流行廣、治愈率低、病死率高，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的健康發(fā)展。近年來，該病在我國范圍內(nèi)的流行呈明顯上升趨勢。對該病防治方面的國內(nèi)外研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

豬流行腹瀉；防治；研究進(jìn)展

豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由冠狀病毒科α-冠狀病毒屬的PEDV引起的一種以嘔吐、腹瀉和脫水等為主要特征的急性腸道傳染病[1]。目前，該病在各個季節(jié)均有發(fā)生，但仍以冬季和初春發(fā)病率最高，不同年齡的豬只均可感染，其發(fā)病嚴(yán)重程度視年齡而定，無品種和地域選擇性。哺乳仔豬感染后通常引起腹瀉脫水造成死亡，發(fā)病率為100%，死亡率可達(dá)80%～100%，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

自1971年英國首次報道PED后，比利時、德國、瑞士、日本等許多國家相繼報道了該病的發(fā)生。我國于1973年發(fā)生該病，但是直到1984年，才經(jīng)熒光抗體試驗和血清中和試驗證實該病在我國的存在[2]。近年來PED的流行呈爆發(fā)趨勢，2013年在美國迅速發(fā)病并在全美范圍內(nèi)流行，給30個州8200多個豬場帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3]。2014年1月該病在加拿大開始流行，隨后擴(kuò)散到多米尼加等拉美國家。在歐洲的意大利、德國等國，亞洲的韓國、日本、越南等地，PED疫情也日趨嚴(yán)重[4]。2010年以來，該病在我國多個省份暴發(fā)流行，2011至2014年的PEDV流行病學(xué)調(diào)查顯示，中國大陸除西藏地區(qū)外均檢測到PEDV，PEDV陽性樣品檢測率為62.10%～78.49%，陽性豬場比率為71.43%～83.47%。PEDV感染以及與其他腸道病毒的共感染已成為最近豬病毒性腹瀉流行的主要誘因[5]。因此，當(dāng)前該病已成為我國養(yǎng)豬業(yè)的重要豬病之一，嚴(yán)重影響了我國養(yǎng)豬行業(yè)的健康發(fā)展。面對近年來的腹瀉疫情，很多因素導(dǎo)致豬流行性腹瀉的防治成為后一段時間內(nèi)牲豬集約化養(yǎng)殖面臨的亟待解決的問題之一。

1 PEDV疫苗

疫苗免疫是預(yù)防動物傳染病的有效方式，也是亞洲國家PED防疫控制的主要方式之一。PED的不斷流行及其病毒的變異，使得人們越來越多地關(guān)注PEDV疫苗的研制。雖然臨床上有多種滅活疫苗和弱毒疫苗可供選擇，但至今尚無特別有效的疫苗可以完全預(yù)防或控制豬流行性腹瀉的發(fā)生。在我國，PEDV疫苗主要有滅活疫苗、弱毒疫苗以及基因工程疫苗。臨床應(yīng)用以滅活疫苗為主，弱毒疫苗為輔[6]。

滅活疫苗在動物疫病防控方面發(fā)揮了非常重要的作用，其主要優(yōu)點是安全、易于運輸和保存。我國最初用的PEDV疫苗就是滅活疫苗。1993年，王明等[7]采用感染PEDV CV777株的仔豬小腸組織及內(nèi)容物制備出能夠有效預(yù)防母豬和哺乳仔豬的組織滅活苗，該疫苗保護(hù)力可達(dá)85%以上。但是滅活苗免疫效果與PEDV毒株及抗原含量有關(guān)。近年來對PEDV流行毒株的基因組序列測定和分析結(jié)果顯示，我國廣泛流行的PEDV毒株在不同的基因位點發(fā)生了明顯和特征性的變異，相比于經(jīng)典或先前的毒株，這些基因突變造成的蛋白位點的改變可能導(dǎo)致PEDV抗原位點發(fā)生變異，影響PEDV的毒力和致病性，從而造成養(yǎng)殖一線反復(fù)應(yīng)用滅活疫苗或弱毒株疫苗免疫母豬群，也不能為新生仔豬提供強(qiáng)有力的被動免疫保護(hù)，以致新生仔豬PED的發(fā)生愈演愈烈[8]。

弱毒疫苗由于使用了能夠正常增殖的弱毒株，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生持續(xù)的免疫，是臨床上使用最多的疫苗，但國內(nèi)對PED弱毒疫苗的研究相對較少，國內(nèi)市場上主要是以PED-RV-TGE三聯(lián)活疫苗為主，用于豬場對PED的防控。與滅活疫苗相比，弱毒疫苗的安全更為受到關(guān)注，弱毒苗的使用存在毒力返強(qiáng)的可能性，也可能使PED陰性豬場轉(zhuǎn)陽[6]。

除滅活苗和弱毒苗外，目前還有基因工程疫苗，如乳酸桿菌疫苗在預(yù)防 PED的同時還可調(diào)節(jié)機(jī)體狀態(tài)，提高免疫力；轉(zhuǎn)基因疫苗，以轉(zhuǎn)基因植物等表達(dá)外源蛋白，進(jìn)而將其作為口服疫苗刺激黏膜免疫，預(yù)防腸道傳染病，如以煙草表達(dá)PEDV的中和表位基因，可大大提高抗原表達(dá)量。但是當(dāng)前基因工程疫苗尚處于研究階段，多數(shù)基因工程疫苗需要持續(xù)長時間、多次接種才能誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生有效的免疫力，這在養(yǎng)殖一線是不便捷的，而當(dāng)前新生仔豬發(fā)生腹瀉后將迅速脫水致死，顯然對生后仔豬使用此類疫苗不能達(dá)到及時有效免疫的目的。此外，使用此類疫苗免疫母豬使生后仔豬獲得被動免疫的動物試驗研究較少，因此此類疫苗大量應(yīng)用于養(yǎng)殖一線尚待時日[9]。

2 PED的預(yù)防

對母豬進(jìn)行疫苗免疫是在PED流行或呈地方流行時一個最基本的預(yù)防及根除策略，目的是使得仔豬能夠從初乳和母乳中獲得母源抗體[10]。在生產(chǎn)中，由于PED與TGE存在交叉感染，很容易并發(fā)而且癥狀極為相似，因此較多采用二聯(lián)疫苗來預(yù)防PED的發(fā)生[11]。但是，市面上能夠買到的所有PEDV疫苗都不能明顯減少腹瀉的發(fā)病率[12]。對抗腸道疾病主要依賴于腸粘膜上分泌型Ig A的存在，但是疫苗的功效可能與維持血清和初乳中高水平的PEDV特異性中和抗體有關(guān)[13]。除了直接接種疫苗，另一個重要的保護(hù)策略是從母乳中獲得被動免疫，即保證新生仔豬從母豬初乳及母乳中獲得充足的保護(hù)性抗體[10]。

一旦豬場有PEDV感染，可以考慮返飼以防止疾病的擴(kuò)散。即用腹瀉的新生仔豬糞便或者將其腸道內(nèi)容物絞碎后感染妊娠母豬，這將人為刺激母豬快速產(chǎn)生對該病的免疫力并且有可能縮短該病在豬場中的暴發(fā)時間。此法有一定的效果，但是也存在一些隱患，因為在母豬或仔豬的腸道內(nèi)容物或糞便中可能包含PRRS和PCV2病毒，容易造成這些疾病的傳播，同時該法并不能保證腸內(nèi)容物中PEDV的含量或效價可以提供足夠的免疫效果[14]。

3 PED的治療

PEDV能夠?qū)е伦胸i脫水，小腸上皮絨毛嚴(yán)重萎縮，因此能夠刺激干細(xì)胞繁殖從而縮短腸上皮細(xì)胞再生時間的藥理、生物或天然藥物都有可能成為一種治療 PEDV的策略[15]。

3.1 中藥治療

根據(jù)中醫(yī)理論，辨證仔豬腹瀉為濕熱毒邪內(nèi)蘊所致。濕熱上蒸，精神沉郁；胃失和降，故發(fā)生嘔吐；濕熱犯脾，則食欲減退；濕熱下迫，水濕不能分利，腸道傳導(dǎo)失職，故瀉如注，糞便腥臭，尿短少。因此，治療以芳香化濁、健胃醒脾、除濕止瀉、補中益氣、清熱解毒、調(diào)理腸道微生態(tài)環(huán)境、增強(qiáng)免疫力的中藥為主。中藥及其復(fù)方具有調(diào)節(jié)免疫功能、抑制病毒復(fù)制、阻止病毒致細(xì)胞病變、抗炎鎮(zhèn)痛、解熱等功效，某些中藥成分還可以刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生干擾素、腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素等細(xì)胞因子，一方面直接殺傷病毒，另一方面保護(hù)機(jī)體，減輕病毒產(chǎn)生的毒素對機(jī)體的損害[16]。

潘光建等用中藥提取物(金銀花、黃連、梔子、大青葉、白頭翁、山楂、烏梅、麥芽等)治療仔豬流行性腹瀉，其試驗總體治愈率94.44%，死亡率5.56%，對其病毒性腹瀉具有很好的治療效果[16]。沈永恕[17]使用冠能注射液(生石膏、板藍(lán)根、人參、丹參、雙花、連翹、大黃、黃芪)對不同地區(qū)流行性腹瀉的豬群進(jìn)行治療，對不同生長期豬群，包括哺乳仔豬、斷奶仔豬、育肥豬的治愈率分別為97% 、98%、100%，總治愈率為98%。朱買勛等[18]探討復(fù)方術(shù)芩提取液體外抗PEDV感染Vero細(xì)胞作用效果，結(jié)果表明復(fù)方術(shù)芩提取液在體外抗PEDV主要是通過對病毒的直接滅活和對病毒復(fù)制抑制而達(dá)到抗病毒功效。冉茂釗[19]以穿心蓮注射液、硫酸黃連素注射液于豬后海穴進(jìn)行注射，對PED予以預(yù)防(每千克體重各0.4mL)和治療(每千克體重各0.2mL)，結(jié)果表明，預(yù)防組20頭僅有1頭出現(xiàn)輕微腹瀉，治療組治愈率可達(dá)100%。還有研究報道，槲皮素-7-鼠李糖苷在抑制PEDV復(fù)制方面非常有效；從山茶花中提取的十五齊墩果烷型三萜成分能夠通過抑制病毒蛋白質(zhì)復(fù)制過程來抑制PEDV，也是一種潛在治療PEDV的藥物制劑；中藥防風(fēng)中的三種香豆素被驗證對PEDV合成如GP6等關(guān)鍵結(jié)構(gòu)蛋白的基因有顯著抑制作用；銀杏果皮中的多糖細(xì)胞毒性較小且可顯著抑制病變發(fā)生，阻止PEDV吸附入侵宿主細(xì)胞，在病毒感染的早期階段發(fā)揮作用[20]。

3.2 其他藥物治療

研究報道，表皮生長因子(EGF)能刺激腸隱窩上皮細(xì)胞的增殖，并可以減輕由PEDV感染仔豬所導(dǎo)致的萎縮性腸炎，這一發(fā)現(xiàn)表明EGF將可以用來治療PEDV的感染。廣譜抗病毒藥物如利巴韋林能夠抑制PEDV在體外的感染，因此也可以用來治療PED。鼠源單克隆抗體的單鏈可變區(qū)(single chain variable fragment，sc Fv)大腸桿菌表達(dá)的sc Fv具有中和PEDV的功能，說明大腸桿菌表達(dá)的重組sc Fv具有成為抗PEDV感染的新型預(yù)防治療藥物的潛質(zhì)[10]。2013年， Guo等[21]利用噬菌體隨機(jī)肽庫經(jīng)過三輪淘選，選出5條能夠與PEDV受體結(jié)合的噬菌體短肽。這5條噬菌體短肽通過MTT試驗驗證其能夠在細(xì)胞水平上抑制TGEV感染，這對于以后抑制PEDV作用的研究具有重要意義。郭楠[12]的研究結(jié)果表明，抗菌肽Caerin1.1對PEDV不同毒株都有十分顯著的抑制效果且抑制呈劑量依賴，其抑制作用主要表現(xiàn)為對PEDV病毒粒子的直接殺傷效果，破壞囊膜完整性，對PEDV的復(fù)制組裝無抑制作用，但可抑制后代病毒的釋放。這一結(jié)果為抗菌肽在豬病臨床的實際應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。此外，為新生仔豬提供充足的營養(yǎng)來增強(qiáng)抵抗力從而抵抗PEDV也是非常有必要的。

3.3 對癥療法

在發(fā)生PED時可以進(jìn)行一些對癥療法，對發(fā)病情嚴(yán)重的仔豬進(jìn)行補液，還可添加一些廣譜抗生素(如粘桿菌素)控制繼發(fā)感染，防止脫水引起酸中毒，提高治愈率。補液的方式有3種：口服補液、綜合輸液、腹腔補液，其中腹腔注射最迅速省力。對于病豬給予注射的5%碳酸氫鈉和葡萄糖生理鹽水，應(yīng)用腸道抗菌藥如痢特靈、新諾明、慶大霉素、黃連素，在一定積度上能夠預(yù)防繼發(fā)感染[22]。

4 飼養(yǎng)管理

目前，PEDV的防控主要采取綜合性防制措施，重視免疫預(yù)防，加強(qiáng)對豬只的飼養(yǎng)管理，提高飼料營養(yǎng)水平，杜絕飼喂變質(zhì)飼料，保持營養(yǎng)平衡，從而提高豬只健康水平及其抵抗力；保持圈舍干凈通風(fēng)換氣，做好母豬產(chǎn)前乳房清潔和消毒以及產(chǎn)房的保溫工作，同時應(yīng)該降低濕度，給予充足而干凈的飲水，不要頻繁地更換飼料；堅持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出原則[23]。

發(fā)生PED時首先要將病豬隔離，注意圈舍的消毒，尤其是被仔豬腹瀉污染的地面，并在干凈的食槽里添加淡鹽水或補液鹽，或灌服口服補液鹽溶液，這樣有助于縮短病程，降低死亡率。并且應(yīng)加強(qiáng)管理人員和豬只的流動，防止疾病的傳播與蔓延，保持優(yōu)良的生長環(huán)境，減少應(yīng)激。采取減飼、饑餓療法，減輕發(fā)病豬胃腸道的負(fù)擔(dān)[10,20]。

制定嚴(yán)格的生物安全原則是預(yù)防和控制急性PED暴發(fā)的一項重要措施。雖然PEDV能夠被大多數(shù)的消毒劑滅活[24]，但是消毒之后通過RT-PCR仍能夠檢測到PEDV的RNA[13]。因此，為了選擇合適的消毒劑并制定恰當(dāng)?shù)南境绦?，需要對在體內(nèi)或者在不同環(huán)境狀況下的消毒劑進(jìn)行評估，尤其是在冬季。建議按以下步驟對運輸工具及產(chǎn)房進(jìn)行消毒：①用超過70℃的溫水進(jìn)行徹底的高壓沖洗；②按照使用說明選擇恰當(dāng)?shù)南緞┻M(jìn)行消毒；③消毒后干燥過夜。其他的生物安全措施包括：限制育肥舍和保育舍的人員流動；限制裝卸過程中司機(jī)與豬場工作人員的接觸；所有新引進(jìn)或者替換的豬只在進(jìn)入豬場之前都應(yīng)隔離一段時間檢查其健康狀態(tài)；限制任何有可能攜帶病毒的個人或物資進(jìn)入豬場；對所有非生物媒介、人員以及可能攜帶PEDV的外來參觀人員進(jìn)行全面消毒[10]。

總而言之，對養(yǎng)豬場應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行管理措施，定期消毒，加強(qiáng)隔離檢疫。飼喂高能量的飼料，進(jìn)行免疫接種，并將中獸醫(yī)療法滲入其中，可以使豬群最大程度地得到保護(hù)，在發(fā)病期內(nèi)采取相應(yīng)的對癥治療手段，盡可能將損失減少到最小。

[1]陳溥言，王川慶，姜平，等.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004：229～231.

[2] Sun R Q, Cai R J, Chen Y Q,etal. Outbreak of porcine epidemic diarrhea in suckling piglets, China[J]. Emerg Infect Dis, 2012, 18: 161～163.

[3] Huang Y W, DickermanA W, Pineyro P,etal. Origin, evolution, and genotyping of emergent porcine epidemic diarrhea virus strains in the United States[J]. Mbio, 2013, 4:1～8.

[4] Madson D M, Arruda P H, Magstadt D R,etal. Characterization of porcine epidemic diarrhea virus isolate US/Iowa/18984/2013 infection in 1-Day-Old Cesarean-Derived Colostrum-Deprived piglets[J]. Vet Pathol, 2016, 53: 44～52.

[5] Zhao Z P, Yang Z, Lin W D,etal. The rate of co-infection for piglet diarrhea viruses in China and the genetic characterization of porcine epidemic diarrhea virus and porcine kobuvirus[J]. Acta Virol, 2016, 60: 55～61.

[6] 胡鴻惠，南文金，龔中貴，等.豬流行性腹瀉弱毒疫苗研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016, 44(26): 69～72.

[7] 王明，馬思奇，周金法，等.豬流行性腹瀉滅活疫苗的研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，1993, (5): 17～19.

[8] Gerdts V, Zakhartchouk A. Vaccines for porcine epidemic diarrhea virus and other swine coronaviruses[J].Vet Microbio, 2017, 206: 45～51.

[9] 徐國棟.豬流行性腹瀉疫苗研究進(jìn)展[J].中國動物保健，2017, 19 (2): 1～4.

[10] 王明月.豬流行性腹瀉病毒S蛋白的單抗制備及夾心ELISA檢測PEDV方法建立與應(yīng)用[D]. 長春：吉林大學(xué)，2016.

[11] 齊德林.豬流行性腹瀉病病毒研究進(jìn)展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2016, (2): 17～19.

[12] 郭楠.抗菌肽Caerin1.1抑制豬流行性腹瀉病毒增殖的研究[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

[13] Lee C. Porcine epidemic diarrhea virus: An emerging and re-emerging epizootic swine virus[J]. Virology journal, 2015, 12: 193.

[14] Jung K, Ha Y, Ha S K,etal. Identification of porcine circovirus type 2 in retrospective cases of pigs naturally infected with porcine epidemic diarrhoea virus[J]. The Veterinary Journal, 2006, 171: 166～168.

[15] Jung K, Saif L J. Porcine epidemic diarrhea virus infection: Etiology, epidemiology, pathogenesis and immunoprophylaxis[J]. The Veterinary Journal, 2015, 204: 134～143.

[16] 楊洪早，王東升，董書偉，等.仔豬腹瀉的病因及中藥防治研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016, 37(10): 89～93.

[17] 沈永恕.復(fù)方冠能注射液對豬流行性腹瀉的療效試驗[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥學(xué)雜志，2006, (4): 39～40.

[18] 朱買勛，余春成，朱兆榮，等.復(fù)方術(shù)芩提取液體外抗 PEDV感染PK 15細(xì)胞的作用效果[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2014, 34(3): 485～488.

[19] 冉茂釗.后海穴注射穿心蓮與黃連素治療豬流行性腹瀉[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2009, 33(6) : 25.

[20] 李任峰.河南省豬流行性腹瀉病毒遺傳進(jìn)化分析及免疫學(xué)檢測方法的建立[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2016.

[21] Guo D H, Zhu Q H, Feng L,etal. Screening and antiviral analysis of phages that display peptides with an affinity to subunit C of porcine aminopeptidase[J]. Monoclon Antib Immunodiagn Immu-nother, 2013, 32: 326～329.

[22] 高炳鐘.豬流行性腹瀉的診斷及中西獸醫(yī)結(jié)合防治[J].福建畜牧獸醫(yī)，2014, 36(5): 32～33.

[23] 林耀民，宋萬杰，秦云，等.豬流行性腹瀉的流行現(xiàn)狀及防控策略[J].中國動物防疫檢疫，2016, 33(5): 62～64.

[24] Pospischil A, Stuedli A, Kiupel M. Diagnostic notes update on porcine epidemic diarrhea[J]. J Swine Health Prod, 2002, 10: 81～85.

2017-08-18

國家自然科學(xué)基金青年項目(31602099)。

金清(1994-)，女，碩士生，研究方向為中獸藥學(xué)。通信作者：郭利偉，guolw@yangtzeu.edu.cn。

[引著格式]金清，郭利偉.國內(nèi)豬流行性腹瀉防治研究進(jìn)展[J].長江大學(xué)學(xué)報(自科版)，2017,14(22)：28～31.

S855

A

1673-1409(2017)22-0028-04

[編輯] 余文斌