王建紅

流式細(xì)胞技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用研究進(jìn)展

王建紅

近幾年隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，對(duì)細(xì)胞的研究技術(shù)也在不斷的進(jìn)步，流式細(xì)胞術(shù)是近幾年適用范圍逐漸加大的一種新技術(shù)，主要是對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行快速定量以及定性分析，這不僅對(duì)科學(xué)研究有著重要的意義，對(duì)于臨床檢驗(yàn)也有著極大的影響，本文主要是對(duì)流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展進(jìn)行分析，以期為流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用提供參考。

流式細(xì)胞技術(shù)；醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)；應(yīng)用研究；發(fā)展史

作者單位：261000 濰坊，濰坊市中醫(yī)院

流式細(xì)胞術(shù)是近幾年在臨床醫(yī)學(xué)中出現(xiàn)的一種新技術(shù)，其結(jié)合了多門學(xué)科，是一個(gè)綜合性的技術(shù)，其中包括細(xì)胞生物學(xué)、物理學(xué)技術(shù)、激光技術(shù)等，尤其是隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，其使用頻率以及范圍均有提升，流式細(xì)胞術(shù)主要是使細(xì)胞快速流動(dòng)，在這種情況下對(duì)細(xì)胞或是細(xì)胞中的生物粒子等進(jìn)行分析和分選的一種技術(shù)[1]。目前在遺傳學(xué)、腫瘤學(xué)、生物細(xì)胞學(xué)中均有所應(yīng)用，尤其是在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用更是頻繁。

1 流式細(xì)胞技術(shù)

1.1 流式細(xì)胞術(shù)概述 流式細(xì)胞技術(shù)屬于綜合性的技術(shù)，臨床中也可將其稱為流式細(xì)胞分析，流式細(xì)胞術(shù)主要的應(yīng)用方式，是通過(guò)對(duì)流式細(xì)胞儀的應(yīng)用，對(duì)懸浮細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量，并根據(jù)對(duì)計(jì)算機(jī)、流體力學(xué)、電子等生物技術(shù)學(xué)科的應(yīng)用，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行具體的分析，包括細(xì)胞的功能、特性等[2]。近幾年隨著流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中也逐漸被擴(kuò)大應(yīng)用范圍，包括細(xì)胞生物檢驗(yàn)、腫瘤檢驗(yàn)、血液檢驗(yàn)等方面。

1.2 流式細(xì)胞儀

1.2.1 流式細(xì)胞儀的發(fā)展史 在記載中，最早出現(xiàn)細(xì)胞計(jì)數(shù)的時(shí)間是20世紀(jì)30年代中期，Guclcer在1947年，通過(guò)對(duì)層流以及端流的原理研究后，研制出了最初的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器，煙霧微粒計(jì)數(shù)器[3]；而后在1953年，出現(xiàn)可對(duì)全血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的描述，這也是后期流式細(xì)胞儀的雛形；第一臺(tái)光電計(jì)數(shù)器1954年；1969年，醫(yī)學(xué)界出現(xiàn)第一臺(tái)使用熒光檢測(cè)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器；而后在1972年，對(duì)細(xì)胞分選器的研制取得了成功；單克隆抗體技術(shù)在1975年被提出，為細(xì)胞研究中應(yīng)用特異性免疫試劑提供了一定的基礎(chǔ)[4-6]。隨著社會(huì)的發(fā)展，光電技術(shù)也隨之發(fā)展，而流式細(xì)胞儀的發(fā)展也有了一定的模塊化。21世紀(jì)后，流式細(xì)胞儀已逐漸完善，成為細(xì)胞分析學(xué)以及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的重要輔助工具。

1.2.2 流式細(xì)胞儀的工作原理 流式細(xì)胞儀的主要構(gòu)成，分別為：①液體的流動(dòng)系統(tǒng)；②激光系統(tǒng)以及光學(xué)系統(tǒng)；③光學(xué)系統(tǒng)；④信號(hào)處理系統(tǒng)以及信號(hào)分析系統(tǒng)；⑤細(xì)胞進(jìn)行分類以及篩選的系統(tǒng)。

流式細(xì)胞儀的基本工作原理：主要是通過(guò)激光對(duì)鞘流中的染色細(xì)胞標(biāo)志物進(jìn)行測(cè)量，記錄其中的熒光強(qiáng)度以及熒光寬度、散射光強(qiáng)度等參數(shù)。且由于進(jìn)行熒光標(biāo)記單克隆抗體的種類有所不同，進(jìn)而對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果中的細(xì)胞抗原物質(zhì)進(jìn)行區(qū)分，也可以對(duì)細(xì)胞成分進(jìn)行分析[7]。

1.3 流式細(xì)胞技術(shù)的分析方法

1.3.1 對(duì)流式細(xì)胞免疫表型進(jìn)行分析 分子探針選擇熒光素進(jìn)行標(biāo)記的單克隆抗體，使用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞上的特異性抗原分子進(jìn)行檢測(cè)，就被稱為流式細(xì)胞免疫的表型分析。流式免疫表型分析，對(duì)于細(xì)胞種類的分析速度較快，操作較簡(jiǎn)單。通過(guò)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色、或是多色免疫熒光細(xì)胞染色等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行檢驗(yàn)，可以對(duì)單細(xì)胞的抗原進(jìn)行鑒別，且鑒別細(xì)胞的時(shí)間較短，也逐漸成為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中使用較為先進(jìn)的細(xì)胞檢驗(yàn)技術(shù)，應(yīng)用范圍也較廣。

1.3.2 對(duì)血液淋巴細(xì)胞的免疫表型分析 對(duì)血液淋巴細(xì)胞進(jìn)行免疫表型分析，沈繼龍等[8,9]的研究中，主要的方法包括以下兩種：①使用雙色熒光對(duì)血液淋巴細(xì)胞進(jìn)行免疫表型分析，通過(guò)對(duì)兩種單克隆抗體使用兩種熒光色素進(jìn)行標(biāo)記，并與全血中淋巴細(xì)胞膜的特異性抗原進(jìn)行結(jié)合，對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行溶解后，將紅細(xì)胞碎片以及未結(jié)合的抗體進(jìn)行洗滌，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定，對(duì)淋巴細(xì)胞亞群的百分率進(jìn)行計(jì)數(shù)；②使用多色熒光對(duì)血液淋巴細(xì)胞進(jìn)行免疫表型分析，對(duì)單克隆體使用3種熒光素進(jìn)行標(biāo)記，使用CD45對(duì)血液中的淋巴細(xì)胞進(jìn)行免疫表型分析，可以更為準(zhǔn)確地對(duì)淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行鑒別。

1.3.3 流式細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)抗原分析 對(duì)流式細(xì)胞內(nèi)或是細(xì)胞核內(nèi)的抗原進(jìn)行分析的主要使用方法是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多色流式細(xì)胞免疫表型分析，臨床上多應(yīng)用在白血病、微量殘留的白血病以及淋巴瘤分級(jí)檢測(cè)等，一般多數(shù)是將白血病細(xì)胞內(nèi)核抗原以及細(xì)胞膜的表面抗原進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)束后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)的分析[10]。而細(xì)胞內(nèi)的抗原以及細(xì)胞膜表面的抗原進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，穿透處理是細(xì)胞膜和核膜的檢測(cè)區(qū)別，在不破壞細(xì)胞結(jié)果的情況下，又可以使細(xì)胞膜和核膜上出現(xiàn)單克隆體自由通過(guò)的微孔，且靶抗原抗原性不變以及細(xì)胞光散均保持不變。

2 臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用

2.1 細(xì)胞免疫功能監(jiān)測(cè) 流式細(xì)胞術(shù)在臨床上，其實(shí)質(zhì)就是為臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的提供了一種對(duì)細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)的便捷方法。崔曉鳴等[11,12]研究中提到，主要的操作過(guò)程為對(duì)淋巴細(xì)胞膜表面使用熒光抗原以及抗體檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行抗原、各亞群等進(jìn)行檢測(cè)分析，并對(duì)淋巴細(xì)胞的各亞群百分比進(jìn)行計(jì)算，進(jìn)而評(píng)估人體細(xì)胞的免疫情況。尤其是對(duì)一些由于病毒性感染的疾病的預(yù)防、治療和預(yù)后有著極重要的意義。

2.2 白血病免疫分型 多數(shù)正常的血細(xì)胞是由干細(xì)胞進(jìn)行分化、發(fā)育以及成熟變?yōu)楣δ芗?xì)胞的一個(gè)過(guò)程中出現(xiàn)細(xì)胞膜或是胞核抗原，其變化主要與血細(xì)胞的分化發(fā)育的各階段有著極密切的關(guān)系，且與細(xì)胞系列的分化程度有著明顯的相關(guān)特異性。也正是因此，這些血細(xì)胞的鑒別和分類的基礎(chǔ)主要為抗原的表達(dá)。

3 總結(jié)

流式細(xì)胞術(shù)近幾年被越來(lái)越擴(kuò)大應(yīng)用范圍，尤其是在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用頻率逐漸增加，例如通過(guò)對(duì)DNA含量的檢測(cè)對(duì)腫瘤進(jìn)行診斷等，包括對(duì)白血病免疫分型分析，且流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)方法具有分辨率較高、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性高以及速度快等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為推動(dòng)醫(yī)學(xué)快速發(fā)展的新興技術(shù)之一。

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Advances in the application of flow cytometry in medical examination

Jianhong WANG
Traditional Chinese Medicine Hospital of Weifang,Weifang 261000,China

In recent years,with the development of medical technology,the research technology of cell has been progressing continuously.Flow cytometry is a new technology which has been gradually applied in recent years,mainly for the rapid quantitative and qualitative analysis of single-cell,which not only has important significance for scientific research,but also has a great influence on clinical examination.This article is the research progress of the application of the convection cell operation,in order to provide reference for the development and application of flow cytometry.

Flow cytometry; Medical examination; Applied research; Development history