乳與乳制品中硫氰酸鹽的測(cè)定

胡利敏 趙翠琴 柴艷兵 張耀廣 李 飛 石家莊君樂(lè)寶乳業(yè)有限公司

本文利用紫外分光光度法測(cè)定乳與乳制品中硫氰酸鈉的質(zhì)量濃度。樣品經(jīng)沉淀過(guò)濾后，硫氰酸根遇鐵鹽反應(yīng)生成血紅色的硫氰酸鐵，在450 nm下測(cè)其吸光值，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。本方法的線性范圍為0.00～10 mg/kg，相關(guān)系數(shù)R=0.999 817，鮮奶的檢出限為1.00 mg/kg，奶粉的檢出限為2.00 mg/kg，回收率為90.76%～104.59%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.199%～0.366%。該方法具有操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)，對(duì)乳與乳制品中硫氰酸鹽的控制具有重要意義，適合在大中小企業(yè)推廣。

紫外分光光度計(jì)；硫氰酸鈉；乳；乳制品

硫氰酸鹽是硫氰酸根離子SCN-形成的鹽，天然存在于各類食品（包括乳）中[1]，其毒性主要來(lái)自體內(nèi)釋放的氰根離子。在原料乳或乳制品中摻入硫氰酸鈉后可有效抑菌、保鮮，是不法奶戶的摻假物質(zhì)之一，即使少量食入也會(huì)對(duì)人體造成極大傷害。2008年12月，國(guó)家衛(wèi)生部發(fā)布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑品種名單（第一批）》中明確規(guī)定乳及乳制品中的硫氰酸鈉屬于違法添加物。

常見的硫氰酸鹽檢測(cè)方法有分光光度法[2]、電位滴定法[3]、動(dòng)力學(xué)光度法[4]、化學(xué)滴定顯色法[5]、毛細(xì)管電泳法[6]和高效液相色譜法等。衛(wèi)生部食品整治辦[2009]29號(hào)文件《關(guān)于全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項(xiàng)整治》中規(guī)定，牛奶中的硫氰酸鈉檢驗(yàn)方法為離子色譜法。但該方法檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，且離子色譜儀尚未普及，無(wú)法在部分中小型企業(yè)推廣使用。本文采用紫外分光光度法，簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好，可在各大中小乳制品企業(yè)推廣。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 原理

樣品經(jīng)60 ℃水浴后離心沉淀去除蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì)，濾液經(jīng)硝酸酸化后，加入硫酸鐵銨溶液進(jìn)行顯色，濾液中的硫氰酸根遇鐵鹽反應(yīng)生成血紅色的硫氰酸鐵，利用紫外分光光度計(jì)在450 nm下測(cè)其吸收值，從而測(cè)定樣品中含有硫氰酸根的含量。

1.2 試劑

除另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682-2008規(guī)定的一級(jí)水。

三氯乙酸溶液（200 g/L）：精確稱取20.00 g三氯乙酸，以蒸餾水或純凈水溶解定容至100 mL，2～8 ℃保存，保存時(shí)間不得超過(guò)2個(gè)月。

硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 mg/ L）：精確稱取硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.139 7 g（以純度為99.99%的標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算）或稱取純度≥98.5%的分析純硫氰酸鈉0.141 8 g，以蒸餾水或純凈水溶解至100 mL，2～8 ℃保存，保存時(shí)間不得超過(guò)2個(gè)月。

硫酸鐵銨溶液（160 g/L）：精確稱取硫酸鐵銨16.00 g，加入蒸餾水80 mL溶解后加濃硫酸1 mL，再加水定容至100 mL，該溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配。

過(guò)氧化氫溶液（1 mL/100 mL）：移取1 mL30%過(guò)氧化氫并用水定容至100 mL，該溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配。

硝酸為優(yōu)級(jí)純。

1.3 儀器

紫外-可見分光光度計(jì)，分析天平，高速離心機(jī)。

1.4 方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別吸取0.00、0.02、0.04、0.06、0.08 mL和0.10 mL硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL刻度試管中，加入5 mL滅菌乳、0.1 mL過(guò)氧化氫溶液，并用三氯乙酸（200 g/L）溶液定容至10 mL，充分振搖使樣品分散完全。此系列液即為濃度為0.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mg/L和10.00 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列液。將此標(biāo)準(zhǔn)系列液放置于60 ℃水浴鍋中水浴10 min。轉(zhuǎn)移至離心管，7 000 r/ min離心10 min。

分別移取標(biāo)準(zhǔn)系列液上清液4 mL，加入0.5 mL硝酸和0.5 mL 160 g/L硫酸鐵銨溶液，搖勻后在450 nm下，以零管作為參比測(cè)定吸光度。以測(cè)出的吸光度對(duì)硫氰酸根濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。一次曲線，截距不設(shè)置為零，R2≥0.995。

1.4.2 樣品處理

精確稱取2.00 g奶粉或5.00 g液態(tài)奶于10 mL刻度具塞試管中，加入1 mL/100 mL過(guò)氧化氫溶液0.1 mL，用200 g/L三氯乙酸溶液定容至刻度，充分震搖使樣品分散完全，并于60 ℃水浴放置10 min。轉(zhuǎn)移到離心管中，離心沉淀。移取4 mL上清液，加入0.5 mL硝酸和0.5 mL 160 g/L硫酸鐵銨溶液，搖勻后在450 nm下測(cè)定吸光值。取一樣品以相同方法處理，加入0.5 mL硝酸，不加入顯色劑作為樣品空白。以測(cè)出的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品溶液中的硫氰酸根的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性

由表1數(shù)據(jù)可知，樣品中硫氰酸鈉的濃度在0～10 mg/kg內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線成線性范圍，硫氰酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為A=0.020 53C+0.130 88，相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 817。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 檢出限

按國(guó)際理論與應(yīng)用化學(xué)家聯(lián)合（IUPAC）規(guī)定。儀器達(dá)到穩(wěn)定后對(duì)空白溶液進(jìn)行n次（n≥20）測(cè)量，根據(jù)L=Ks/b計(jì)算，液態(tài)奶（包括滅菌乳、調(diào)制乳、發(fā)酵乳、生乳等）中硫氰酸鈉檢出限為1.00 mg/kg，乳粉（包括全脂乳粉、脫脂乳粉、乳清粉等）中硫氰酸鈉檢出限為2.00 mg/kg。

2.3精密度

對(duì)三個(gè)濃度的位置樣品分別重復(fù)測(cè)定8次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表2。由表2數(shù)據(jù)得出，硫氰酸鈉精密度在0.199%～0.367%。

表2 精密度試驗(yàn)（n=2×10）

2.4 方法回收率

選用滅菌乳、花色奶、發(fā)酵乳為本底分別配制5個(gè)不同濃度的加標(biāo)樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)數(shù)據(jù)見表3。

表3 方法適用性及加標(biāo)回收率

由表3數(shù)據(jù)得出，滅菌乳中硫氰酸鈉加標(biāo)回收率為90.76%～100.47%，調(diào)制乳中硫氰酸鈉加標(biāo)回收率為92.31%～101.01%，發(fā)酵乳中硫氰酸鈉加標(biāo)回收率為93.60%～104.59%?？傮w硫氰酸鈉加標(biāo)回收率在90.76%～104.59%。

2.5 驗(yàn)證顯色劑對(duì)樣品的影響程度

按表4設(shè)計(jì)驗(yàn)證顯色劑本身顏色是否對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響，檢測(cè)結(jié)果見表4，由表4數(shù)據(jù)得出，選取硫酸鐵銨作為顯色劑，對(duì)檢測(cè)結(jié)果不造成影響。

表4 顯色劑對(duì)樣品干擾試驗(yàn)

3 小結(jié)

衛(wèi)生部在食品安全方面的工作力度逐年加大，2008年12月12日發(fā)布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和和易濫用的食品添加劑品種名單（第一批）》中明確規(guī)定，乳及乳制品中硫氰酸鈉屬于違法添加物質(zhì)。為確保食品安全，迫切需要一種簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確的方法對(duì)乳與乳制品中硫氰酸鈉的進(jìn)行測(cè)定。本方法以硫酸亞鐵為顯色劑，采用紫外分光光度計(jì)法測(cè)定乳與乳制品中硫氰酸鈉的含量。硫氰酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.999 817，方法檢出限為液態(tài)奶（包括滅菌乳、調(diào)制乳、發(fā)酵乳、生乳等）中硫氰酸鈉檢出限為1.00 mg/kg，乳粉（包括全脂乳粉、脫脂乳粉、乳清粉等）中硫氰酸鈉檢出限為2.00 mg/kg，精密度為0.199%～0.366%，加標(biāo)回收率在90.76%～104.59%。加標(biāo)回收率、方法檢出限、精密度等均符合食品理化檢測(cè)[7]相關(guān)要求。通過(guò)樣品加標(biāo)回收率、檢出限及精密度檢測(cè)說(shuō)明，本法準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，且紫外分光光度計(jì)成本低，維護(hù)方便，便于在小型乳制品企業(yè)中推廣使用。

[1]顧欣,黃土新,李丹妮,等.乳中硫氰酸鹽對(duì)人類健康的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J].中國(guó)獸藥雜志，2010，44(9):45-49，52.

[2]王丹慧,高娃,李梅.原料乳中硫氰酸鈉摻假定性檢測(cè)方法[J].中國(guó)乳品工業(yè),2008(7):57-58.

[3]曾云龍,唐春然.直接電位法測(cè)定工業(yè)廢水中硫氰酸根的研究[J].分析測(cè)試實(shí)驗(yàn)室,2001,20(3):66-68.

[4]江海山,李飛.動(dòng)力學(xué)分光光度法測(cè)定痕量硫氰酸根的研究[J].高等化學(xué)學(xué)報(bào),1999,20(1):47-49.

[5]王丹慧,高娃,李梅.中國(guó)乳品工業(yè),2008,36(7):57-58.

[6]吳劍平,顧欣,李丹妮,等.毛細(xì)管電泳法檢測(cè)牛奶中硫氰酸鈉質(zhì)量濃度[J].中國(guó)乳品工業(yè),2012(3):53-56.

[7]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)(GB/T 27404-2008)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.