同時測定保健食品中煙酸、煙酰胺、咖啡因、維生素B1和維生素B6檢測方法

2017-01-09 13:38

食品安全導(dǎo)刊 2016年30期

李明劉向前張玉華麗江市食品藥品檢驗所

在現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.197-2003的基礎(chǔ)上，優(yōu)化一種合理、快速的基于高效液相色譜分離，能同時測定煙酸、煙酰胺、咖啡因、維生素B1和維生素B65種成份的方法。探討流動相、色譜柱、檢測波長、穩(wěn)定性等對上述5種成份分離的影響。結(jié)果顯示，該方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性非常好，R大于0.999 99，RSD為1.1%～1.5%，樣品加標(biāo)回收率為98.5%～103.2%?？捎糜跓熕?、煙酰胺、咖啡因、維生素B1和維生素B65種成份的同時檢測，本法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、快捷高效等特點。

食品；煙酸；煙酰胺；咖啡因；維生素B1；維生素B6；高效液相色譜法

現(xiàn)代生活中，煙酸、煙酰胺、咖啡因、維生素B1（鹽酸硫胺素）和維生素B6（鹽酸吡哆醇）已成為人們補(bǔ)充維生素類產(chǎn)品中必不可少的東西，它們具有協(xié)同作用，調(diào)節(jié)新陳代謝，維持皮膚和肌肉的健康，增進(jìn)免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)功能，促進(jìn)細(xì)胞生長和分裂（包括促進(jìn)紅血球的產(chǎn)生，預(yù)防貧血發(fā)生）。隨著人們保健意識不斷提高，市場上含以上5種成份的品種繁多，如何控制好5種成份的含量已成為目前的關(guān)注點，含量過高或過低都對身體無好處，為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，有必要建立簡單、快速、高效的檢測方法，目前測定以上5種成份的標(biāo)準(zhǔn)是GB/T 5009.197-2003，此標(biāo)準(zhǔn)中流動相、色譜柱、檢測波長等方面均存在一定的問題，導(dǎo)致樣品的回收率偏低、出具的數(shù)據(jù)也不準(zhǔn)確，無法滿足目前的測定需求，筆者在實際操作中經(jīng)反復(fù)實驗，對此方法進(jìn)行改進(jìn)，實驗結(jié)果較滿意。

1 儀器與試劑

Agilent 1200液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器，美國；LabTech EV311旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，北京萊伯科技有限公司；賽多利斯BT224S電子天平，德國。

甲醇、乙腈（HPLC級，F(xiàn)isher scientific）、辛烷磺酸鈉（B8）為色譜純，磷酸為分析純，煙酸對照品，煙酰胺對照品，咖啡因?qū)φ掌?，維生素B1對照品，維生素B6對照品。

實驗室用水均為銳思捷（ELGA）超純水系統(tǒng)制備的超純水。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Zorbax-C18，3.5 μm，150 mm×4.6 mm；流速：1.0 mL/ min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測波長：煙酸、煙酰胺、咖啡因、維生素B1260 nm，維生素B6280 nm；流動相：溶劑A，0.1%的B8水溶液+磷酸，500 mL+0.5 mL；溶劑B，乙腈；提取液：甲醇-水-磷酸（100 mL+400 mL+0.5 mL）。

雙波長條件和梯度條件見表1、表2。

表1 雙波長條件

表2 梯度條件

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲備液A：準(zhǔn)確稱量已扣除水分的煙酸、煙酰胺和咖啡因?qū)φ掌?6 mg于10 mL容量瓶中，加提取液稀釋并定容至刻度。再精密量取1 mL于20 mL容量瓶中，用提取液稀釋并定容至刻度。

標(biāo)準(zhǔn)儲備液B：準(zhǔn)確稱量已扣除水分的維生素B610 mg于10 mL容量瓶中，加提取液稀釋并定容至刻度。再精密量取1 mL于20 mL容量瓶中，用提取液稀釋并定容至刻度。

標(biāo)準(zhǔn)儲備液C：準(zhǔn)確稱量已扣除水分的維生素B623.2 mg于100 mL容量瓶中，用提取液定容，再精密量取1 mL于20 mL容量瓶中，用提取液稀釋并定容至刻度。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)貯備液A、B、C，1.0、2.0、4.0、6.0mL和8.0mL分別置20 mL的容量瓶中，用提取液稀釋并定容至刻度，搖勻備用。

2.3 樣品前處理

精密稱取樣品（千林B族維生素片）1.00 g于10 mL容量瓶中，加提取液定容，超聲提取5 min后，取上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后待進(jìn)樣。

3 結(jié)果與討論

3.1 流動相的選擇

GB/T 5009.197-2003采用兩種離子對試劑（硫酸月桂酸酯鈉和1-葵烷磺酸鈉），分兩次測定維生素B1和其余4種物質(zhì)，兩種試劑價格較貴，用量少，市場不易購得，且5種物質(zhì)用兩套流動相分兩次完成測定，不夠方便快捷[1]。

已有文獻(xiàn)報道同時測定功能性食用品中B族維生素的方法，如特殊鍵合色譜柱[2]，緩沖鹽體系在C+柱上測定[3]，離子色譜對試劑和C18柱，反向離子對色譜法同時測定維生素B1和B6等[4-6]。三聚氰胺測定中用到色譜級B8，各實驗室易得。本方法選用疏水鏈長度與癸烷磺酸鈉接近的B8作為離子對試劑，經(jīng)優(yōu)化條件，得到滿意的結(jié)果，且色譜柱在試驗前后未見性能下降跡象[1]。

與國家標(biāo)準(zhǔn)方法相比，B8離子對試劑便宜易得，流動相系統(tǒng)簡單，一次分析即可完成測定，且單次分析時間大大縮短，國家標(biāo)準(zhǔn)方法需做兩次，分別為20 min和55 min，本文方法只需單次15 min。

3.2 色譜柱的選擇

通過用粒徑5 μm的C18柱和3.5 μm的C18柱，按上述色譜條件分別試驗，如圖1所示，粒徑為3.5 μm的C18柱分析結(jié)果更佳，因此選擇用粒徑3.5 μm的C18柱進(jìn)行分析。

3.3 檢測波長的選擇

分別對5種測定成分進(jìn)行紫外吸收光譜分析，根據(jù)定量時應(yīng)盡可能選擇最大波長進(jìn)行測定的原則，本文方法選擇鹽酸硫胺素、咖啡因、煙酸、煙酰胺的波長為260 nm，鹽酸吡哆醇的波長為280 nm。

3.4 線性范圍和檢出限

用國家標(biāo)準(zhǔn)方法對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列和樣品溶液，按照所述的色譜條件進(jìn)行測定，如圖3、5所示，以所得峰面積對質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸，得到煙酸、煙酰胺、咖啡因、維生素B1和維生素B65種成份的線性回歸方程，見表2。結(jié)果表明，5種成份在0.58～32.4 μg/mL內(nèi)，按國家標(biāo)準(zhǔn)方法得到的線性關(guān)系一般，相關(guān)系數(shù)R大于0.992，煙酸、煙酰胺、咖啡因、維生素B1和維生素B65種成份的檢出限為0.01～0.15 μg/mL，定量限為0.030～0.451 μg/mL；按本文方法對混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列和樣品溶液進(jìn)行測定，如圖4、6所示，得到的線性關(guān)系非常好，相關(guān)系數(shù)R大于0.999 99 ，煙酸、煙酰胺、咖啡因、維生素B1和維生素B65種成份的檢出限為0.000 47～0.005 20 μg/mL，定量限為0.001 41～0.01 56 μg/mL。

3.5 回收率與精密度

在本文色譜分離條件下，對已經(jīng)過預(yù)先處理的食品進(jìn)行分析測定，實驗結(jié)果見表3和表4。