李曉霞，楊開山，車小蛟，張登基

（1.甘肅省金昌市金川區(qū)動物疫病預防控制中心，金昌 737100；2.甘肅省動物疫病預防控制中心，蘭州 730046）

金昌市金川區(qū)小反芻獸疫免疫效果檢測與分析

李曉霞1，楊開山1，車小蛟2，張登基2

（1.甘肅省金昌市金川區(qū)動物疫病預防控制中心，金昌 737100；2.甘肅省動物疫病預防控制中心，蘭州 730046）

為掌握甘肅省金昌市金川區(qū)小反芻獸疫的實際免疫效果，為科學防控小反芻獸疫疫情提供可靠依據(jù)，對金川區(qū)寧遠堡和雙灣免疫規(guī)模羊場（戶）和散養(yǎng)戶羊進行免疫注射小反芻獸疫活疫苗，分別于免疫后21 d和1年，采用C-ELISA對采集的羊只血清樣品進行抗體水平檢測。結果顯示：免疫后21 d和1年后免疫抗體平均合格率分別為94.53%和79.20%，表明金川區(qū)的小反芻獸疫免疫羊在免疫后21 d和1年后免疫合格率均可達到國家規(guī)定的70%的標準。

小反芻獸疫；C-ELISA；免疫效果；抗體檢測

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）是由小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的綿羊、山羊等小反芻動物急性、熱性、高度接觸性傳染病，臨床上以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征［1］，山羊和綿羊易感，山羊發(fā)病率和病死率均較高，嚴重爆發(fā)時，本病的發(fā)病率高達100%，羔羊感染時病死率可達100%。PPR主要通過直接接觸傳染，患病動物的排泄物和分泌物是主要傳染源，尤其是感染后帶毒的羊更為危險。該病常呈現(xiàn)地方流行性，當易感動物增多時，可造成爆發(fā)流行［2］。

該病作為一種重大跨國界動物傳播疫病，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。該病自1942年在非洲西部的象牙海岸首次報道以來，10年內(nèi)小反芻獸疫幾乎遍及了從撒哈拉沙漠到赤道的所有國家。該病于1987年在印度首發(fā)，然后蔓延到印度許多地區(qū)，此后一直嚴重危脅我國畜牧經(jīng)濟和動物衛(wèi)生安全。我國在2007年首次在西藏自治區(qū)阿里日土縣和革吉縣發(fā)現(xiàn)該病以來，先后在新疆、甘肅、貴州、湖南以及黑龍江等21個省、自治區(qū)、直轄市發(fā)生，給當?shù)仞B(yǎng)羊業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失。目前，小反芻獸疫尚無有效治療措施，注射疫苗是目前預防該病最有效的方法［3-5］。甘肅省自古浪縣發(fā)生小反芻獸疫疫情以來，全省對14個市州重點區(qū)域的羊只進行免疫接種，構建免疫屏障。為監(jiān)測甘肅省金昌市金川區(qū)羊注射小反芻獸疫疫苗后抗體應答水平，評估防控效果，為今后制定防控措施提供科學依據(jù)，本研究特開展了免疫效果檢測與分析。

1 材料與方法

1.1 疫苗和檢測試劑

小反芻獸疫活疫苗由新疆天康畜牧生物技術股份有限公司生產(chǎn)，批號為2014015；檢測試劑為中國動物衛(wèi)生與流行病學中心（青島）提供的小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，批號為201428，201517。

1.2 被檢血清

2015年4月和2016年4月分別采集金昌市金川區(qū)寧遠堡鄉(xiāng)和雙灣鄉(xiāng)小反芻獸疫活疫苗免疫后21 d和1年的規(guī)模羊場（戶）和散養(yǎng)戶羊血樣896份和572份，離心分離血清，編號，-20℃保存待檢。

1.3 儀器

單道移液器、多道移液器、生化培養(yǎng)箱、洗板機（COLUMBUS）、酶標儀（TecanSunrise）、普通離心機、一次性移液器吸頭等。

1.4 檢測方法

向酶標板陽性對照孔加入陽性血清50 μL；陰性對照孔加入陰性血清50 μL；酶標單抗對照孔加入稀釋液50μL；樣品孔每孔加入稀釋液25μL，加入待檢血清25μL。37℃生化培養(yǎng)箱孵育60 min。棄去反應孔的液體，用洗滌液洗4次，每次每孔加洗滌液300 μL。每孔加入酶標單抗50 μL，37℃孵育30 min，用洗滌液洗4次。每孔加入底物溶液50 μL，室溫避光作用10～15 min。最后，每孔加入終止液50 μL，終止反應。用酶標儀在450 nm波長下測定各孔OD450值，計算阻斷率。

1.5 判定標準

陽性對照阻斷率（PB）＞60，陰性對照阻斷率（PB）＜40，則試驗結果有效，否則，應重新進行試驗。待檢樣品阻斷率（PB）＞50，判為陽性；待檢樣品阻斷率（PB）≤50，判為陰性。

2 結果

對在金昌市金川區(qū)寧遠堡和雙灣分別于免疫后21 d和免疫后1年采集的羊血清樣品進行小反芻獸疫免疫抗體檢測，免疫抗體合格血清分別為847份和453份，平均合格率分別為94.53%和79.20%，詳見表1、表2。

表1 2015年金川區(qū)小反芻獸疫抗體檢測結果（免疫后21 d）

表2 2016年金川區(qū)小反芻獸疫抗體檢測結果（免疫后1年）

3 討論

小反芻獸疫又稱羊瘟，是由小反芻獸疫病毒引起的山羊和綿羊的急性、接觸性病毒傳染病，臨床上以高熱、口炎、眼和鼻分泌物、腹瀉與肺炎為主要特征，該病嚴重威脅畜牧業(yè)的發(fā)展，特別是養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展和食品安全。據(jù)農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局公布的疫情數(shù)據(jù)顯示，自2013年以來，我國新疆、甘肅、內(nèi)蒙古等20多個省、市、自治區(qū)先后爆發(fā)該病，在新發(fā)疫點內(nèi)，易感羊群的發(fā)病率和死亡率均很高，該病已造成巨大的經(jīng)濟損失，嚴重影響我國養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展，目前小反芻獸疫的防控形勢非常嚴峻［6-7］。

2014年1月22日，甘肅省武威市古浪縣發(fā)生一起羊小反芻獸疫疫情，古浪縣黃花灘鄉(xiāng)黃花灘村部分養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的羊出現(xiàn)疑似小反芻獸疫癥狀，發(fā)病羊951只，死亡133只。2014年1月24日，經(jīng)國家外來動物疫病研究中心確診，該起疫情為小反芻獸疫疫情［8］。

為切實做好小反芻獸疫消滅工作，有效保障養(yǎng)羊業(yè)穩(wěn)定健康發(fā)展，甘肅省金昌市金川區(qū)對羊只進行了PPR疫苗強制性免疫，并在免疫接種21 d和1年后，分別采集血樣896份和572份進行抗體檢測。結果表明，免疫后21 d和免疫后1年的免疫抗體合格血清分別為847份和453份，平均合格率分別為94.53%和79.20%，本次使用新疆天康畜牧生物技術股份有限公司的PPR活疫苗對本轄區(qū)內(nèi)的各種健康羊只進行免疫接種，接種后未見PPR新病例和不良接種反應，表明PPR活疫苗的副作用小，安全可靠。

免疫后21 d，免疫羊群的整體合格率達到94%以上，免疫后1年整體合格率保持在將近80%，整體免疫效果超過了農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局提出抗體合格率不低于70%的要求。從數(shù)據(jù)上來看，金川區(qū)小反芻獸疫免疫效果整體較好，在預防和控制PPR的流行中發(fā)揮了重要作用。由此可見，本研究采取的防控措施是有效的。

當前，對小反芻獸疫尚無有效的治療措施，疫苗免疫是最為有效的手段之一。在防疫工作中，要嚴格按照本地區(qū)動物疫病流行情況制定科學有效的免疫方案，切實做好小反芻獸疫的免疫工作，及時開展抗體檢測，認真做好補免工作，確保有效保護。大量研究表明，許多野生偶蹄動物亦是小反芻獸疫疫病的帶毒者和易感動物，因此，應嚴密監(jiān)控易感野生動物的活動，加大在野生小反芻獸群的遷移路線周圍及野生小反芻獸群活動區(qū)域羊只的監(jiān)測和免疫，防止帶毒野生動物向家養(yǎng)畜傳播，做好相關工作。雖然疫苗免疫可以有效預防和控制小反芻獸疫，但PPR疫苗存在毒力返祖的風險，這些都不利于我國PPR長期防控，其他流行該病的國家的實踐也證明了這一點，因此，不能盲目采取大規(guī)模強制免疫該病，要嚴格區(qū)分疫區(qū)和非疫區(qū)，對疫區(qū)采取嚴格的處置措施。一旦確診，應迅速采取嚴格的封鎖、撲殺、隔離檢疫等措施，對病死畜尸體進行無害化處理，徹底對污染區(qū)進行清潔消毒［9-11］。

［1］ 駱學農(nóng)，鄭亞東，才學鵬.小反芻獸疫的研究進展［J］.中國獸醫(yī)科學，2007，37（11）：994-999.

［2］ 陳發(fā)喜，孫愛紅，蔡擴軍，等.小反芻獸疫研究概況［J］.草食家畜，2014（5）：54-59.

［3］ 翁善鋼.小反芻獸疫的流行、診斷與防控［J］.中國草食動物科學，2012，32（6）：48-51.

［4］ 李佳，何宗霖，白正輝，等.新疆阿克蘇地區(qū)羊小反芻獸疫免疫效果檢測與分析［J］.草食家畜，2015（4）：49-51.

［5］ 祁巧芬.小反芻獸疫免疫效果監(jiān)測報告［J］.當代畜牧，2015（6）：29-18.

［6］ 何利昆，段亞良，谷志大.遼寧省小反芻獸疫疫苗臨床免疫效果跟蹤試驗及抗體水平動態(tài)觀察［J］.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2014（8）：14-18.

［7］ 李彥芳，玉蘇甫，溫倩木，等.小反芻獸疫疫苗免疫效果評價［J］.中國畜牧業(yè)，2014（12）：62-63.

［8］ 韓慶彥，李勇生，孟林明，等.綿羊小反芻獸疫的診斷［J］.中國草食動物科學，2014，34（3）：45-47.

［9］ 王凡，智曉瑩，董金杰，等.小反芻獸疫疫苗研究進展［J］.中國草食動物科學，2014，34（3）：58-61.

［10］谷修萍，楊翠紅，高代宏.小反芻獸疫流行特點及其防控策略［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2014（12）：87.

［11］石永杰.淺析小反芻獸疫的診斷與防控［J］.河南畜牧獸醫(yī)，2014，35（9）：25-26.

S858.26

B

2095-3887（2016）05-0071-02

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.05.021

2016-08-02

甘肅省農(nóng)業(yè)生物技術研究與應用開發(fā)項目（GNSW-2013-26）

李曉霞（1974-），女，畜牧師，主要從事動物疫病防控與技術推廣工作。通訊作者：張登基（1979-），男，高級獸醫(yī)師，主要從事動物疫病預防控制工作。