姜建國，孫 婷，郭永輝，韓學(xué)靜，苗會(huì)娟（河北省藥品檢驗(yàn)研究院，石家莊 050011）

頂空氣相色譜法同時(shí)測定比沙可啶原料藥中2種溶劑殘留量

姜建國＊，孫 婷，郭永輝，韓學(xué)靜，苗會(huì)娟（河北省藥品檢驗(yàn)研究院，石家莊 050011）

目的：建立同時(shí)測定比沙可啶原料藥中二氯甲烷和乙酸乙酯殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細(xì)管柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度為220℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，溫度為250℃，載氣為高純氮?dú)猓d氣流速為3.0 ml/min，分流比為1∶10，頂空加熱溫度為70℃，平衡時(shí)間為30 min，頂空瓶裝樣量為5 ml，頂空進(jìn)樣量為1 ml。結(jié)果：二氯甲烷和乙酸乙酯檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為6～120 μg/ml（r=0.999 9）、50～1 000 μg/ml（r=0.999 9）；定量限分別為0.2、1.7 μg，檢測限分別為0.06、0.5 μg；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD≤3%；加樣回收率分別為100.30%～102.00%（RSD=0.63%，n=9）、100.10%～101.30%（RSD=0.44%，n=9）。結(jié)論：該方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于同時(shí)測定比沙可啶原料藥中二氯甲烷和乙酸乙酯的殘留量。

比沙可啶；頂空氣相色譜法；溶劑殘留量；二氯甲烷；乙酸乙酯

比沙可啶，是德國20世紀(jì)50年代末上市且目前仍在臨床上廣泛使用的接觸性緩瀉劑［1-3］。在該原料藥的合成過程中，使用了二氯甲烷和乙酸乙酯［4］，其中乙酸乙酯殘留可導(dǎo)致患者惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、倦睡、昏迷甚至死亡等；二氯甲烷屬于二類殘留溶劑且具有一定的毒性。該原料藥收載于2015年版《中國藥典》（二部）［5］，但該標(biāo)準(zhǔn)并未對(duì)二氯甲烷和乙酸乙酯的殘留量作具體要求；且目前尚未見測定比沙可啶原料藥中有機(jī)溶劑殘留量的報(bào)道。因此，為保證藥品質(zhì)量和用藥安全，筆者采用頂空氣相色譜法同時(shí)測定比沙可啶原料藥中二氯甲烷和乙酸乙酯的含量。

1 材料

1.1 儀器

Trace1310型氣相色譜儀，包括TriPlusRSH型自動(dòng)頂空進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測器（FID）和CHROMLETEON 6色譜工作站（美國Thermo Fisher Scientific公司）；XS105型十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；MCM36型百萬分之一電子分析天平（德國Sartorius公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：200 W，頻率：40 kHz）；GWA-UN2-C30型超純水器（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 藥品與試劑

比沙可啶原料藥（A公司，編號(hào)：201301A；B公司，編號(hào)：201302B）；二氯甲烷對(duì)照品（批號(hào)：M1550000，純度：98%）、乙酸乙酯對(duì)照品（批號(hào)：209-686-8，純度：99%）均購自美國藥典委員會(huì)；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細(xì)管柱（30.00 m×0.32 mm，1.80 μm）；程序升溫：初始溫度40℃，保持9 min，以40℃/min升溫至200℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度：220℃；檢測器：FID；溫度：250℃；載氣：高純氮?dú)猓惠d氣流速：3.0 ml/min；分流比：1∶10；頂空加熱溫度：70℃；平衡時(shí)間：30 min；頂空瓶裝樣量：5 ml；頂空進(jìn)樣量：1 ml。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取二氯甲烷、乙酸乙酯對(duì)照品各300、2 500 mg，置于同一50 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，作為混合對(duì)照品貯備液。取上述混合對(duì)照品貯備液適量，置于50 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，制得二氯甲烷的質(zhì)量濃度為60 μg/ml、乙酸乙酯的質(zhì)量濃度為500 μg/ml的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品適量，精密稱定，置于50 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，即得。

2.2.3 空白對(duì)照溶液 取DMF作為空白對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白對(duì)照溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞2.0；理論板數(shù)以乙酸乙酯峰計(jì)為10 000，保留時(shí)間為13.5 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖A.空白對(duì)照；B.混合對(duì)照品；C.供試品；1.二氯甲烷；2.乙酸乙酯Fig 1 GC chromatogramsA.blank control；B.nixed reference substance；C.test sample；1.dichloromethane；2.thyl acetate

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以待測成分質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得二氯甲烷的回歸方程為y=0.036x+0.001（r= 0.999 9）、乙酸乙酯的回歸方程為y=0.855x－0.025（r= 0.999 9）。結(jié)果表明，二氯甲烷和乙酸乙酯檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為6～120、50～1 000 μg/ml。

2.5 定量限與檢測限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，等倍逐步稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得二氯甲烷和乙酸乙酯的定量限分別為0.2、1.7 μg；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得二氯甲烷和乙酸乙酯的檢測限分別為0.06、0.5 μg。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，二氯甲烷和乙酸乙酯峰面積的RSD分別為3.0%、2.6%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：201301A）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，二氯甲烷和乙酸乙酯峰面積的RSD分別為3%、2.3%（n=6），表明供試品溶液在室溫下10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（編號(hào)：201301A）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，二氯甲烷和乙酸乙酯峰面積的RSD分別為2.3%、2.1%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品（編號(hào)：201301A）適量，共9份，每份約500 mg，置于50 ml量瓶中，分別加入低、中、高質(zhì)量的二氯甲烷和乙酸乙酯對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab 1 Results of recovery tests（n=9）

2.10 樣品中殘留溶劑測定

取2批樣品各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算二氯甲烷和乙酸乙酯的殘留量。結(jié)果，2批樣品（編號(hào)：201301A、201302B）乙酸乙酯中的殘留量分別為0.2%、0.3%（n=3）；1批樣品（編號(hào)：201301A）二氯甲烷的殘留量為0.03%（n=3），而另外1批樣品則未檢出。

3 討論

3.1 氣相色譜方法的選擇

二氯甲烷和乙酸乙酯均為中、低沸點(diǎn)的有機(jī)揮發(fā)性溶劑［6-11］。頂空氣相色譜法的原理是通過加熱裝置將樣品中可揮發(fā)組分烘出收集，使用該方法測定時(shí)可避免揮發(fā)性成分的損失，又可降低提取物引起的噪聲；與液-液萃取和固相萃取相比，靈敏度更高、分析速度更快，可消除樣品基質(zhì)的潛在干擾。因此，本試驗(yàn)選擇頂空氣相色譜法進(jìn)行二氯甲烷和乙酸乙酯殘留量的測定。

3.2 提取溶劑的選擇

由于比沙可啶不溶于水［5］，且采用頂空氣相色譜法測定樣品時(shí)，一般使用二甲亞砜和DMF作為提取溶劑［12］。結(jié)果，二甲亞砜作為提取溶劑時(shí)，樣品在二甲亞砜中的溶解性較差且對(duì)其他峰干擾較大；DMF作為提取溶劑時(shí)，二氯甲烷和乙酸乙酯在DMF中的溶解性較好，且DMF沸點(diǎn)高，對(duì)其他峰的干擾較小。因此，筆者采用DMF作為本試驗(yàn)的提取溶劑。

綜上所述，本方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于同時(shí)測定比沙可啶原料藥中二氯甲烷和乙酸乙酯的殘留量。

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（編輯：劉 柳）

Simultaneous Residual Determination of Two Organic Solvents in Bisacodyl Raw Material by Head-space GC

JIANG Jianguo，SUN Ting，GUO Yonghui，HAN Xuejing，MIAO Huijuan（Hebei Institute for Drug Control，Shijiazhuang 050011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for simultaneous residual determination of dichloromethane and ethyl acetate in bisacodyl raw material.METHODS：Head-space GC was performed on the capillary column of 6%cyanopropyl phenyl-94%dimethyl polysiloxane（DB-624）by temperature programming，the temperature of injector was 220℃，detector was flame ionization detector with temperature of 250℃，carrier gas was high purity nitrogen with the flow rate of 3.0 ml/min，split ration was 1∶10，headspace heating temperature was 70℃，equilibration time was 30 min，volume of headspace vial was 5 ml，and the injection volume was 1 ml.RESULTS：The linear range was 6-120 μg/ml for dichloromethane（r=0.999 9）and 50-1 000 μg/ml for ethyl acetate（r=0.999 9）；the limit of quantitation was 0.2，1.7 μg，limit of detection was 0.06，0.5 μg；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were no higher than 3%；recoveries were 100.30%-102.00%（RSD=0.63%，n=9）and 100.10%-101.30%（RSD=0.44%，n=9）.CONCLUSIONS：The method is simple and accurate，and can be used for the simultaneous residual determination of dichloromethane and ethyl acetate in bisacodyl raw material.

Bisacodyl；Head-space GC；Residual determination；Dichloromethane；Ethyl acetate

R917

A

1001-0408（2016）30-4297-03

2016-01-11

2016-08-18）

＊主任藥師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0311-85212009。E-mail：122547652@qq.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.30.39