楊瓊梁，歐陽婷，楊仁義，張?zhí)曳?，呂琦，顏紅*（.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長沙4008；.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，湖南長沙4008）

市售不同產(chǎn)地辛夷中揮發(fā)油成分分析及木蘭脂素的含量測定

楊瓊梁1，歐陽婷1，楊仁義2，張?zhí)曳?，呂琦1，顏紅1*（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長沙410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，湖南長沙410208）

目的分析比較市售湖南、廣西兩個不同產(chǎn)地辛夷中揮發(fā)油的化學(xué)成分，并對其木蘭脂素的含量進(jìn)行測定。方法采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對湖南、廣西兩個產(chǎn)地的辛夷揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，采用HPLC對兩個產(chǎn)地辛夷中木蘭脂素含量進(jìn)行測定。結(jié)果湖南、廣西產(chǎn)地的辛夷揮發(fā)油分別分離鑒定出62和64種化合物，主要成分為桉油精、β-蒎烯、2-茨酮、香葉基芳樟醇、α-松油醇等。采用HPLC測定辛夷中木蘭脂素的含量，結(jié)果顯示，木蘭脂素在2～256 μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.999 96，n=6），平均加樣回收率為100.32%，RSD為0.04%（n=6）。木蘭脂素含量為：湖南產(chǎn)地（0.87±0.05）%、廣西產(chǎn)地（0.81±0.02）%。結(jié)論GC-MS法能快速、簡便、高效地檢測辛夷揮發(fā)油的化學(xué)成分，HPLC簡便可靠、重復(fù)性好，可用于辛夷中木蘭脂素的含量測定。

辛夷；GC-MS；HPLC；揮發(fā)油；木蘭脂素；含量測定

辛夷為木蘭科植物望春花Magnolia biondii Pamp.、玉蘭Magnolia denudata Desr.或武當(dāng)玉蘭Magnolia sprengeri Pamp.的干燥花蕾［1］，性溫，味辛，微苦，入肺、胃經(jīng)，具有疏風(fēng)散邪，上行頭目，善通鼻竅，專治鼻淵之功效，是中醫(yī)治療各類鼻炎的常用中藥。辛夷的主要有效成分為揮發(fā)油、木脂素類和黃酮類化合物［2］。現(xiàn)代研究表明［3］，辛夷中揮發(fā)油成分具有收縮鼻黏膜血管及抗組胺作用，主要成分木蘭脂素具有較好的抗炎、抗過敏作用［4］。本文采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對湖南、廣西兩個產(chǎn)地辛夷中揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，運用HPLC對辛夷的木蘭脂素含量進(jìn)行測定，旨在探討產(chǎn)地對辛夷揮發(fā)油成分及木蘭脂素含量的影響，以期為我國辛夷藥材的資源開發(fā)提供參考，為辛夷中藥制劑研發(fā)提供實驗依據(jù)。

1　材料

1.1藥材

辛夷，湖南產(chǎn)地（購自湖南津湘制藥有限公司，批號：20160101）；廣西產(chǎn)地（購自湖南省弘華中藥飲片有限公司，批號：150105），經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院劉塔斯教授鑒定為木蘭科植物望春花Magnolia biondii Pamp.的干燥花蕾。

1.2儀器

島津GC-MS-QP2010型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，GC-MS Solution色譜工作站，標(biāo)準(zhǔn)譜庫為美國NIST質(zhì)譜檢索數(shù)據(jù)庫；Waters高效液相色譜儀（Waters 2489檢測器），Breeze 2色譜工作站；YP601N電子天平（上海恒平科學(xué)儀器有限公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AR11401C型電子天平（奧豪斯國際貿(mào)易有限公司）；揮發(fā)油測定器（上海玻璃儀器廠）；HDM-3000電子調(diào)溫電熱套（金壇市榮華儀器制造有限公司）。

1.3試劑

木蘭脂素（批號：LI90P40，百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司）；無水硫酸鈉（江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司）；乙酸乙酯（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純；其他試劑為分析純；重蒸水（自制）。

2　方法

2.1辛夷揮發(fā)油成分分析

2.1.1供試品溶液的制備取粉粹后的辛夷藥材200 g，按《中華人民共和國藥典》2015版四部通則2204項下?lián)]發(fā)油提取甲法進(jìn)行提取，蒸餾5 h，收集揮發(fā)油，無水Na2SO4脫水，得淺黃色透明的揮發(fā)油，以乙酸乙酯為溶劑稀釋即得供試液。

2.1.2GC-MS條件色譜柱：Rxi-5Sil MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣He；分流比50∶1；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；進(jìn)樣口溫度230℃；柱溫60℃；升溫程序：起始溫度60℃，以10℃每分鐘升至280℃，保持5 min。質(zhì)譜條件：電離方式為EI，電離能量為70 eV，倍增電壓0.8 kV，掃描質(zhì)量范圍35 m/z～500 m/z，掃描間隔0.25 s，掃描速度2 000 amu/s。

采用美國NIST 11.lib和NIST 11s.lib標(biāo)準(zhǔn)譜庫進(jìn)行檢索，結(jié)合相似度和參考相關(guān)文獻(xiàn)［5-8］，對樣品成分進(jìn)行定性分析并根據(jù)峰面積歸一化法計算各成分的含量。

2.2辛夷木蘭脂素含量的測定

2.2.1對照品溶液和供試品溶液的制備對照品溶液：精密稱取木蘭脂素對照品0.010 4 g，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1.04 mg/mL的對照品溶液。

供試品溶液［1］：取辛夷粗粉約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯20 mL，稱定重量，浸泡30 min，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液3 mL，加在中性氧化鋁柱（100～200目，2 g，內(nèi)徑為9 mm，濕法裝柱，用乙酸乙酯5 mL預(yù)洗）上，用甲醇15 mL洗脫，收集洗脫液，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2色譜條件色譜柱：Hypersil ODS2 C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流動相：乙腈-水（33: 67）；流速1.0 mL/min；柱溫35℃；進(jìn)樣量6 μL；波長為278 nm；理論塔板數(shù)按木蘭脂素峰計算不低于9 000。

2.2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各6 μL，按“2.2.2”項色譜條件分析測定。

2.2.4線性關(guān)系的考察分別精密移取上述對照品溶液適量，以甲醇稀釋成濃度分別為2、16、32、64、128、256 μg/mL的對照品溶液。分別取上述對照品各6 μL進(jìn)樣，按“2.2.2”項下色譜條件測定。以峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)，對照品濃度值（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行回歸分析。

2.2.5精密度試驗精密吸取上述木蘭脂素對照品溶液，分別在“2.2.2”項下色譜條件下測定RSD值：（1）日內(nèi)RSD值：取上述對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次6 μL，計算對照品峰面積的RSD值；（2）日間RSD值：取上述對照品溶液，每天進(jìn)樣1次，連續(xù)6 d，計算對照品峰面積的RSD值。

2.2.6穩(wěn)定性試驗取待測同一批次辛夷供試品溶液，按“2.2.2”項下色譜條件進(jìn)行測定，分別在0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣，測定木蘭脂素的峰面積，計算供試品峰面積的RSD值。

2.2.7重復(fù)性試驗取待測同一批次辛夷粗粉約1.0 g，平行稱定6份，按供試品溶液制備項下方法處理，精密吸取供試品溶液6 μL，按“2.2.2”項下色譜條件分析測定，記錄峰面積，計算RSD值。

2.2.8加樣回收試驗精密稱取已知含量的辛夷粗粉6份，每份0.5 g，分別加入相同量的木蘭脂素對照品4.5 mg，按供試品溶液制備項下方法處理，按“2.2.2”項下色譜條件分析測定，記錄峰面積，計算平均回收率與RSD值。

2.2.9樣品測定取不同產(chǎn)地的辛夷，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.2”項下色譜條件進(jìn)樣分析測定，記錄峰面積，計算樣品中木蘭脂素的含量。

3　結(jié)果與分析

3.1辛夷揮發(fā)油的成分

分別對兩種不同產(chǎn)地辛夷的揮發(fā)油進(jìn)行了GC-MS分析，通過氣質(zhì)聯(lián)用給出質(zhì)譜數(shù)據(jù)和計算機(jī)檢索出的可能結(jié)構(gòu)，并查閱有關(guān)文獻(xiàn)資料與標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖進(jìn)行比較，共鑒定出81種化合物，GC-MS總離子流圖分別見圖1，化學(xué)成分及相對百分含量見表1。

由圖1可知，不同產(chǎn)地的辛夷在揮發(fā)油的成分組成與含量上均存在不同程度的差別。由表1可知，湖南、廣西辛夷的揮發(fā)油分別鑒定出62和64種成分，其中湖南產(chǎn)地主要成分為桉油精（11.31%）、香葉基芳樟醇（11.18%）、α-松油醇（5.23%）、τ-杜松醇（4.31%）、β-松油醇（20.00%）；廣西產(chǎn)地主要成分為桉油精（5.27%）、柑橘檸烯（14.56%）、香葉基芳樟醇（12.67%）、α-松油醇（6.56%）、β-蒎烯（5.61%）、α-水芹烯（5.35%）、（-）-4-萜品醇（4.39%）。上述結(jié)果與文獻(xiàn)報道的辛夷揮發(fā)油主要成分較一致，但成分種類及含量有差別，可能與采收季節(jié)、藥材貯存時間等因素有關(guān)。

圖1　兩種不同產(chǎn)地辛夷揮發(fā)油總離子流圖

3.2木蘭脂素的含量

3.2.1系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果見圖2。木蘭脂素與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，拖尾因子在1.0～1.1，理論塔板數(shù)以各色譜峰計均在9 000以上。

3.2.2方法學(xué)考察結(jié)果經(jīng)計算得到線性回歸方程y=3 139 x-2947.3（r=0.999 96）

結(jié)果表明木蘭脂素在2～256 μg/mL（n=6）進(jìn)樣濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。精密度結(jié)果表明，對照品峰面積的日內(nèi)RSD值為0.03%（n=6），日間RSD值為0.18%（n=6），表明精密度良好。同一批次辛夷供試品24 h內(nèi)峰面積RSD值為0.15%（n=6），表明木蘭脂素在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。重復(fù)性試驗結(jié)果表明，供試品RSD值為0.01%（n=6），表明該測定方法的重現(xiàn)性良好。經(jīng)計算平均回收率為100.32%，RSD值為0.04%（n=6），表明該測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3.2.3樣品含量測定經(jīng)測定，湖南、廣西產(chǎn)地辛夷中木蘭脂素的含量分別為（0.87±0.05）%、（0.81± 0.02）%（n=3）。由此可知，不同產(chǎn)地辛夷中的木蘭脂素含量有差異。

表1　不同產(chǎn)地辛夷揮發(fā)油成分分析

續(xù)表1

圖2　對照品與供試品HPLC圖譜

4　結(jié)論

藥材中揮發(fā)油成分穩(wěn)定性較差，易受采收季節(jié)、加工方法、貯藏等條件的影響［5］。本試驗結(jié)果表明，市售湖南、廣西兩種不同產(chǎn)地辛夷的揮發(fā)油成分組成、含量及木蘭脂素含量均存在不同程度的差異，湖南、廣西辛夷的揮發(fā)油分別鑒定出62和64種成分，揮發(fā)油的主要成分為單萜、倍半萜類及其含氧衍生物和脂肪族類化合物，如桉油精、β-蒎烯、2-茨酮、香葉基芳樟醇、α-松油醇等，與文獻(xiàn)資料報道基本一致［6-8］，但成分種類及含量有較大差別，除了產(chǎn)地的影響，可能與采收季節(jié)、藥材貯存時間等因素有關(guān)。木蘭脂素在2～256 μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.999 96，n=6），平均加樣回收率為100.32%，RSD為0.04%（n=6），本文建立的HPLC簡便可靠、重復(fù)性好，可用于辛夷中木蘭脂素的含量測定。兩個產(chǎn)地的木蘭脂素含量均達(dá)到《中華人民共和國藥典》2015版要求（按干燥品計算，辛夷粗粉中含木蘭脂素不得少于0.40%）。本實驗結(jié)果可為辛夷藥材的開發(fā)利用及相關(guān)制劑的研究提供實驗依據(jù)。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:182.

［2］馮衛(wèi)生，王建超，何玉環(huán)，等.辛夷化學(xué)成分的研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2015，50（24）:2103-2106.

［3］王永慧，葉方，張秀華.辛夷藥理作用和臨床應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9（16）:12-14.

［4］李小莉，張永忠.木蘭脂素抗炎，抗過敏作用的實驗研究［J］.中草藥，2002，33（11）:1014-1015.

［5］李佐軍，周玉婷，鄧雪姣，等.市售不同產(chǎn)地吳茱萸揮發(fā)油成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析［J］.時珍國醫(yī)國藥，2013，24（8）:1835-1837.

［6］齊天，楊光，胡志，等.加速溶劑萃取/氣相色譜-質(zhì)譜法分析辛夷中揮發(fā)油成分［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2014，30（2）:184-189.

［7］楊柳，劉建，李艷福，等.4種不同方法提取辛夷揮發(fā)油成分研究［J］.河南工程學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2016，28（1）:33-37.

［8］何娟，楊柳，李艷福，等.中藥材辛夷揮發(fā)油GC-MS指紋圖譜的建立［J］.分析測試學(xué)報，2008，27（4）:423-425，429.

（本文編輯蘇維）

《湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》2015年核心影響因子

據(jù)最新2016年版《中國科技期刊引證報告》（核心版）顯示：《湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》2015年核心影響因子0.425，核心他引率0.90，核心總被引頻次1139，核心影響因子比2014年提高0.1，在全國中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報綜合評價排名中比2014年上升了4位，排名第七。

Component Analysis of Volatile Oil of Flos Magnoliae and Assay of Magnolin Content from Different Producing Areas

YANG Qiongliang1，OUYANG Ting1，YANG Renyi2，ZHANG Taofu1，LV Qi1，YAN Hong1*
（1.School of pharmacy，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410208，China；2.College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410208，China）

Objective To study the chemical component of volatile oil of Flos Magnoliae from Hunan and Guangxi，and the magnolin content was determined.Methods The volatile oil of the Flos Magnoliae in Hunan and Guangxi was analyzed by GC-MS，and the content of magnolin was determined by HPLC.Results 63 and 65 compounds were respectively separated and identified from Flos Magnoliae volatile oil that was collected from Hunan and Guangxi，mainly including eucalyptol，beta pinene，2-camphor，geranyl linalool，alpha terpineol etc.Magnolin presented a good linearity with peak area between the concentration of 2-256 μg/mL（r=0.99996，n=6）.The average recovery was 100.32%with the RSD of 0.04%.The content of Magnolia from the province of Hunan and Guangxi was 0.87%±0.05%and 0.81%±0.02%.Conclusion GC-MS can detect the composition of essential oil quickly and effectively.The analysis of magnolin with HPLC was simple，reliable and reproducible.

Flos Magnoliae；GC-MS；HPLC；volatile oil；magnolin；content assaying

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2016.10.010

2016-05-09

湖南省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實驗計劃項目（湘教通［2016］283號）；湖南省“中藥學(xué)”重點學(xué)科項目（湘教通［2011］76號）。

楊瓊梁，女，在讀碩士研究生，研究方向：中藥新劑型與新技術(shù)的研究。

*顏紅，女，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：yh8632@126.com。