郭　敏　白　莉

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·論著·

慢性蕁麻疹患者血清IL-35和IL-17的檢測(cè)

郭敏1白莉2

目的：檢測(cè)慢性蕁麻疹(CU)患者血清中IL-35及IL-17的表達(dá)。方法：病例組60例，根據(jù)蕁麻疹活動(dòng)性評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(UAS)評(píng)價(jià)疾病嚴(yán)重程度，60例健康體檢者作為對(duì)照。ELISA法檢測(cè)CU患者與對(duì)照血清中IL-35和IL-17的水平，分析其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。結(jié)果：CU患者組血清IL-35水平為(46.73±17.19)ng/L明顯低于健康對(duì)照組的(73.78±25.51)ng/L(P<0.05)；CU組IL-17表達(dá)水平為(18.03±8.88)ng/L，明顯高于對(duì)照組的(8.46±3.29)ng/L(P<0.05)。疾病嚴(yán)重程度評(píng)分與IL-35表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與IL-17表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論：IL-35和IL-17可能與CU的發(fā)病及嚴(yán)重程度有關(guān)。

慢性蕁麻疹；IL-35；IL-17

慢性蕁麻疹(chronic urticaria, CU)是皮膚科常見(jiàn)的過(guò)敏性疾病，以反復(fù)發(fā)生風(fēng)團(tuán)或紅斑伴瘙癢為特點(diǎn)，病程超過(guò)6周，每周至少發(fā)作兩次，病程遷延難愈，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。IL-35是Treg細(xì)胞分泌的一種特征性的免疫負(fù)調(diào)節(jié)因子，IL-17是Th17細(xì)胞分泌的特征性細(xì)胞因子，兩者均在自身免疫性疾病、炎癥反應(yīng)、腫瘤等發(fā)揮重要作用。迄今國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)對(duì)慢性蕁麻疹中IL-35和IL-17相關(guān)性研究，本文采用ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)CU患者血清中IL-35和IL-17含量，分析兩者表達(dá)水

平與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料和方法

1.1臨床資料病例組選擇60例自2014年11月至2015年5月在我院皮膚科門(mén)診就診并經(jīng)臨床確診的慢性蕁麻疹患者。入選標(biāo)準(zhǔn)：①病程大于2個(gè)月，每周至少發(fā)作兩次；②除外膽堿能性蕁麻疹、壓力性蕁麻疹、寒冷性蕁麻疹；③近4周內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑，近7天內(nèi)未使用抗組胺藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①資料不全者；②妊娠期、哺乳期婦女；③合并嚴(yán)重心、肝、肺、腎等內(nèi)臟疾病以及系統(tǒng)性疾病。60例患者中男28例，女32例；年齡16～58歲，平均32.3歲；病程3個(gè)月至12年，平均24.6個(gè)月。根據(jù)EAACI/GA2LEN/EDF蕁麻疹評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，將CU患者根據(jù)病情嚴(yán)重程度分級(jí)評(píng)分(表1)。對(duì)照組選擇60例我院體檢中心健康體檢者，排除系統(tǒng)及過(guò)敏性疾病，年齡、性別與病例組匹配，入組及采血均已告知患者并簽署知情同意書(shū)。

表1　慢性蕁麻疹EAACI/GA2LEN/EDF蕁麻疹評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.2CU嚴(yán)重程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[1,2]嚴(yán)重程度觀察指標(biāo)包括風(fēng)團(tuán)數(shù)量及瘙癢程度，所有CU按輕、中、重三級(jí)評(píng)分，按綜合癥狀積分將病情分為輕度(0～2分)，中度(3～4)分、重度(5～6分)。

1.3標(biāo)本收集入組患者均采肘靜脈血3 mL，置于真空采血試管中，室溫冷卻30 min,3000 r/min離心10 min,取血清1.5 mL放入PE管分裝，標(biāo)記后置于-20℃冰箱中保存，備測(cè)。實(shí)驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按照IL-35和IL-17酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。每個(gè)試劑盒使用前先做預(yù)試驗(yàn)，檢測(cè)試劑盒正常，標(biāo)準(zhǔn)孔設(shè)復(fù)孔，檢測(cè)人IL-35及IL-17吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孔與復(fù)孔的平均值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)曲線回歸方程計(jì)算出待測(cè)孔人IL-35及IL-17濃度。

1.4試劑與器材人IL-35及IL-17酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，采用SpectreMax plus384酶標(biāo)儀(MD公司，美國(guó))。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，進(jìn)行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血清中IL-35和IL-17表達(dá)水平，采用Pearson相關(guān)分析探討兩者間的關(guān)系，并采用Spearman相關(guān)分析探討IL-35、IL-17與CU疾病癥狀評(píng)分的相關(guān)性，P<0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1ELISA檢測(cè)結(jié)果IL-35血清含量在CU患者中明顯降低，與健康對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);CU患者IL-17血清水平明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2　IL-35與IL-17水平組間比較

2.2相關(guān)性分析IL-35水平與疾病嚴(yán)重度評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IL-17水平與疾病嚴(yán)重度評(píng)分呈正相關(guān),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。IL-35與IL-17表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見(jiàn)表3。

表3　IL-35、IL-17與疾病嚴(yán)重度的相關(guān)性及IL-35與IL-17相關(guān)性的分析

3　討論

慢性蕁麻疹(CU)發(fā)病的中心環(huán)節(jié)是肥大細(xì)胞活化脫顆粒，釋放組胺、合成細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)等引起血管擴(kuò)張及血管通透性增加，導(dǎo)致真皮水腫，引起風(fēng)團(tuán)及瘙癢等臨床癥狀[3]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)CU的研究大多集中在免疫調(diào)節(jié)機(jī)制上，主要研究為T(mén)h1/Th2細(xì)胞之間的平衡以及相關(guān)的細(xì)胞因子在自身免疫性疾病中的作用，但仍不能很好地解釋CU的發(fā)病機(jī)制。Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞是近幾年研究發(fā)現(xiàn)的CD4+的細(xì)胞亞群，Treg/Th17的平衡在免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]，目前已經(jīng)在自身免疫性疾病中得到越來(lái)越多的關(guān)注。

IL-35是由調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌的一種具有免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用的新型細(xì)胞因子，IL-35與IL-12、IL-23、IL-27一起組成了IL-12細(xì)胞因子家族[5]。IL-35是由p35和EBI3兩個(gè)亞單位組成的異源二聚體，其在體外具有促進(jìn)Treg細(xì)胞擴(kuò)增，誘導(dǎo)iTR35細(xì)胞產(chǎn)生、促進(jìn)Th1細(xì)胞分化，抑制Th17細(xì)胞產(chǎn)生和效應(yīng)性T細(xì)胞活化等作用，是Treg細(xì)胞發(fā)揮其最大抑制效應(yīng)所必不可少的細(xì)胞因子[6]。 由于IL-35具有較強(qiáng)的免疫抑制作用，越來(lái)越多的研究者開(kāi)始關(guān)注其在疾病發(fā)生與發(fā)展過(guò)程的重要作用。IL-17是由Thl7分泌的最重要的細(xì)胞因子，參與中性粒細(xì)胞的增殖、成熟和趨化，可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分泌IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子、趨化因子，導(dǎo)致和放大炎癥[7]。已有的研究表明IL-17作為一種很強(qiáng)促炎功能的細(xì)胞因子，在過(guò)敏性哮喘、慢性蕁麻疹、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、紅斑狼瘡、自身免疫性肝炎和炎癥性腸病中扮演重要角色[8-10]。

本研究發(fā)現(xiàn)，CU患者組IL-35的表達(dá)水平較健康對(duì)照組明顯降低，并且與疾病的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，提示在健康人體內(nèi)，IL-35可能作為一種保護(hù)性細(xì)胞因子存在，維持人體的免疫平衡。本研究表明CU患者比健康人血清IL-17水平明顯升高，且與病情嚴(yán)重程度評(píng)分成正相關(guān)，但與病程、年齡、性別無(wú)明顯相關(guān)性，推測(cè)隨著臨床癥狀逐漸加重，Treg細(xì)胞分化減少，合成的IL-35逐漸降低，促進(jìn)Th1、Th2等細(xì)胞分化,抑制Th17細(xì)胞產(chǎn)生和Treg細(xì)胞活化，IL-17的表達(dá)增加，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的異常，引起CU的發(fā)生。本研究還發(fā)現(xiàn)，在CU患者中IL-35與IL-17表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=-0.488,P<0.05)，提示IL-35既可以使調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增殖，也可以抑制Th17細(xì)胞的分化，影響IL-17合成，提示兩者可能共同在自身免疫性疾病、炎癥反應(yīng)、腫瘤、病毒感染等扮演重要角色[6]。

綜上所述，CU的發(fā)生與發(fā)展與IL-35與IL-17密切相關(guān)，通過(guò)對(duì)其關(guān)系的研究有助于了解CU的免疫發(fā)病機(jī)制，并為CU的診斷與治療提供新的思路。但CU發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制復(fù)雜，尤其對(duì)于IL-35的研究尚處于早期，IL-35與IL-17在CU中如何相互作用，仍需進(jìn)一步研究。

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(收稿：2015-07-29修回：2015-08-05)

Detection of serum IL-35 and IL-17 in the patients with chronic urticaria

GUOMin1,BAILi2.

1.FirstClinicalMedicalcollege,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China; 2.TheFirstHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China

BAILi,E-mail:baili@medmail.com.cn

Objective: To detect the level of IL-35 and IL-17 in the patients with chronic urticaria (CU). Methods: The levels of IL-35 and IL-17 in 60 patients and 60 controls were detected by ELISA and the severity of the patients was assessed by urticaria activity score (UAS). The correlation between the level of serum IL-35 and IL-17, and CU severity scores was analyzed. Results: The serum level of IL-35 in the patients was (46.73±17.19) ng/L, which was lower than that in the controls (73.78±25.51) ng/L. The difference was statistically significant (P<0.05). The serum level of IL-17 in the patients was (18.03±8.88) ng/L, which was higher than that in the controls (8.46±3.29) ng/L. The difference was statistically significant (P<0.05). The CU severity score was negatively correlated to the level of IL-35 and positively to the level of IL-17 (P<0.05). Conclusion: The expression of IL-35 and IL-17 may be involved in the onset and severity of CU.

chronic curticariaA; IL-35; IL-17

1山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，山西太原,030001

2山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，太原，030001

白莉，E-mail:baili@medmail.com.cn