黃　海,李八方,曾名湧,*

(1.欽州學(xué)院食品工程學(xué)院,廣西欽州 535011;2.廣西北部灣特色海產(chǎn)品資源開發(fā)與高值化利用高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西欽州 535011;3.中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島 266003)

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鈣離子與pH誘導(dǎo)鯉魚卵肽納米顆粒的形成

黃海1,2,李八方3,曾名湧3,*

(1.欽州學(xué)院食品工程學(xué)院,廣西欽州 535011;2.廣西北部灣特色海產(chǎn)品資源開發(fā)與高值化利用高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西欽州 535011;3.中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島 266003)

探討鈣離子和pH誘導(dǎo)鯉魚卵肽(Carp egg peptide,CEP)形成納米顆粒的條件及穩(wěn)定納米顆?？臻g結(jié)構(gòu)的作用力。通過(guò)濁度檢測(cè)初步篩選CEP納米顆粒形成條件,用粒徑分析和電鏡觀察方法確認(rèn)納米顆粒的形成。通過(guò)次級(jí)鍵破壞實(shí)驗(yàn)分析穩(wěn)定納米顆?？臻g結(jié)構(gòu)的作用力,并通過(guò)紅外光譜和圓二色譜分析CEP納米顆粒形成后的空間結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果表明,當(dāng)pH6.0～9.0時(shí),CEP能與一定濃度的鈣離子結(jié)合形成粒徑20～100 nm的納米顆粒,疏水作用和靜電作用是穩(wěn)定納米顆粒的主要作用力,CEP形成納米顆粒后伴隨著β折疊的形成。CEP能夠作為生物模板在溫和條件下合成肽-鈣納米顆粒。

鯉魚卵肽,納米顆粒,空間結(jié)構(gòu)改變

納米顆粒是指納米量級(jí)的微觀顆粒,它被定義為至少在一個(gè)維度上小于100 nm的顆粒,具有高滲透性高和在人體腸道中的吸收率高的特點(diǎn)。有研究表明人體對(duì)物理方式納米化的碳酸鈣吸收效果顯著高于普通碳酸鈣[1]。因此納米級(jí)礦物質(zhì)將有望成為新型礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑。目前納米顆粒制備技術(shù)主要有粉碎和聚集兩種。粉碎法指利用機(jī)械研磨、熱分解、等離子蒸發(fā)、激光轟擊等方法將大顆粒粉碎成納米顆粒,需要精密復(fù)雜的設(shè)備,并且損耗大量的能量,成本較高。聚集法通過(guò)分子聚集成納米顆粒,例如共沉淀、熱液合成、表面活性劑介導(dǎo)合成等[2],然而由于殘留化學(xué)試劑的毒性,許多聚集方法不適合營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑的制備。近年來(lái),受生物體生物礦化的啟發(fā),肽被用來(lái)作為生物模板在溫和條件下合成金屬納米顆粒[3-4]。Zhang等在研究大豆分離蛋白時(shí)發(fā)現(xiàn)其能夠與鈣離子形成納米顆粒[5],Wu等在研究鳀魚肽鐵復(fù)合物的結(jié)構(gòu)時(shí),觀察到納米顆粒的存在[6]。

魚卵富含脂質(zhì)、卵黃蛋白、礦物元素、維生素、類胡蘿卜素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),但在常規(guī)的加工過(guò)程中,魚卵往往被作為下腳料而廢棄。水產(chǎn)加工副產(chǎn)物已經(jīng)有大量的利用研究[7-8],而關(guān)于魚卵的利用研究則較少。作者前期研究表明鯉魚卵蛋白酶解物富含磷酸絲氨酸,具有較強(qiáng)的鈣離子結(jié)合活性[9],通過(guò)酶解物制備的鯉魚卵肽鈣復(fù)合物具有促進(jìn)體內(nèi)鈣吸收的活性[10-11]。本論文將對(duì)鯉魚卵肽(carp egg peptide,CEP)在鈣離子和pH誘導(dǎo)下形成納米顆粒的條件、穩(wěn)定納米顆粒的作用力及其空間結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行系統(tǒng)研究,揭示納米顆粒形成的機(jī)制,為納米型肽鈣復(fù)合物類補(bǔ)鈣制劑的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

鯉魚卵購(gòu)自山東美佳集團(tuán)有限公司;D2O、DCl、NaODSigma公司;尿素、SDS上海生工;胰蛋白酶酶活190 kU/g,南寧龐博生物工程有限公司;實(shí)驗(yàn)所用其它試劑均為分析純及以上。

JEM-1200EX透射電鏡日本JEOL公司;MOS450/AF-CD圓二色譜儀法國(guó)Biologic公司;ZEN3600粒徑分析儀英國(guó)Malvern公司;Nicolet iS10傅里葉變換紅外光譜儀美國(guó)Thermo公司;UV-2550型紫外分光光度計(jì)日本島津公司;BIO-RAD550酶標(biāo)儀美國(guó)伯樂公司;PHS-3C型精密pH計(jì)上海雷磁儀器廠;DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司;FDU-1200型 EYELA冷凍干燥機(jī)上海愛朗儀器有限公司;Millipore 超純水系統(tǒng)美國(guó)Millipore儀器公司;GL-21M高速冷凍離心機(jī)湘儀離心機(jī)儀器有限公司;Laborata 4000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀德國(guó)Heidolph公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1鯉魚卵肽的制備按照Li等的方法略加改進(jìn)[12]。鯉魚卵脫脂后,先經(jīng)0.1 mol/L NaOH處理2 h部分脫磷,然后用胰蛋白酶(溫度49 ℃,加酶量3000 U/g,底物濃度2%,pH9.0)酶解12 h,于10000 r/min、4 ℃條件下離心20 min,將上清液過(guò)0.22 μm微孔濾膜。過(guò)濾后的酶解液緩慢注入到Chelex-100樹脂層析柱中,控制流速3 mL/min,脫除酶解液中的金屬離子。將收集的酶解液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后冷凍干燥即得鯉魚卵肽(carp egg peptide,CEP)。

1.2.2濁度測(cè)定按照水質(zhì)-濁度的測(cè)定(GB 13200-91)進(jìn)行。濁度標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。配制0.5%,pH為6.0～9.0的CEP溶液,分別與2.5、5、7.5 mmol/L氯化鈣反應(yīng),靜置過(guò)夜,用同濃度的氯化鈣水溶液為空白,于400 nm下測(cè)定吸光值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出濁度。

圖1　濁度標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1　Standard curve of turbidity

1.2.3粒徑分析將樣品與氯化鈣在一定條件下混合反應(yīng)后,過(guò)0.22 μm濾膜,然后將樣液注入DTS1060C樣液池中,小心趕走氣泡,置于粒徑分析儀中檢測(cè)，以此判斷分散性(PDI)。測(cè)定參數(shù)設(shè)置為:光源He-Ne激光燈,波長(zhǎng)633 nm,入射角173°,粘度1.0031,RI 1.330,(25±0.1) ℃,平衡時(shí)間60 s,每個(gè)樣品掃描3次,取平均值。

1.2.4電鏡分析將待測(cè)樣液吸附在銅網(wǎng)上,自然風(fēng)干5～10 min后用磷鎢酸負(fù)染,自然風(fēng)干后置于80 kV透射電鏡上觀察。

1.2.5穩(wěn)定納米顆粒作用力分析將形成納米顆粒的CEP-Ca樣液(0.5% CEP,pH7.0,5.0 mmol/L CaCl2)的pH分別調(diào)至2.0～9.0,靜置過(guò)夜,測(cè)定溶液濁度;上述樣液中加入尿素溶液,使尿素終濃度分別為0.25～2.00 mol/L,靜置過(guò)夜,測(cè)定溶液濁度和電鏡觀察;上述樣液中分別加入終濃度為0.01%十二烷基磺酸鈉(SDS)溶液和2.5 mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)溶液,靜置過(guò)夜,測(cè)定溶液濁度和電鏡觀察。

1.2.6紅外光譜分析將樣品用D2O溶解后,冷凍干燥,重復(fù)2次,以去除樣品中的H2O。處理好的樣品用D2O溶解,配成0.5% CEP溶液,用氘代的DCl和NaOD調(diào)節(jié)溶液pD。加入氯化鈣重水溶液,使其與鈣離子結(jié)合,形成CEP-Ca復(fù)合物。樣液置于兩片氟化鈣窗片之間進(jìn)行紅外光譜分析。

1.2.7圓二色譜分析用超純水配制0.5% CEP溶液,調(diào)節(jié)溶液pH,加入氯化鈣,形成CEP-Ca復(fù)合物。樣液置于光程為1 mm的石英比色皿中,25 ℃條件下采用圓二色譜儀進(jìn)行光譜掃描。實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)定為:掃描波長(zhǎng)190～300 nm,分辨率0.1 nm,帶寬1.0 nm,掃描速度40 nm/min,每個(gè)樣品掃描3次,取平均值。

2　結(jié)果與討論

2.1納米顆粒形成判斷

溶液濁度是判斷溶液顆粒大小的簡(jiǎn)單方法。判斷依據(jù)為:以所有不加氯化鈣的CEP溶液中的最小濁度為基準(zhǔn)濁度,濁度至少上升50%,且不產(chǎn)生沉淀(靜置一夜)[5]。

表1　CEP溶液在不同條件下的濁度

注:上標(biāo)不同字母表示差異顯著,p<0.05;表2同；+表示納米顆?？赡苄纬?-表示沒有形成。

由表1可知,CEP溶液的濁度在pH6.0～9.0范圍內(nèi)均無(wú)顯著性差異,在此范圍內(nèi)單獨(dú)調(diào)節(jié)pH并不能促進(jìn)納米顆粒形成。當(dāng)加入氯化鈣后,pH和氯化鈣濃度均對(duì)納米顆粒的可能形成產(chǎn)生影響。pH6.0～9.0范圍內(nèi),納米顆?？赡苄纬?且大小隨著pH和氯化鈣濃度上升而上升,但是超過(guò)某一范圍將產(chǎn)生沉淀。

2.2納米顆粒形成確認(rèn)

在濁度實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,篩選出可能形成納米顆粒的條件,并在這些條件下制備“納米顆?！?用粒徑分析儀測(cè)定粒徑分布和用電鏡觀察顆粒形態(tài),確定是否形成納米顆粒。由表2可知,CEP在根據(jù)濁度實(shí)驗(yàn)篩選的結(jié)合條件均能形成粒徑為25～115 nm的顆粒,分散性良好[13](PDI<0.4),且隨著pH和鈣濃度上升,顆粒粒徑增大。電鏡觀察中也證實(shí)了納米顆粒的形成,而且觀測(cè)到的納米顆粒直徑與粒徑分析儀測(cè)得的結(jié)果相吻合(圖2)。

表2　CEP在不同制備條件下的納米顆粒大小

圖2　CEP-Ca的透射電鏡圖Fig.2　TEM images of CEP-Ca注:A:CEP(pH6.0,7.5 mmol/L CaCl2);B:CEP(pH8.0,5 mmol/L CaCl2);放大倍數(shù):105×;圖5、圖6同。

CEP成分分析表明含有91.2%(w/w)的蛋白質(zhì)和0.68%(w/w)的磷,相當(dāng)于肽鏈中約每100個(gè)氨基酸就有2.6個(gè)是被磷酸化修飾,且主要是以磷酸絲氨酸形式存在[10]。磷酸基團(tuán)的帶電性賦予CEP結(jié)合鈣離子的活性。蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電是結(jié)合鈣離子的化學(xué)基礎(chǔ),但是帶電又導(dǎo)致分子間相互排斥,不利于納米顆粒的形成。通過(guò)調(diào)節(jié)pH可以改變CEP的帶電狀況,而鈣離子可以與負(fù)電基團(tuán)結(jié)合而起到電荷屏蔽效應(yīng),從而誘導(dǎo)CEP-Ca納米顆粒的形成。本實(shí)驗(yàn)中當(dāng)把pH調(diào)節(jié)至6.0～9.0時(shí),鈣離子濃度控制在2.5～7.5 mmol/L時(shí),CEP-Ca納米顆?？梢孕纬?。當(dāng)進(jìn)一步增加pH和鈣離子濃度,會(huì)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,這是由于Ca(OH)2沉淀所致。

2.3穩(wěn)定納米顆粒結(jié)構(gòu)的作用力

納米顆粒具有一定的空間結(jié)構(gòu),它的形成及穩(wěn)定需要?dú)滏I、疏水作用、范德華力、靜電相互作用等次級(jí)鍵作用力。為了確定哪些作用力對(duì)納米顆粒的形成及穩(wěn)定起作用,選擇了破壞氫鍵的尿素、破壞疏水作用的十二烷基磺酸鈉(SDS)、鈣離子螯合劑乙二胺四乙酸(EDTA)以及調(diào)節(jié)pH對(duì)CEP-Ca(pH7.0,5.0 mmol/L CaCl2)納米顆粒進(jìn)行處理后靜置過(guò)夜,以溶液濁度變化并結(jié)合電鏡觀察來(lái)判斷納米顆粒的解離情況。

2.3.1pH對(duì)納米顆粒穩(wěn)定的影響由圖3可知,CEP-Ca納米顆粒當(dāng)pH降至6.0以下時(shí)會(huì)解離,表現(xiàn)為濁度迅速下降。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)當(dāng)pH升至9.0以上時(shí),出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。pH由于改變體系的荷電情況而影響納米顆粒的形成及穩(wěn)定,當(dāng)超出這個(gè)適宜的pH范圍將阻礙納米顆粒的形成或?qū)е缕浣怆x。由此可見,靜電相互作用是形成和穩(wěn)定納米顆粒的必要因素。

圖3　pH對(duì)納米顆粒分散液濁度的影響Fig.3　The influence of pH on theturbidity of the nanoparticle dispersions

由圖3可知,CEP-Ca納米顆粒的解離和形成并不完全同步。如CEP與5.0 mmol/L CaCl2分別在pH6.0、7.0、8.0形成的分散液濁度分別為4.354、8.833和11.021 NTU(表1),然而CEP在pH7.0,5.0 mmol/L CaCl2條件下形成納米顆粒后,分散液pH調(diào)至8.0時(shí),其濁度并不能升到11.021 NTU,而pH調(diào)至6.0時(shí),其濁度也并不降到4.354 NTU,而均維持在初始水平附近(8.833 NTU)。這種現(xiàn)象說(shuō)明CEP-Ca納米顆粒在一定情況下一旦穩(wěn)定形成,將難以解離或重新聚集,改變其特定空間結(jié)構(gòu)需克服較大的自由能。

2.3.2尿素對(duì)納米顆粒穩(wěn)定的影響當(dāng)加入尿素后,CEP-Ca納米顆粒分散液的濁度顯著下降,表明納米顆粒發(fā)生了解離,然而即使將尿素濃度升到2.0 mol/L,也不能使納米顆粒完全解離(圖4和圖5)。由于尿素破壞的是氫鍵,所以氫鍵參與了納米顆粒的形成與穩(wěn)定,但氫鍵與靜電相互作用相比,影響較小。對(duì)沉淀體系的CEP-Ca也加入尿素進(jìn)行實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)體系變澄清,但濁度檢測(cè)依然表明存在納米顆粒,由此確認(rèn)氫鍵確實(shí)不是納米顆粒形成的必要因素,但在顆粒聚集增大乃至沉淀過(guò)程中仍起到較大作用。

圖4　尿素對(duì)納米顆粒分散液濁度的影響Fig.4　The influence of urea on theturbidity of the nanoparticle dispersions

圖5　2.0 mol/L尿素處理后CEP-Ca的透射電鏡圖Fig.5　TEM images of CEP-Caafter 2.0 mol/L urea treatment

2.3.3SDS對(duì)納米顆粒穩(wěn)定的影響SDS作為一種陰離子去污劑,是蛋白質(zhì)的強(qiáng)變性劑,破壞穩(wěn)定蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的疏水作用和氫鍵。CEP-Ca納米顆粒在0.01% SDS處理后立即形成沉淀,說(shuō)明納米顆粒快速失穩(wěn)沉淀。尿素處理實(shí)驗(yàn)已證實(shí)氫鍵對(duì)納米顆粒穩(wěn)定性影響較小,由此可見,造成納米顆粒快速失穩(wěn)沉淀的主要原因是SDS破壞了納米顆粒的疏水作用,而疏水作用是形成和穩(wěn)定納米顆粒的必要因素。

2.3.4EDTA對(duì)納米顆粒穩(wěn)定的影響EDTA是一種鈣離子螯合劑,具有極強(qiáng)的鈣離子結(jié)合能力,生成穩(wěn)定的螯合物。實(shí)驗(yàn)表明,CEP-Ca分散液經(jīng)2.5 mol/L EDTA處理后,濁度驟然降低,納米顆粒完全解體,電鏡觀察呈無(wú)顆粒彌散狀態(tài)(圖6)。這說(shuō)明鈣離子直接參與了納米顆粒的形成,是納米顆粒的組成部分。

圖6　EDTA處理后CEP-Ca的透射電鏡圖Fig.6　TEM images of IPP-Ca and CEP-Ca after EDTA treatment

2.4肽與Ca2+結(jié)合前后空間結(jié)構(gòu)的變化

2.4.1紅外光譜分析液體紅外光譜是分析蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)變化的有效方法。通過(guò)分析蛋白質(zhì)在紅外光譜1700～1600 cm-1處的特征吸收帶(酰胺Ⅰ帶)的變化情況,可得到蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)變化的信息[14]。由圖7可知,CEP在自然狀況下(圖7A)存在β折疊結(jié)構(gòu)(1683、1636 cm-1),還有少量α螺旋(1651 cm-1)[15]和β轉(zhuǎn)角(1605 cm-1)結(jié)構(gòu)[16]。當(dāng)加入鈣離子或升高pH后,α螺旋結(jié)構(gòu)吸收峰變小甚至消失,但β折疊結(jié)構(gòu)吸收峰沒有變化圖7(B、C)。當(dāng)CEP形成納米顆粒后,1636 cm-1吸收峰顯著升高并藍(lán)移至1639 cm-1,表明β折疊結(jié)構(gòu)增多(圖7D)。這表明納米顆粒的形成伴隨著β折疊結(jié)構(gòu)的形成。

圖7　CEP及CEP-Ca酰胺Ⅰ帶紅外吸收光譜Fig.7　Infrared spectra of amideⅠband of CEP and CEP-Ca注:A:0.5% CEP(pH5.0);B:0.5% CEP-Ca(pH5.0,5.0 mmol/L CaCl2);C:0.5% CEP(pH7.0);D:0.5% CEP-Ca(pH7.0,5.0 mmol/L CaCl2);圖8同。

2.4.2圓二色譜分析圓二色譜能夠靈敏檢測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化[17]。198 nm附近的正峰和218 nm附近的負(fù)峰是典型的β折疊結(jié)構(gòu)形成的吸收峰,208 nm附近的負(fù)峰是α螺旋[6,18]。如圖8所示,CEP在未形成納米顆粒時(shí),存在β折疊結(jié)構(gòu)和α螺旋結(jié)構(gòu),這與紅外光譜分析結(jié)果相吻合。當(dāng)納米顆粒形成時(shí)(圖8D),208 nm處的負(fù)峰紅移至216 nm現(xiàn)象,而這種現(xiàn)象是形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的特征,說(shuō)明α螺旋結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化為β折疊結(jié)構(gòu)[5,19],這也證實(shí)當(dāng)納米顆粒生成時(shí)伴隨著β折疊結(jié)構(gòu)的形成。

圖8　CEP及CEP-Ca圓二色譜圖Fig.8　CD spectra of CEP and CEP-Ca

納米顆粒空間結(jié)構(gòu)的形成及穩(wěn)定需要借助靜電、氫鍵、疏水作用等次級(jí)鍵,伴隨著空間結(jié)構(gòu)的改變。本實(shí)驗(yàn)研究表明靜電和疏水作用是形成及穩(wěn)定CEP-Ca納米顆粒的主要次級(jí)鍵,氫鍵參與了納米顆粒的形成,但不是其必要條件。空間結(jié)構(gòu)分析表明納米顆粒形成后伴隨著α螺旋的減少或消失和β折疊的形成或增多。

通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)CEP-Ca納米顆粒形成的過(guò)程機(jī)制為:由于磷酸基團(tuán)酸性強(qiáng)于羧酸,磷酸絲氨酸殘基上的磷酸基團(tuán)首先電離,并抑制羧酸的電離,此時(shí)只能由磷酸基團(tuán)結(jié)合鈣離子。由于分子間排斥力大,而且1個(gè)鈣離子只能與1個(gè)磷酸絲氨酸殘基結(jié)合,無(wú)法在分子間形成鹽橋,所以CEP與鈣結(jié)合不會(huì)導(dǎo)致分子聚集產(chǎn)生納米顆粒。當(dāng)pH和鈣離子濃度進(jìn)一步升高,鈣離子在優(yōu)先飽和磷酸基團(tuán)后,對(duì)其電荷產(chǎn)生屏蔽效應(yīng),使分子內(nèi)及分子間斥力大大降低,在疏水作用和氫鍵作用下形成β折疊結(jié)構(gòu),同時(shí)羧酸電離并與鈣離子結(jié)合,鈣離子在兩個(gè)羧酸根之間形成鹽橋,進(jìn)而構(gòu)建網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),形成納米顆粒。

3　結(jié)論

CEP能夠在pH和鈣離子誘導(dǎo)下形成納米顆粒。當(dāng)pH6～9時(shí),CEP能與2.5～7.5 mmol/L的鈣離子結(jié)合形成分散均勻、粒徑20～100 nm的納米顆粒,疏水作用、靜電作用是穩(wěn)定納米顆粒的主要作用力,氫鍵參與了納米顆粒的形成。當(dāng)納米顆粒形成后,空間結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變,表現(xiàn)為α螺旋的減少或消失和β折疊的形成或增多。本論文證實(shí)了CEP能夠作為生物模板在溫和條件下與鈣離子形成肽-鈣型納米顆粒,因此CEP有望開發(fā)成納米型肽-鈣復(fù)合物類補(bǔ)鈣制劑。

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Nanoparticles formation of carp eggs peptides induced by Ca2+and pH values

HUANG Hai1,2,LI Ba-fang3,ZENG Ming-yong3,*

(1.College of Food Engineering,Qinzhou University,Qinzhou 535011,China；2.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of Development and High-value Utilization of Beibu Gulf Seafood Resource,Qinzhou 535011,China；3.College of Food Science and Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China)

To investigate the conditions of nanoparticles formation of carp egg peptide(CEP)induced by Ca2+and pH and to demonstrate the force of stabling their space structures. The conditions could be preliminary screened by turbidity testing and confirmed by particle size analysis and electron microscope observation. The forces of stabling nanoparticles could be determined through secondary bond destruction experiments and the changes of their space structures were studied using Fourier transform infrared spectroscopy(FTIR)and circular dichroism spectroscopy(CD). The results showed that nanoparticles whose diameters ranging from 20～100 nm were formed by CEP and Ca2+under pH6.0～9.0. The stabilities of the nanoparticles were mainly dependent on hydrophobic force and electrostatic force. Theβ-sheet formation was observed while CEP formed nanoparticles. CEP could be used as a biological template to synthesize peptide-calcium nanoparticles under mild conditions.

carp eggs peptides;nanoparticles;change of space structure

2016-03-30

黃海(1977-)，男，博士，副教授，研究方向：水產(chǎn)品加工及資源利用，E-mail:jxfifagoal@163.com。

曾名湧(1965-)，男，博士，教授，研究方向：水產(chǎn)品高值化利用，E-mail:mingyz@ouc.edu.cn。

國(guó)家自然科學(xué)基金(31101379)；國(guó)家星火計(jì)劃項(xiàng)目(2012GA740048)。

TS254.1

A

1002-0306(2016)18-0100-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.18.011