吳小容莫羽

瘦素與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在子宮內(nèi)膜病變中的表達(dá)和意義*

吳小容①莫羽①

目的：研究不同子宮內(nèi)膜疾病中瘦素（LP）與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）陽(yáng)性表達(dá)率間的差異，分析兩者陽(yáng)性表達(dá)率的相關(guān)性并探討兩者在不同子宮內(nèi)膜病變中的意義。方法：選取2006年1月-2015年1月本院收治的78例子宮內(nèi)膜病變患者作為研究對(duì)象，根據(jù)病理結(jié)果將其分為子宮內(nèi)膜癌組48例和子宮內(nèi)膜非典型增生組30例，另?yè)裢谝驅(qū)m頸上皮內(nèi)瘤變（Ⅱ～Ⅲ級(jí)）切除子宮的正常增殖期子宮內(nèi)膜組織24例為對(duì)照組。根據(jù)LP、VEGF的染色程度和面積確定兩者在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況，并分析兩者在子宮內(nèi)膜癌組中的相關(guān)性。結(jié)果：LP、VEGF在各組子宮內(nèi)膜組織中均有表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌組中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)最多，陽(yáng)性率最高（P＜0.05）；LP與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.40，P＜0.05），LP在子宮內(nèi)膜癌不同病理分級(jí)中的表達(dá)無差異，而VEGF則隨著病理分級(jí)增高而表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)論：子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展是多基因、多種外在因素共同作用的結(jié)果。LP、VEGF與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)，有望成為腫瘤靶向治療的新靶點(diǎn)，從而為子宮內(nèi)膜癌的預(yù)防、治療提供重要參考。

瘦素； 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子； 子宮內(nèi)膜病變； 表達(dá)； 意義

First-author's address：The Central People's Hospital of Zhanjiang City，Zhanjiang 524000，China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.27.007

作為女性生殖道常見的三大惡性腫瘤之一的子宮內(nèi)膜癌占女性生殖道惡性腫瘤20%～30%，子宮內(nèi)膜疾病嚴(yán)重影響了女性身體健康，輕者可影響日常生活，重者可導(dǎo)致不孕不育，甚至危及患者的生命安全［1-2］。目前因臨床操作檢查較為復(fù)雜，所以子宮內(nèi)膜癌的病因不是十分清楚，但其中之一的發(fā)病相關(guān)因素為肥胖。瘦素（Leptin，LP）作為肥胖基因編碼生成的重要蛋白質(zhì)產(chǎn)物，提示瘦素可能與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病有關(guān)［3-6］；而血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）作為最重要的促腫瘤血管生成因子之一，與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)［7-8］。本研究采用免疫組化法對(duì)不同子宮內(nèi)膜病變組織中的LP、VEGF進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討LP、VEGF與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2006年1月-2015年1月本院收治的因子宮內(nèi)膜病變接受手術(shù)治療的78例患者的子宮內(nèi)膜組織石蠟標(biāo)本作為研究對(duì)象，根據(jù)病理結(jié)果將其分為子宮內(nèi)膜癌組48例和子宮內(nèi)膜非典型增生組30例，子宮內(nèi)膜癌組中按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO，1988年）內(nèi)膜樣癌組織的3級(jí)分類法，組織學(xué)分級(jí)G1 20例，G2 15例，G3 13例；年齡36～70歲，平均（46.0±0.7）歲；子宮內(nèi)膜非典型增生組中年齡34～65歲，平均（43.0±0.4）歲。另?yè)裢谝驅(qū)m頸上皮內(nèi)瘤變（Ⅱ～Ⅲ級(jí)）切除子宮的正常增殖期子宮內(nèi)膜組織24例為對(duì)照組，年齡34～65歲，平均（40.0±0.8）歲。所有患者術(shù)前均未接受化療、免疫治療及內(nèi)分泌治療；所有患者病情均符合組織病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)且對(duì)本研究知情同意，本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑 染色劑：蘇木精-伊紅（HE）染色液產(chǎn)于北京索萊寶科技有限公司，產(chǎn)品包括蘇木精染液（100 mL/瓶）、伊紅染液（250 ml/瓶）、分化液（500 mL/瓶）和返藍(lán)液（1000 mL/瓶）。免疫組化化學(xué)試劑盒：兔抗人瘦素多克隆抗體Leptin（BA-1231）、鼠抗人VEGF-165單克隆抗體、SP試劑盒及DAB顯色試劑盒均產(chǎn)于北京中核生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 研究方法 所有患者的標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋后，進(jìn)行連續(xù)切片（厚度為4μm），嚴(yán)格按照蘇木精-伊紅（HE）染色液的說明書上染色。采用鏈霉菌親生物素-過氧化酶鏈接法（SP法）標(biāo)記抗體的顯色情況來確定組織細(xì)胞內(nèi)的抗原，并定位和定性定量的對(duì)其進(jìn)行分析研究，其中，磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照，一抗工作液稀釋度均為1∶1000。細(xì)胞核采用蘇木素復(fù)染，采用光學(xué)顯微鏡檢查顯色反應(yīng)。

1.3 結(jié)果判定 LP、VEGF蛋白均被染為黃色，陽(yáng)性采用半定量標(biāo)準(zhǔn)判斷，以雙盲法判定結(jié)果進(jìn)行評(píng)分。LP、VEGF表達(dá)強(qiáng)度檢測(cè)結(jié)果根據(jù)染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞（染色后細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，強(qiáng)度高于背景染色）百分比綜合判定，即于低倍鏡和高倍鏡下分別觀察切片；根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和其所占面積來表達(dá)陰性和陽(yáng)性［9-10］。隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比，若陽(yáng)性細(xì)胞＜5%，結(jié)果陰性（-）；6%～25%，結(jié)果呈弱陽(yáng)性（+）；26%～50%，結(jié)果呈中度陽(yáng)性（++）；＞50%，結(jié)果為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。染色強(qiáng)度：0為不染色，1為輕度染色，2為中度染色，3為強(qiáng)度染色；染色細(xì)胞所占面積：無細(xì)胞染色為0，＜25%細(xì)胞染色為1，26%～50%細(xì)胞染色為2，＞50%細(xì)胞染色為3。兩者積分之和為0～2為表達(dá)陰性，＞2為陽(yáng)性［11］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 19.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)，使用Spearman相關(guān)性分析LP、VEGF表達(dá)之間的相關(guān)性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LP在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) LP在各組子宮內(nèi)膜組織中均有表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌組中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)最多，陽(yáng)性率最高，三組間陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 LP在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

2.2 VEGF在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) VEGF在各組子宮內(nèi)膜組織中均有表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌組中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)最多，陽(yáng)性率最高，三組間陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 VEGF在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

2.3 子宮內(nèi)膜癌組中LP和VEGF表達(dá)的相關(guān)性 在48例子宮內(nèi)膜癌組中，LP表達(dá)陽(yáng)性者41例，陰性者7例，而VEGF均表達(dá)陽(yáng)性。通過Spearman等級(jí)相關(guān)分析，LP和VEGF表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.40，P＜0.05），見表3。

表3 子宮內(nèi)膜癌組中LP和VEGF表達(dá)的相關(guān)性 例

2.4 子宮內(nèi)膜癌組中不同組織分級(jí)的LP、VEGF表達(dá) LP在子宮內(nèi)膜癌不同病理分級(jí)中的表達(dá)無差異，而VEGF則隨著病理分級(jí)增高而表達(dá)愈強(qiáng)，但由于本研究中G3分級(jí)的病例較少，表現(xiàn)不明顯，見表4。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率隨世界人口中肥胖人群的增多和人均壽命的延長(zhǎng)而呈持續(xù)上升的態(tài)勢(shì)。WTO定義正常體重為體重指數(shù)（BMI）18～24.9 kg/m2，肥胖者≥30 kg/m2［12］。肥胖已成為多種癌癥高危因素之一，可能是導(dǎo)致該病的其中一種高危因素，使子宮內(nèi)膜癌的危險(xiǎn)度升高2～3倍，但目前其具體的發(fā)病機(jī)制尚不甚明確［13］。

表4 子宮內(nèi)膜癌組中不同組織分級(jí)的LP、VEGF表達(dá) 例

瘦素（LP）是最初起源于1994年，通過定位克隆技術(shù)克隆出的小鼠肥胖基因（ob基因）而生成的蛋白產(chǎn)物［14］。LP是由ob基因（位于人類染色體7q32）編碼的一種167個(gè)氨基酸組成的分泌型蛋白質(zhì)，被認(rèn)為是一種脂肪組織分泌的信號(hào)，人和動(dòng)物的體脂保持相對(duì)穩(wěn)定，可通過增加能量和減少攝食消耗來調(diào)節(jié)［15-16］。LP含量與肥胖程度成正比，瘦素作為肥胖基因編碼的多肽產(chǎn)物，不僅在調(diào)節(jié)攝入、能量代謝及維持質(zhì)量平衡中發(fā)揮重要作用，還與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是目前已知作用最強(qiáng)的一種高度特異性促血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂的生長(zhǎng)因子，也是一種從牛垂體濾泡細(xì)胞液中分離出來的誘導(dǎo)腫瘤血管生成的主要生長(zhǎng)因子，因它在人類多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，所以與腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切有關(guān)［17-19］。

在本研究中，子宮內(nèi)膜組織LP、VEGF的表達(dá)依次在對(duì)照組、非典型增生組與子宮內(nèi)膜癌組逐漸增強(qiáng)，提示子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展具有較強(qiáng)的血管依賴性，表明LP參與子宮內(nèi)膜癌的形成，而且LP與VEGF的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌組中呈正相關(guān)關(guān)系，進(jìn)一步說明瘦素在血管形成與癌癥發(fā)生之間起正向協(xié)同作用，但LP在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制中尚不明確，其中樞作用的實(shí)現(xiàn)主要是通過下丘腦-神經(jīng)肽通路，主要通過細(xì)胞因子信號(hào)途徑把JAK激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)錄活化因子信號(hào)，以上調(diào)VEGF而參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。文獻(xiàn)［20］報(bào)道，STAT反義寡聚糖脫氧核苷酸、負(fù)向STAT蛋白或STAT RNA干擾技術(shù)及STAT蛋白功能的小分子抑制劑可明顯抑制腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)外的生長(zhǎng)和增殖。本研究發(fā)現(xiàn)，通過比較LP在子宮內(nèi)膜癌組的不同病理分級(jí)中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)LP的表達(dá)陽(yáng)性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明瘦素可能僅對(duì)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生起作用，而對(duì)該疾病的發(fā)展及預(yù)后作用不大。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制是由多基因和多外在因素共同作用的結(jié)果。LP、VEGF與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)，有望成為腫瘤靶向治療的新靶點(diǎn)，從而為子宮內(nèi)膜癌的預(yù)防和治療提供重要參考。

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Expression and Significance of Leptin and Vascular Endothelial Growth Factor in Endometrial Lesions

WU Xiao-rong，MO Yu.//Medical Innovation of China，2016，13（27）：024-027

Objective：To study the difference of the positive expression rates of leptin（LP） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in different endometrial diseases，analyze the correlation in the positive expression rate and explore the significance in different endometrial lesions of two groups.Method：From January 2006 to January 2015，78 cases of endometrial lesions in our hospital were selected as the research objects，they were divided into the endometrial cancer group of 48 cases and the endometrial atypical hyperplasia group of30 cases according to the pathological results，another 24 cases of normal proliferative phase of the uterus with cervical intraepithelial neoplasia （grade Ⅱ to Ⅲ） were selected as the control group.Expression of the two group in endometrial tissue was determined according to the staining degree and area of LP and VEGF，and analyzed the correlation of this two index in endometrial cancer group.Result：LP and VEGF expressed in the endometrial tissues of each group，strong positive expression and the highest positive rate was the most（P＜0.05）.LP expression was positively correlated with VEGF（r=0.40，P＜0.05），there was no difference in the expression of LP in different pathological grades of endometrial cancer group and the expression of VEGF was enhanced with the increase of pathological grade.Conclusion：The occurrence and development of endometrial cancer are the result of multiple genes and many external factors.VEGF，LP are closely related with the occurrence and development of endometrial cancer，it expect to become a new target for tumor targeted therapy，so as to provide an important reference for the prevention and treatment of endometrial cancer.

Leptin； Vascular endothelial growth factor； Endometrial lesions； Expression；Significance

2014年度湛江市第三批非資助科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（2014B01160）

①?gòu)V東省湛江中心人民醫(yī)院 廣東 湛江 524000

吳小容

（2016-06-02） （本文編輯：李穎）